正交试验法优化复方枳实厚朴汤的提取工艺毕业论文

1、. . . . 毕业论文论文题目：正交试验法优化复方枳实厚朴汤的提取工艺目 录一、论文1、标题和作者22、中文摘要与关键词23、英文摘要与关键词24、前言25、正文36、讨论67、参考文献78、文献综述89、致与声明11二、导师评阅意见表三、实习总结枳实厚朴汤中枳实的提取工艺研究晓微（中医学院） 关志宇（中医学院药学院）中文摘要目的：研究复方枳实厚朴汤的最佳提取工艺。方法：采用L正交试验，用总黄酮的含量为指标，考查提取时间，提取次数，加水量对提取结果的影响。结果:枳实厚朴汤的最佳提取工艺为在10倍加水量，90min的提取时间下提取两次。结论：采取正交设计筛选出的该工艺，方法较好，操作简单、重现

2、性好、有效成分提取率高、工艺可行。关键词：枳实 提取工艺 正交试验 总黄酮ABSTRACTPurpose:Study the effect of compound frutus aurantii magnolia officinalis soup. The best extraction technologyMethods:With orthogonal experiment, byLflavonoids content as the index, examines extraction time, extraction times, water added to affect the res

3、ults of extracted.Results: Frutus aurantii magnolia bark the best extraction technology for soup in 10 instead of water, 90min extracting time next extraction twiceConclusion:Take orthogonal design method of this process, were good, simple operation, good reproductivity, extraction technology, high

4、effective components feasible.Keywordimmature bitter orange；Extraction technology；Orthogonal test；flavonoid前言枳实厚朴汤，处方来源家塾方是由枳实、厚朴等药材组成的复方汤剂，方中用枳实“能消心下痞塞之痰，泻腹中滞塞之气，推胃中隔宿之食，消腹连年之积”，为脾胃胀痛之主药，与苍白术合用理气导滞，消补兼施，以助其升清降浊之枢机，厚朴，行气消积，加强枳实消胀除满之力，该药方主治虚滑泻痢，久不愈者1。为了更好地发挥枳实厚朴汤的药效，本文以总黄酮的含量为指标，采用正交试验法对该汤剂的提取工艺进行优选，

5、从而确定最佳提取条件。正文1. 试验材料1.1 试验药材 麸炒枳实，购自樟树天齐堂中药饮片。厚朴，购自汇仁药业。1.2 试验试剂 甲醇（振兴化工厂，批号20101120）为分析纯，水为重蒸水。1.3 仪器设备 752型可见分光光度计（欣茂仪器），SHZ-D(III)循环水式真空泵（巩义市予华仪器XX公司），数显恒温水浴锅HH-4（电器）、KQS200DA型数控超声波清洗器（市超声仪器）、真空干燥箱-D2（一恒科学仪器）、RE-52D旋转蒸发器（青浦沪西仪器厂），ZNHW智能恒温电热套（巩义市予华仪器XX公司）、BP.II型马头牌架盘药物天平（医用激光仪器厂）2. 提取工艺优选2.1 正交试验

6、采用恒温水浴提取法提取复方中药，温度设置在100，选择加水量（A）、提取时间（B）、提取次数（C）3个指标作为考察因素，每个因素选取3水平，因素水平详见表1。选择L 9 (34) 正交表进行试验，每次取药材46.5g进行提取，后在水浴锅上浓缩至浸膏状，再放入干燥箱中干燥，称重，备用。表1 因素水平表Tab1 Levels of factors水平因素加水量（倍） 提取时间（min） 提取次数（次）（A） （B） （C）1236 30 18 60 210 90 32.2 枳实中总黄酮的含量测定根据文献2,采用紫外分光光度法测定枳实总黄酮含量。而柚皮苷紫外最大吸收峰与总黄酮一样,分别在283 nm

7、处产生最大吸收,且柚皮苷可自中国药品生物制品检定所购买,因此,使用柚皮苷作为总黄酮测定的对照品。2.2.1对照品溶液的配制 精密称取柚皮苷对照品5. 28 mg ，置50ml量瓶中,甲醇定容至刻度,作为对照品溶液。2.2.2 标准曲线的绘制 精密吸取对照品溶液0. 5 , 1. 0, 1. 5, 2. 0, 2. 5, 3. 0 ml于10 ml量瓶中,甲醇定容至刻度,以甲醇为空白, 在283 nm 处测吸收度。得回归方程为: A= 0. 027C- 0. 001 , r = 0. 9999。线性围为5. 2831. 68g·ml-132.2.3 供试品溶液的制备 将正交工艺所得的干

8、浸膏,分别精密称取约50 mg置25 ml容量瓶中,加甲醇定容至刻度,超声15 min后冷却至室温,加甲醇至刻度,摇匀,过滤,精密吸取续滤液5 ml置100 ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,得供试品溶液3。2.2.4 精密度试验 取标准对照液2.0mL，照2.2.3方法制备标准品供试液和空白对照液在283nm 波长处重复测定5次，其结果RSD 为1.04 %，表明仪器精密度符合要求。2.2.5 重现性试验 取同一供试品样品5份，每份3g，精密称定，按“供试品溶液的制备”项下的方法制备样品溶液，再按“对照品溶液的制备”项下的方法重复操作，计算总皂苷的含量。结果总黄酮的平均含量为9.73%，RS

9、D=3.95%（n=5）。由于RSD<5%，表明方法的重复性较好。2.2.6 样品含量测定 分别将9种工艺下的供试品在紫外分光光度计中进行测定，得到各供试品的吸光度，从而计算出总黄酮的含量（mg/ ml）,结果见表2 表2 正交试验表Tab 2 Results of orthogonal experiment试验号因素总黄酮含量ABCD11111 1.7821222 1.9931333 2.7242123 3.2952231 3.14623124.0073132 4.1683213 4.7793321 5.04K16.499.2310.329.96K210.439.9010.5510.1

10、5K313.9711.7610.0210.78SS9.3340.4440.1590.047R2.490.450.180.272.4 结果分析2.4.1 直观分析采用中药传统的水煎煮提取枳实厚朴汤，以总黄酮的含量为指标，对影响枳实提取工艺的因素进行了分析。通过比较各因素的极差值（R）可以看出，各因素对该指标影响大小的排列顺序为A>B>C，再考查因素之间各水平之间的差异，发现最佳提取工艺为A3、B3、C2，即10倍加水量，90min提取时间的条件下提取二次。2.4.2方差分析 结果详见表3。 表3 方差分析结果Tab 3 Results of variance analysis方差来源

11、 离差平方和 自由度 方差 F 显著性A 9.334 2 4.667 75.996 0.013 B 0.444 2 0.222 9.326 0.097C 0.159 2 0.0795 0.383 0.723D 0.047 2 0.0235表3方差分析结果表明，加水量对提取液中总黄酮含量的影响有极显著意义，提取次数和提取时间的影响较小。通过对试验结果进行的正交分析可以确定皮煎煮工艺的最佳条件为A3、B3、C2，确定最佳的提取方法为A3、B3、C2，即用10倍量的水、90min的提取时间和2次得提取次数。3 验证试验以正交试验的最佳提取条件进行验证试验，经过三次平行试验，由结果可知，应用优化后试验

12、条件进行提取，提取率较高，重复性较好。4 讨论 尽管有研究4表明醇提枳实药材优于水提，但考虑到实验成本以与煎煮药材的便利性，本文最终还是选取了以水为溶剂的正交试验。在本次实验中，作者以枳实中的总黄酮为指标，通过对实验结果进行的正交分析可以确定该复方煎煮工艺的最佳条件为用10倍加水量，90min提取时间的条件下提取二次，且验证试验也表明该工艺合理、稳定、提取率高，为实际生产提供了理论依据，同时本研究结果也对开发利用枳实资源具有一定的意义。参考文献：1 立伟，桂英.枳实厚朴汤治疗功能性消化不良65例J.光明中医，2011，26(1)：73-742 韦黄杰，舒 斌，玉俊，等.分光光度法测定化橘红总黄

13、酮含量 J .中成药，2005，27 (3) ：3543 文娟，耿秋菊，蔡蓉.枳实药材中总黄酮提取工艺的研究J .时珍国医国药，17(11)：2233-22354 王淳, 振丽，宋志前，林福，吕署一，郝兴辉.中药枳实提取工艺研究J.中国实验方剂学杂志，14（9）23-25文献综述枳实综述摘要:枳实是临床消化科常用中药，且疗效显著，现对其基本信息，药性，药理作用，理化鉴别，提取等方面做如下综述。关键字：枳实 药理作用 提取工艺 含量测定枳实为芸香科植物酸橙与其栽培变种或甜橙的干燥幼果，主产于、等地。56月间采摘或采集自落的果实，自中部横切为两半，晒干或低温干燥，较小者直接晒干或低温干燥。用时洗净

14、、闷透，切薄片，干燥。生用或麸炒用。药品化义：“枳实专泄胃实，开导坚结，故主中脘以治血分，疗脐腹间实满，消痰癖，祛停水，逐宿食，破结胸，通便闭，非此不能也。若皮肤作痒，因积血滞于中，不能营养肌表，若饮食不思，因脾郁结不能运化，皆取其辛散苦泻之力也。为血分中之气药，惟此称最。”1. 基本信息枳实1又名鹅眼枳实，英文名是Immature Bitter Orange、Immature Sweet Orange Fructus Aurantii Immaturus 拉丁名是.Citrus aurantium L.或者Citrus sinensis （L.）Osbeck，一般以植物的幼果入药。按功效分类

15、属于理气药，消食药，性苦、辛、寒，归脾、胃、肝心经，功效主治有积滞停、痞满胀痛、大便秘结、泻痢后重、结胸、胃下垂、子宫脱垂脱肛。用法用量有服：水煎，3-10g；或入丸、散。外用：适量，研末调涂；或炒热熨2。2. 药理作用2.1 对心血管系统的作用 枳实对心血管的药理作用早在上世纪就有报道，例如其显著的升压效应，类似于去甲肾上素，且持续时间长，增强收肌收缩力，减缓心率和增加心血输出量，增大冠脉流量。增大肾血流量，改善末梢微循环等。这些药理作用已经广泛应用于临床。现代研究又发现枳实可浓度依赖性地增加家兔主动脉力，使主动脉平滑肌收缩。酚妥拉明、异搏定、无钙 Krebs液均可明显减小枳实的作用，此作用

16、可能与激活平滑肌细胞膜上的肾上腺素能受体、胆碱能M 受体与异搏定Ca2+ 敏感通道有关，并对脑外存在一定的依赖性，与平滑肌细胞膜上组胺H1受体无关3。2.2 对胃肠平滑肌的作用 枳实能显著提高食极小鼠的酚红排空率，改善食积小鼠胃肠活动功能减弱的状态4。枳实能使大鼠消化间期移行性复合运动MMC活动时相延长，即增加周期的峰电位数增加，并能使绵羊小肠电活动增强,减短MMC II相时程，提高III相的发生机率和峰电强度5，因平滑肌的收缩强度和收缩持续时间与峰电位发放的频率多少有关，故能增强平滑肌的收缩强度和收缩持续时间6。对于IDMEC(小肠消化间期综合肌电)，枳实可使其周期和I相时程缩短，II相时程

17、延长，峰电位数增加，从而加强小肠运动7。无论是使 IDMEC 的峰电位增高还是使 MMC活动相时程延长，均能使平滑肌收缩加强，从而对消化起到一定的促进作用。2.3 对子宫的作用 药理研究证实枳实能使家兔子宫收缩有力，力增强，收缩节律增强，但对小鼠的离体子宫则主要表现为抑制作用，枳实水提醇沉物能兴奋离体家兔环行阴道平滑肌，并能诱发肌条的节律性收缩活动或增强原有自发性收缩肌条的收缩力与收缩频率8。2.4对血液流变学的影响 枳实对健康大鼠与血癌模型大鼠均存在明显的抗血小板聚集与抑制红细胞聚集的作用，其作用优于阿司匹林，并呈明显的量效关系。枳实活血化瘀作用可能是通过对血小板聚集、红细胞聚集的抑制作用达

18、到的，枳实有望作为一种有效的血小板聚集抑制剂在临床中应用9。2.5 镇痛作用 枳实的挥发油不但能够对胃肠平滑肌产生效应，还能够对大鼠离体肠平滑肌的收缩呈先兴奋后抑制得作用，而且可明显减少醋酸引起的小鼠扭体反应次数与自发活动次数，并表现出了一定程度的镇痛和中枢抑制作用10。2.6抗菌作用枳实挥发油对耐药金葡萄球菌存在抑制作用，柠檬烯则有镇咳、祛痰、抗菌的作用;芳樟醇则有防腐抗菌、抗病毒、镇静的作用11。2.7抗氧化作用 研究表明枳实提取物能够有效地清除羟自由基、超氧阴离子自由基、DP-PH 自由基，还具有抑制脂质过氧化作用，具有进一步研究和开发的价值12。2.8护肝和降血糖作用枳实提取物治疗组与

19、糖尿病模型组比较，血糖水平明显降低，谷胱甘肽含量显著增加，谷胱甘肽过氧化物酶活性、丙二醛和 NO含量显著减小。超过氧化物歧化酶活性有所增强。光镜下枳实提取物治疗组肝组织细胞损伤较糖尿病组降低，显示具有增强肝脏的抗氧化的能力，降低肝细胞损伤的作用，同时高剂量时能显著降低血糖13。2.9 抗休克作用 低浓度枳实提取液，使豚鼠心室肌细胞 L 型钙电流浓度依赖性地增强，对钙通道具有促进开放的作用。高浓度枳实提取液，可对心室肌细胞 L 型钙电流具有抑制作用，并有抑制钙通道开放的作用，临床应用枳实提取液用于治疗各种休克，包括急性心肌梗塞心源性休克、感染性休克等均获得较好的疗效 14。2.10其他作用 枳实

20、还具有抗溃疡作用、利胆作用、利尿作用、抗过敏作用等。2化学成分枳实所含化学成分较为复杂，主要含有3种类型的有效成分：生物碱类成分:上世纪 70年代我国学者从枳实中分离得到两种子选有升压作用的有机碱辛费林和 N 甲基酪胺15。黄酮苷类 :主要在橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷桔蜜黄素 , 3, 5, 6, 7, 8, 2, 3, 4 甲氧基黄酮等16。挥发油成分枳实挥发油成分以萜类经合物中的单萜为主，分别是柠檬烯、芳樟醇、异松香烯等17，主要为柠檬烯18。此外 ，枳实中还含有酯类成分，为柠檬苦素此外，枳实中还含有酯类成分，为柠檬苦素。有机酸类成分主要为柠檬酸酸和苹果酸，并含根皮酸 - D葡萄糖苷、糖类、

21、维生素、钙、磷、铁等。国外对枳实类药材的化学成分定量研究主要集中在辛弗林和 N药材的化学成发定量研究主要集中在辛弗林和 N甲基酪受酸、橙皮苷、总黄酮含量与挥发油的测定19。3. 提取工艺3.1 挥发油的提取方法1取2kg枳实粗粉，加入蒸馏器中,以水浸泡后，直接加热蒸馏，直到无油馏出，停止蒸馏，冷却，分层，收集油层将油相脱胶，脱色后得到淡黄色挥发油29g。 方法2将枳实粗粉置于有孔隔层板网上，加热底部的水产生蒸汽，挥发油随水蒸气蒸馏出。挥发油是一类具有芳香气味的油状液体，主要有萜类化合物、芳香族化合物、脂肪族化合物组成，常呈无色或淡黄色液体，不溶于水，可随水蒸气而蒸馏出19。3.2 果胶的提取提

22、取挥发油后的渣以热水提取，果胶、辛弗林、柚皮苷、新橙皮苷溶于热水而被提取出。考察了水的用量、提取时间、提取温度对4种成分提取得率的影响,可知20倍量(V/m)的水在90下提取15h,4种成分可最大限度地被提取出。水液调pH = 2后以732型阳离子交换树脂吸附，用水洗脱出不被树脂吸附的果胶、柚皮苷、新橙皮苷，而辛弗林成盐后形成阳离子被树脂吸附从而达到分离，水洗脱液浓缩，醇沉，将柚皮苷、新橙皮苷溶于醇液而沉淀出果胶。果胶分离中主要考察浓缩液的密度、醇的浓度与醇的用量。分别取50g枳实渣以正交试验进行考察，可知最佳工艺:水液质量浓度16g/mL，醇沉质量分数80%，乙醇用量20倍(V/m )。粗果

23、胶以水热溶后加入5%活性炭在80下保温30min，趁热过滤，滤液浓缩至干，真空干燥粉碎得白色胶粉，称重76g，测得含量为93%质量分数20。3.3 柚皮苷的提取3.2中的醇液中含有柚皮苷和新橙皮苷。醇液浓缩回收乙醇得浸膏，利用柚皮苷和新橙皮苷在不同酸度下的溶解性差异将2者分离。将 50 g枳实渣的醇浸膏以澄清石灰水溶解、过滤 ,滤液以梯度酸沉淀将其分离，鞣质类成分与钙离子螯合。主要考察了石灰水的碱度、用量与剩余残渣的量。残渣的量不变说明浸膏中能被碱水溶出的成分已全部溶出,因此以残渣的量研究石灰水溶解的最佳工艺，以 pH =14的澄清石灰水8倍量(V /m)溶解可很好地溶解有效成分而去除杂质。得

24、到的淡黄色结晶物过滤，固形物以热乙醇溶解后，加入少量活性炭在60保温30min，趁热过滤，滤液澄清透明，减压浓缩至小体积，结晶,得类白色结晶 26 g，测其含量为98.6%21。3.4 新橙皮苷提取将上一步中的沉淀出柚皮苷的液体再次调酸碱度，析出黄色新橙皮苷，结晶物以乙醇溶解，加入少量活性炭，在60保温30m in后趁热过滤，滤液浓压浓缩至适当体积，静置析出类白色结晶新橙皮苷为白色针状晶体由稀乙醇或稀醋酸结晶，熔点236 237，加2%盐酸或硫酸水解产生桔皮素。新橙皮苷也属于黄酮类化合物 ,在橙皮苷的提取中也随之提出,但与柚皮苷性质相似，调酸后游离但无沉淀析出，可能是因为含量较低的缘故22。3

25、.5 辛弗林的提取3.2 中的以 732型强酸性阳离子树脂吸附辛弗林，以氨水洗脱，薄层色谱TLC 检查，直至无辛弗林洗出时为止，将含辛弗林的成分浓缩、结晶、重结晶,得白色晶物0.25 g,含量 98.4% 。辛弗林属麻黄碱类，易溶于酸水中，因此在果胶的提取中与果胶同时提出，由于分子结构中存在酚羟基和氨基，具有两性，可与碱成盐，而游离的辛弗林不溶于水，易溶于有机溶剂，成盐后则易溶于水而难溶于有机溶剂，在离子交换树脂层析时易发生消旋。在辛弗林的提取中也可以分离出鲸鱼胺生物碱23。3.6 橙皮苷的提取枳实水提后的渣干燥后分别取50g以饱和石灰水提取过滤提取液以10%盐酸调至酸性后沉淀，过滤沉淀物，水

26、洗至中性再将沉淀物溶于氢氧化钙液中，加热、保温、调酸性、搅拌、保温、降温至室温、过滤 ,滤饼以水洗至中性，烘干得橙皮苷。以 T型关联度分析法考察了碱水的 pH、酸化 pH、沉淀温度、沉淀时间等因素的影响，结果显示影响得率的最大因素为石灰水的碱度，影响含量的最大因素为沉淀时的温度，得到最佳工艺为:饱和澄清石灰水提取，提取液调pH = 4, 60 下沉淀20h。在此工艺下橙皮苷得率25.2%，含量质量分数为96.4%24。3.7 柠檬苦素的提取以碱液提取橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷后的渣晾干，以等量(V/m ) 丙酮在60 下回流提取2次，滤液合并浓缩再以二氯甲烷萃取3次，合并二氯甲烷液，浓缩、析晶，

27、将晶状物热溶于丙酮，加入少量活性炭，保温30 min，趁热过滤，滤液浓缩并静置结晶,得白色结晶物25。3.8枳实黄酮的提取 3.7中的渣含有枳实黄酮，以乙醇提取，提取液回收乙醇后喷雾干燥。以均匀设计法考察了乙醇浓度、乙醇用量、提取温度、提取时间对枳实黄酮得率的影响，结果表明乙醇浓度、提取温度、乙醇用量对提取影响均很大，考虑到实际操作，可将最优条件定为乙醇体积分数为80%，料液比15：1(V/m )，提取温度70，提取时间15h，该工艺下枳实黄酮得率10.8%26。3.9枳实高蛋白饲料3.8中的枳实渣可制备高蛋白饲料，枳实渣含丰富的碳水化合物、维生素、矿物质、氨基酸，但蛋白质含量不高，经发酵后可

28、产出高蛋白饲料27。4鉴别(1) 取本品粉末0.5g，加甲醇 10ml，加热回流10分钟，滤过，取滤液1ml，加四氢硼钾约5mg摇匀，加盐酸数滴，溶液显樱红色至紫红色（检查二氢黄酮类成分）2。(2) 薄层色谱 取样品粉末0.5g，加甲醇10ml，回流1小时，滤过。滤液蒸干，残渣加甲醇4ml溶解，放置30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。取辛弗林（对辛福林）加甲醇溶解，制成每1ml含3mg的对照品溶液。分别点于硅胶H-CMC板上，以甲醇丙酮-氯仿-浓氨水(3:3:3:1)展开15cm，取出,，晾干，喷以0.5%茚三酮乙醇溶液。于105加热约10分钟，供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上,显一样的紫

29、色斑点2。5成分含量测定5.1. 辛弗林、N甲基酪胺等生物碱的含量测定5.1.1辛弗林的甲醇溶液经紫外扫描确定在275nm有最大吸收，故选择UV275nm为检测波长。采用HPLC的方法对枳实中辛弗林的含量进行测定。5.1.2在测定不同批次的枳实药材中，发现辛弗林含量波动较大，易导致该制剂含量差异较大，因此须控制药材质量采用HPLC法测定枳实药材中辛弗林的含量，方法快速准确，样品处理简便易行，可用于该制剂的质量控制 。5.1.3药典上记载有用薄层色谱法测定辛弗林的含量。5.2. 橙皮柑、柚皮柑等的含量测定5.2.1采用HPLC法测定枳实中黄酮类成分橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷和芸香柚皮苷等4种指标成

30、分的含量。在等度洗脱的条件下,用反相HPLC测定不同产地枳实橙皮甙和柚皮甙的含量,方法具有简单快速、精密度高、结果准确等优点,且样品经提取、浓缩、定容后不需要进一步的纯化。5.2.2采用薄层色谱法测定橙皮苷、柚皮苷的含量也比较常见5.2.3毛细管电泳法也能够快速测定橙皮苷、柚皮苷成分的含量。5.2.4采用分光光度法测定橙皮苷的含量 仪器采用751G分光光度计，先制备标准曲线，精密称取橙皮苷对照品适量，加70乙醇溶液制成每毫升含橙皮苷0.0536mg的对照品溶液。精密吸取2、4、6、8ml量瓶中，加1mol/L氢氧化钠乙醇液0.1ml，加醇液至刻度，摇匀、放置30min。用同样方法处理溶剂做空白

31、对照，在分光光度计上，于362±2nm处测定吸光度，以吸光度，以吸光度为纵坐标，样品坐标为横坐标作图，橙皮苷浓度在0.050.4mg/ml围呈线性关系，计算，回归方程为：Y1.573X4.72×10-3 ，r0.9999然后开始样品测定，精密称取药粉1g，准确加入碱液25.00ml后密闭浸泡15h，摇匀，滤过。精密吸取滤液10ml置50ml量瓶中，用醇液至刻度，摇匀，放置片刻，滤过。精密吸取滤液5ml于50ml量瓶中，用醇液稀释至刻度，摇匀。再精密吸取稀释液2ml于10ml量瓶中，以醇液稀释至刻度，摇匀。以同样处理的溶剂作空白对照。测定吸光度。按回归方程计算结果，得到橙皮苷

32、的含量28。5.2.5橙皮苷的测定还可用薄层-分光光度法 仪器采用UV-300型紫外分光光度计，薄层色谱条件为薄层板：聚酰胺薄层板，展开剂：三氯甲烷-甲醇（9：1），制备标准曲线，精密称取橙皮苷对照品20mg，加2mol/L盐酸溶液20ml，在沸水浴中水解20min后，用乙酸乙酯提取4次（10,5,5,5ml），合并乙酸乙酯溶液，浓缩后定量转移至5ml量瓶中，加乙醇至刻度。精密吸取10、15、20、25l置5ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，在288nm处以乙醇为空白，测定吸光度。一浓度为横坐标，吸光度为纵坐标作图，橙皮苷在20100g/5ml围呈线性关系。然后开始样品的测定，精密称取枳实生药粉

33、末约1g,置具塞锥形瓶中，准确加入2.5氢氧化钠溶液25.0ml，摇匀后浸泡10h以上，滤过。精密吸取12.5ml,用浓盐酸中和后，加入4mol/L盐酸12.5ml，沸水浴中水解15min，冷却后，用乙酸乙酯提取3次（10,10,5ml），合并乙酸乙酯液，浓缩后定量转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度。准确吸取30l点于聚酰胺薄层上，用三氯甲烷-甲醇（9:1）展开，刮下枳实斑点置5ml具塞试管中，加5.0ml乙醇，振摇，置6070水浴中热浸15min，离心，吸取上清液，在波长处以随行聚酰胺为空白对照测定，计算得出橙皮苷的含量28。5.3. 挥发油的含量测定5.3.1本法适用于测定相对密度在1.0以

34、下的挥发油。取供试品适量(约相当于含挥发油0.51.0ml)，称定重量(准确至0.01g)， 置烧瓶中，加水300500ml（或适量）与玻璃珠数粒，振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热至沸，并保持微沸约5小时，至测定器中油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5mm处为止。放置1小时以上，再开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度0线平齐，读取挥发油量，并计算供试品中挥发油的含量（%）。5.3.2.本法适用于测定相对密度在1.0以

35、上的挥发油。取水约300ml与玻璃珠数粒，置烧瓶中，连接挥发油测定器。自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，再用移液管加入二甲苯1ml，然后连接回流冷凝管。将烧瓶容物加热至沸腾，并继续蒸馏，其速度以保持冷凝管的中部呈冷却状态为度。30分钟后，停止加热，放置15分钟以上，读取二甲苯的容积。然后照甲法自“取供试品适量”起，依法测定，自油层量中减去二甲苯量，即为挥发油量，再计算供试品中含挥发油的含量（%）19。 6. 小结通过对枳实的药性、药理作用、提取工艺、含量测定等方面的研究表明，枳实有效成分明确，药理作用广泛，毒副作用小，提取鉴别方法相对多样，具有较大的开发和研究价值。近年来研究

36、发现了枳实新的药理作用，但对其作用机理的研究较少，且从枳实中也分离出了几种新的化学成分，为了适应国国际市场的需要还应加大对枳实得研究力度。7. 参考文献1 国家中医药管理局中华本草编委会. 中华本草(精选本·上册). 科学技术, 1999:1328.2 中国药典委员会. 中国药典 S . : 中国医药科技，2010:第一部197.3 红芳，丹明，瞿颂义等. 枳实和皮对兔离体主动脉平 滑肌条作用机理探讨 J . 中成药, 200l, 23 (9) : 659660 4 新旺，任钧国. 枳实白术配伍的实验研究 J. 中医研究，2002，15 (6) : 23245 况 玲. 枳实对绵羊小

37、肠电活动的影响 J. 中医药研究, 1997, 13 (3) : 4950 6 王翠芬，德治，义全，等. 枳实对大鼠胃肠电活动影响的初步研究 J. 东南大学学报 , 2001, 20 (3) : 153154. 7 黄子荷，德治，义全，等. 阿托品对枳实增强犬小肠电活 动效应的影响 J. 中国中西医结合杂志, 1996, 16 ( 5) : 293. 294. 8 汤 容. 枳实和苦参对离体家兔阴道平滑肌收缩作用的研究. 时珍国医国药. 2001, 12 ( 11) : 973974.9 吉中强，纪文岩，宋鲁卿，等. 枳实对血癌模型大鼠血栓前状态的影响 J. 中医杂志, 2000, 22 (6

38、) : 360361. 10 胡盛珊，王大元，邱 萍，等. 枳实、枳壳挥发油对动物胃肠道的作用 J. 东南大学学报 , 2001, 20 (3) : 144145. 11 文基，绳金房. 天然活性成分简明手册 M : 中国医药科技 , 1998 12 焦士蓉，马 力，黄承钰，等.枳实提取物的体外抗氧化作用研究 J 中药材 , 2008, 31( 1) : 11311613 焦士蓉，黄承钰，王 波，等.枳实提取物对实验性糖尿病小鼠肝脏抗氧化防御功能的影响 J 卫生研究,2007, 36 (6) : 689692 14 方 芳，董敏，朱红，等.枳实提取液对豚鼠心室肌细胞 L 型钙电流的影响 J 医科大学学报 , 2003, 28 (4) : 353356 15 戴汉云，熊正东.化学合成枳实有效成分,对羟福林和N-甲基酪胺临床资料总结 J. 中国药学杂志,