高效液相色谱法测定牛黄清火丸中黄芩苷的含量

1、高效液相色谱法测定牛黄清火丸中黄芩苷的含量                         【摘要】  目的：建立牛黄清火丸的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱：Thermo ODS-2HYPERSIL C18（4.6mm×250mm，5m），流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液（45：55，V/V），流速：1.0ml·m

2、in-1，检测波长：312nm，柱温：30。结果：黄芩苷在0.010.06mg·ml-1范围内线性关系良好（r =0.9996）；平均加样回收率为99.06%， RSD=0.8%（n=9）。结论：该方法简便易行，结果准确可靠，可适用于牛黄清火丸的质量控制。 【关键词】  高效液相色谱法 牛黄清火丸 黄芩苷 含量测定    Determination of Baicalin in Niuhuangqinghuo pills by HPL    【Abstract objective】To set up a metho

3、d for quality control of Niuhuangqinghuowans. METHOD HPLC method was developed to quantitative determination. COLUMN C18-Thermo ODS-2HYPERSIN(4.6mm×250mm,5m).The mobilic phase was methanol-0.4%phosphoric acid solution (45:55V/V).The column temperature was 30,the  wavelength for detection w

4、as 312nm,flow rate was 1.0ml·min-1. RESULTS  The Baicalin average of recovery rate was 99.06%, and RSD was 0.8%(n=9). CONCLUSION  The method is simple, accurate and suitable for its assaying.    【Key words】HPLC；Niuhuangqinghuo pills；Baicalin；determination  

5、60; 牛黄清火丸为卫生部药品标准第七册（中药成方制剂）收载的品种，由黄芩、桔梗、牛黄、山药、丁香等9味中药组成，具有清热、散风、解毒之功效。临床用于肝胃肺蕴热引起的头晕目眩，口鼻生疮，风火牙痛，咽喉肿痛，痄腮红肿，耳鸣肿痛1，疗效良好。处方中黄芩为君药，黄芩苷为其主要有效成分，原标准中只有显微鉴别和薄层色谱。为了更好地控制制剂的内在质量，本文采用高效液相色谱法测定牛黄清火丸中黄芩苷的含量，以期为该制剂的质量提供快速、准确的测定方法，现报告如下。    1  仪器与试药    LC2010A 高效液相色谱仪，CLASSVP

6、色谱工作站；黄芩苷对照品（批号：110715-200212），由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用；牛黄清火丸为市售样品（哈药集团世一堂制药厂，规格3g/丸，批号：0604158，0604272，0605126）。甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。    2  方法与结果    2.1  色谱条件与系统适用性试验    色谱柱：Thermo ODS-2HYPERSIN C18 (4.6mm×250mm，5m)；流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液（45：55，V/

7、V）；检测波长：312nm；流速：1.0ml·min-1；柱温：30。理论板数按黄芩苷峰计应不低于5000。    2.2  溶液制备    2.3  专属性试验    分别精密吸取供试品溶液、阴性对照溶液和对照品溶液各10l注入液相色谱仪，记录色谱图（图1）。由图1可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间（黄芩苷11.850min）的色谱峰，阴性试验无干扰，证明本法可行。    2.4  线性关系考察 

8、   精密吸取黄芩苷对照品贮备液（浓度：0.1mg·ml-1）各适量，分别置于10ml量瓶中，加甲醇定容，配成浓度分别为0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06 mg·ml-1的溶液6份，摇匀，用0.45m微孔滤膜过滤。精密吸取续滤液各10l，注入液相色谱仪，测得峰面积。以峰面积（A）为纵坐标，其浓度（C）为横坐标，得黄芩苷的回归方程为：A=28905511.43C4455.07，r =0.9996（n=6）。结果表明，黄芩苷在0.010.06 mg·ml-1范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系。  

9、0; 2.5  精密度和稳定性试验    精密吸取黄芩苷对照品溶液（0.03 mg·ml-1）10l，在上述色谱条件下重复进样5次，求得黄芩苷溶液峰面积的相对标准偏差（RSD）为0.8%，表明精密度较好。取同一对照品溶液，在0、4、8、12、24h分别进行测定，结果表明黄芩苷对照品溶液的峰面积在24h内稳定，RSD为0.7%（n=5）。                  

10、60;              2.6  重复性试验    2.7  加样回收率试验    2.8  样品含量测定    分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定三批样品中黄芩苷峰面积，按外标法计算其含量（n=5），结果见表2。根据三批样品所测结果，暂定每丸牛黄清火丸的黄芩苷含量质控定量限为25mg。表1             黄芩苷加样回收率试验    3  讨论    3.1  通过对3批样品中黄芩苷的测定，结果表明最高含量为27.10mg·丸-1，最低为26.09mg·丸-1 ，综合考虑确定限量每丸含黄芩苷不得低于25mg。    3.2  流动相的选择 试验中曾反复试用过不同比例的甲醇和不同浓度