消毒剂对手消毒模拟现场试验

1、消毒剂对手消毒模拟现场试验2.1.2.5.1目的 用于测定消毒剂对人工污染于手表面细菌的杀灭作用，并作为确定该 消毒剂对手消毒实用剂量的参考。2.1.2.5.2试验器材(1) 大肠杆菌 8099 或 NCTC 10538，对尚需用于杀灭其他特定细菌 目的者，可增用该特定细菌进行试验。 菌悬液制备按 2.1.1.2 规定的 方法和要求进行。(2) 胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA :见附录A。(3) 胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSB :见附录 A。(4) 中和剂(以 TSB 为溶剂，经鉴定合格)。( 5)液体肥皂 200g/L 。(6)参考样品：正丙醇 60% (V/V)与异丙醇 60% (V/V)

2、。(7)标准硬水:见附录 A。( 8)磷酸盐缓冲液 (PBS， 0.03mol/L ， pH7.2) 。( 9)无菌纱布巾。( 10 )吸管、试管、平皿若干。( 11)振荡混合器。2.1.2.5.3试验步骤(1) 菌悬液的制备 取 2 支在 TSB 中培养 18h24h 的大肠杆菌培养 物分别接种于 1LTSB 大三角烧瓶中，在 36C士 1C培养箱中培养 18h 24h,用 TSB 将其稀释为 2X108cfu/ml2X109cfu/ml 菌悬液。(2)将 12 名15 名志愿者随机分为两组，第一组使用参考样品， 第二组使用试验样品( 3)使用液体肥皂洗手 1min 去除手表面污染的自然菌，

3、然后用无 菌纱布将手擦干。(4) 将 2X108cfu/ml- 2X109cfu/ml 大肠杆菌的菌悬液放入一无菌容 器中，(5)将手掌中间到指尖部位浸入菌悬液中，手指分开，停留5s,将 手离开菌悬液，在空气中干燥3min。(6) 干燥后立即将拇指与其他手指尖在含 10ml TSB 的平皿中搓洗1mi n,取适当稀释度接种平皿。计数菌落数，作为试验前菌数。( 7)不再重复污染手,立即进行消毒处理。(8)试验样品组：按说明书介绍的用量、作用时间和使用频率以标 准的洗手方法(如图 2-1)搓擦 30s60s (卫生手消毒)或最长 5min(外科手消毒)。以流动的自来水冲洗 5s，抖掉手上残留的水。

4、立 刻将拇指与其它手指尖在含 10ml 中和剂的平皿中搓洗 1min,做适当 稀释后，分别取样液 1.0ml 以倾注法接种两个无菌平皿，放 37C恒 温箱培养 48h，计数菌落数。(9) 参考样品组：对于卫生手消毒,取 60%异丙醇 3 ml 到入手心中, 按标准的洗手方法用力搓擦 30s。以确保手的所有部位均匀接触异丙 醇。重复使用异丙醇按上述方法搓擦使总的搓擦时间为60s。对于外科手消毒，使用 60%E 丙醇 3ml，按标准的洗手方法用力搓擦，当接近干燥时，再加 3ml 正丙醇搓擦。以保持作用 3min。用流动的自来水冲洗 5s，抖掉手上残留的水。其余步骤与试验样品组相同。1.掌心对掌心搓

5、擦2. 手指交错掌心对手背搓擦3. 手指交错掌心对掌心搓擦4. 两手互握互搓指背 5. 拇指在长中转动搓 擦 6. 指尖在掌心中摩擦 图2-1 标准的洗手方法(10)在试验当日，第一组与第二组样品对换，重复上述试验(11)分别计算参考样品组和试验样品组的菌数减少的对数值。2.1.2.5.4评价规定(1)试验样品的杀灭对数值大于或等于参考样品的杀灭对数值为合 格。(2)若试验样品的杀灭对数值小于参考样品的杀灭对数值， 应进行统 计学处理，以确定差异是否显著。(3)若试验样品的杀灭对数值不显著小于参考样品的杀灭对数值， 可 判为消毒合格。若试验样品的杀灭对数值显著小于参考样品的杀灭对 数值，表明该试验样品不符合本规范的要求。2.1.2.5.5注意事项(1)试验必须在同一受试者、 同一天、相同环境、 同样条件下进行， 使试验样品和参考样品的结果具有可比性。(2)所有受试者应年满 18 岁，身体健康。手部皮肤应无破损、无皮 肤病，手指甲短而干净。(3) 试验用菌悬液应在第 1 只手浸入后 3h