褪黑素对小鼠肝纤维化形成的影响

1、    褪黑素对小鼠肝纤维化形成的影响        近年来，发现松果腺分泌的褪黑素(Melatonin,MT)有强大的抗氧化能力，可拮抗四氯化碳(CCl4)等所致的氧化性肝损伤1，2，但尚无MT防治肝纤维化的报道。本文在建立CCl4小鼠肝纤维化模型的基础上，观察了MT对肝纤维化形成的影响，以企探讨MT防治肝纤维化的作用及其机制。 材料和方法一、材料雄性昆明系小鼠(1820g)由安徽医科大学动物中心供应，食用标准丸状饲料。实验前随机分为正常对照组，CCl4模型对照组，CCl4

2、+MT组和CCl4+秋水仙碱组，每组动物1012只。CCl4系上海新中化学试剂厂产品，临用前用精制茶油配成20%CCl4油剂溶液。MT和秋水仙碱(Col)分别购自Sigma公司和上海试剂公司，溶于消毒生理盐水中备用。二、方法(一) 小鼠肝纤维化模型制备及药物处理：将20%CCl4油剂溶液按5ml/kg皮下注射，每5天1次，连续3个月。从用CCl4造模始，每天按20ml/kg容量灌胃给药1次。MT组按3个剂量组(0.01mg/kg,0.1mg/kg,1.0mg/kg)分别给药。秋水仙碱组按0.1mg/kg剂量给药。CCl4模型对照组给予等容积的生理盐水。(二) 病理观察：取肝脏左叶，HE染色下按

3、下述标准评判肝纤维化程度和记分3：“-”无成纤维细胞增生，记0分；“+”仅汇管区有少量成纤维细胞增生，记1分；“+”汇管区成纤维细胞增生并向小叶内延伸，呈较窄较短的纤维条索，记2分；“+”汇管区成纤维细胞大量增生并向小叶内大量延伸，纤维隔形成伴有小叶结构紊乱，记3分。统计各组肝纤维化平均得分和标准差(肝纤维化分数)，进行显著性检验。(三) 肝脏生化指标：肝组织羟脯氨酸(HYP)含量按许志勤法4测定，肝匀浆丙二醛(MDA)含量用TBA法检测。结果一、小鼠肝纤维化形成过程的观察在用20%CCl4诱导小鼠肝纤维化形成期间，小鼠肝纤维化程度逐渐加重。30d,60d和90d时的肝纤维化分数分别为0.43

4、±0.18,1.08±0.28,2.44±0.52，同期的羟脯氨酸含量分别为5.06±0.14,13.52±0.63,16.21±0.38，与同期正常对照组比较差异均有非常显著性(P<0.01)。二、MT对小鼠肝纤维化形成的影响表1显示，MT在0.11.0mg/kg剂量范围内，肝纤维化分数、肝组织HYP含量和肝匀浆MDA含量均明显下降，与同期CCl4模型组比较差异有显著性(P<0.05)；阳性对照药秋水仙碱的疗效与上述MT作用强度相近，但对肝匀浆MDA含量无明显影响(P>0.05)。表1MT对小鼠肝纤维化形成的影响(

5、±s,n=10)组别用药剂量(mg*kg-1*d-1)肝纤维化分数肝HYP含量(g/mg)肝MDA含量(nmol/g)CCl4NS2.44±0.5216.21±0.38254.2±48.2CCl4+MT0.012.43±0.4615.63±0.45245.6±46.20.11.96±0.38*11.48±0.36*216.4±31.8*1.01.87±0.41*11.18±0.32*207.6±29.4*CCl4+Col0.11.82±0.44*10.86

6、±0.41*238.2±37.8与CCl4组比较，* P<0.05 讨论长期持续应用CCl4可造成大鼠、狗等动物的肝纤维化模型，有关小鼠肝纤维化模型报道较少3。本研究在用CCl4诱导小鼠肝纤维化形成过程中，发现随着CCl4造模时间的延长，肝纤维化程度和肝脏HYP含量逐渐增加，至3个月时已形成明显的肝纤维化征象。由于本实验所用的昆明种小鼠动物价格低，动物易于处理，肝纤维化形成呈渐进过程，故认为这种小鼠肝纤维化模型适合药物防治作用的研究。近年来发现，MT有强大的抗氧化作用，其清除自由基的能力明显强于谷胱甘肽和维生素E，可拮抗CCl4，百草枯和细菌脂多糖等所致肝氧化性损伤1

7、。由于肝氧化性损伤与肝纤维化的形成关系密切5，因而本文研究了MT对小鼠肝纤维形成的影响。发现MT在降低肝脏脂质过氧化产物MDA含量的同时，明显抑制肝纤维化的形成，使肝脏纤维化分数和肝脏HYP含量明显下降。同期使用的阳性对照药秋水仙碱虽有类似抗肝纤维化作用，但由于MT具有抗氧化损伤的独特作用，且毒性小，安全性较高1，故有进一步深入研究的前景。安徽省自然科学基金项目(No.98-医-08)作者单位：230022合肥，安徽医科大学第一医院参考文献1.Reiter RJ,Melchiorri D,Sewerynek E,et al.A review of the evidence supporting

8、 melatonin's role as an antioxidant.J Pineal Res,1995,18:1-11.2.William MUD,Reiter RJ,Melchiorri D,et al.Melatonin counteracts lipid peroxidation induced by carbon tetrachloride but did not restore glucose-6-phosphatase activity.J Pineal Res,1995,19:1-6.3.程明亮，刘三都.肝纤维化与早期肝硬化.见：程明亮，刘三都主编.肝纤维化的基础研究和临床研究.北京：人民卫生出版社，1996：130-156.4.许志勤，高兰英.组织羟脯氨酸测定方法.解放军预防医学杂志，1990，8：40-42.5.Britton RS and B