大孔树脂分离纯化黄连总生物碱型号的筛选

1、2010年 1月第 27卷第 1期 January 2010, Vol . 27, No . 1 中药标准与工艺 收稿日期 :2009-04-15作者简介 :张英 (1976- , 女 , 讲师 , 硕士研究生大孔树脂分离纯化黄连总生物碱型号的筛选张 英 , 李卫民 , 高 英(广州中医药大学 , 广东广州 510405摘要 :【 目的 】 从众多的树脂型号中筛选出分离纯化黄连总生物碱效果较好的一种 。【 方法 】 选用 AB 28、 HP20、 LD605、ADS 23、 ADS 25、 D151、 DA 2201、 XAD7、 NK A 299种树脂 , 以黄连总生物碱的吸附率和解吸率为指

2、标进行初筛 , 并以盐酸小檗碱的解吸率为指标进行进一步的筛选 。 【 结果 】 9种树脂中 , ADS 23树脂的吸附和解吸能力均较强 , 总生物碱的吸附率 达到 97126%, 解吸率达到 84182%。 盐酸小檗碱的解吸量达到 91311mg 。 【 结论 】 ADS 23树脂对总生物碱及盐酸小檗碱的 吸附和解吸性能都较好 , 可用于黄连总生物碱的分离纯化 。关键词 :黄连 /分离和提纯 ; 总生物碱 /分析 ; 盐酸小檗碱 /分析 ; 大孔树脂中图分类号 :R28412 文献标志码 :A 文章编号 :1007-3213(2009 01-0049-04 黄连是毛莨科植物黄连的根茎 , 有效

3、成分主要 是生物碱 , 其中小檗碱的含量最高 , 可达 10%左 右 , 而且以盐酸盐的状态存在于黄连中 1。 黄连中的生物碱大多是季铵型生物碱 , ,有一定的极性1。 效成分时 , 因此 , 对于中药有效成分 或有效部位的纯化 , 树脂型号的选择非常重要 。根据已有的报道 , 目前常用于生物碱分离纯化 的 树 脂 型 号 有 DA 2201、 NK A 29、 D101、 LD605、 AB 28、 D151、 X AD4、 X AD7、 ADS 23、 ADS 25、 HP20227。 其中 , D101、 HP20、 X AD4实为同一种树 脂。故 本 研 究 将 从 DA 2201、

4、NK A 29、 LD605、 AB 28、 D151、 X AD7、 ADS 23、 ADS 25、 HP209种树脂中筛选出一种分离效果较好的型号 , 现报道如下。1 仪器与材料LC 210AT vp p lus 高 效 液 相 色 谱 仪(日 本 岛津 , SP D 210A v p p lus 紫外 可见检测器 , 紫外 可见 分 光 光 度 计 (Ther mo Electr on cor porati on , UVm ini 21240紫 外 分 光 光 度 计 。 AB 28、 HP20、 LD605、 ADS 23、 ADS 25、 D151均由天津欧瑞生物科技有限公司提供

5、, DA 2201、 NK A 29由沧州宝恩 化工有限公司提供 , XAD7由美国哈门罗斯公司提 供 , 黄连药材由北京同仁堂 (毫州 饮片有限责任公司提供 (Coptis ch inensis, (批号 : 由中国药品生物制品检定所提供 。2 方法与结果211 黄连提取液中总生物碱的测定 21111 标准曲线的绘制2111111 检测波长的确定 分别吸取盐酸小檗碱标准品溶液和经适当稀释后的黄连提取液 , 在 200600n m 之间进行波长扫描 , 两者在 347n m 波长处呈现共有吸收峰 , 故确定检测波长为 347n m 。 见图 1。图 1 盐酸小檗碱标准品溶液和黄连提取液紫外扫描

6、图F i gu re 1 U ltra 2vi o l e t a b so r p ti o n cu rve o f be rbe ri ne hyd r o ch l o ri de s ta nda rd sam p l e a nd e xtrac t li qu i d fr om R h i zom a Cop ti d is广州中医药大学学报Journal of Guangzhou University of Traditi onal Chinese Medicine2010年第 27卷2111112 标准曲线的绘制 精密称取干燥至恒重 的盐酸小檗碱对照品 11110mg, 置

7、 50mL 量瓶中 , 用 0105mol/LH2S O 4溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 即得 。 精密量取盐酸小檗碱对照品溶液 012、 015、 018、 110、 115、 210mL, 分别置 50mL 量瓶中 ,加 0105mol/LH2S O 4稀释至刻度 , 摇匀 , 在 347 n m 波长处测定吸光度 。以吸光度 X 为横坐标 , 质 量浓度 Y 为纵坐标 , 进行线性回归 。结果表明在 010017611176mg/mL范围内盐酸小檗碱的浓度 与吸光度呈良好的线性关系 , 其回归方程为 :Y = 010162X -0100004, r =019999。21112 黄连提取

8、液中总生物碱的测定 称取黄连 药材 10g, 加 8倍量体积分数 60%乙醇回流提取 3次 , 每 次 1h, 合 并 提 取 液 。将 提 取 液 移 至 1000mL 的容量瓶中 , 加体积分数 60%乙醇定容 至刻度 。 取 1mL 样品 , 置 25mL 量瓶中 , 加 0105 mol/LH 2S O 4定容至刻度 。取 215mL 上述样品 ,置 25mL 量瓶中 , 加 0105mol/LH2S O 4定容至刻 度 。 在 347n m 处测吸光度为 01297取得到的总生物碱为 01119g/g21221211 1010g, 加 8倍量体积分数 的乙醇 , 加热回流提取 3次

9、, 每次 1h, 合并 3次提取液 , 过滤 。滤液减压 真空浓缩至无醇味 。将提取液转移至 1000mL 的 容量瓶 , 加蒸馏水定容至刻度 , 备用 。取 1mL 上 述提取液 , 置于 25mL 的容量瓶中 , 用 0105mol/L的 H2S O 4定容至刻度 。取上述稀释液 215mL, 置于 25mL 的容量瓶中 , 用 0105mol/LH2S O 4定容 至刻度 。在 347nm 波长下测得吸光度为 01285。 计算得提取液中总生物碱的浓度为 11144mg/mL。 21212 树脂的预处理 根据黄连中生物碱的性质 , 综合已有的文献报道 227, 从众多的树脂型号中选 取了

10、 9种作为研究对象 , 各种树脂的性能参数和预 处理方法见表 1。21213静态吸附和解析试验 准确称取上述各种湿 树脂 2g, 分别装入 100mL 的三角瓶中 , 加入 20 mL 的黄连提取液 , 将上述样品放入摇床 , 在 100次 /min 的振速下振荡吸附 24h 。将吸附后的黄连 提取液真空抽滤 。取滤液 1mL, 加 0105mol/L的 H 2S O 4定容至 25mL, 测其吸光度 。各种树脂吸附 后的吸光度见表 1。将真空抽滤后的湿树脂倒回 100mL 的三角瓶中 , 加入 40mL 体积分数 95%乙 醇 , 振荡解吸 24h, 振荡速度为 100次 /min 。 将解

11、 吸后 的 药 液 真 空 抽 滤 。取 滤 液 1mL, 加 0105 mol/LH 2S O 4定 容 至 25。取 上 述 稀 释 液 215 mL, 加 05425mL, 测其吸=(原料液中总生物碱的 -吸附后药液中总生物碱的浓度 ×20mL; 总生物碱的吸附率 =吸附量 /加入的提取液中总 生物碱的量 ; 总生物碱的解吸量 =解吸液中总生 物碱的浓度 ×40mL; 总生物碱的解吸率 =解吸 量 /吸附量 。表 1结 果 显 示 :AB 28、 ADS 23、 ADS 25、 HP20、 LD6055种树脂的吸附性能较好 , 但 AB 28、 ADS 25的解吸效果

12、不如另外 3种 , HP20、 LD605、 ADS 233种树脂的吸附和解吸效果都较好 。故将其 作为后续研究对象 , 从这 3种树脂中精选 1种最佳 的树脂 。表 1 不同型号的树脂初筛试验结果Tab l e 1 R e su lts o f i n iti a l se l e c ti o n fo r d i ffe re n t typ e s o f re s i n树脂型号 A 比表 /(m 2 g -1 d 粒径 /mm预处理方法 p 吸附 /%p 解吸 /% AB 28500600013110先用工业乙醇洗至加水不浑浊 , 10g/LNaOH 23个床体积淋洗树脂 , 然后

13、水洗至中性9916386134HP20550650013110工业乙醇充分浸泡 , 湿法装柱 , 用工业乙醇洗至加水不浑浊 , 再用蒸馏水洗至无醇味9618791175LD605450550013110先用工业乙醇洗至加水不浑浊 , 10g/LNaOH 23个床体积淋洗树脂 , 然后水洗至中性961991172ADS 23480650013110工业乙醇充分浸泡 , 湿法装柱 , 用工业乙醇洗至加水不浑浊 , 再用蒸馏水洗至无醇味9714791119ADS 25500650013110工业乙醇充分浸泡 , 湿法装柱 , 用工业乙醇洗至加水 不浑浊 , 再用蒸馏水洗至无醇味 9713686192

14、广州中医药大学学报第 1期 续表 1树脂型号A 比表 /(m 2 g -1d 粒径 /mm预处理方法p 吸附 /%p 解吸 /%D1510132110先用工业乙醇洗至加水不浑浊 , 40g/LHCl 24个床 体积淋洗树脂 , 然后水洗至中性 ; 40g/LNa OH 24个床体积淋洗树脂 , 然后水洗至中性9617255129DA 22015005500131125在树脂柱内加入高于树脂层 10c m 的乙醇充分浸泡 , 放 出浸液 , 至洗涤液在试管中加水稀释不浑浊 , 再用水 洗涤至无醇味9419578169XAD7 38001560171工业乙醇充分浸泡 , 湿法装柱 , 用工业乙醇洗

15、至加水 不浑浊 , 再用蒸馏水洗至无醇味8111971110NK A 295005500131125在树脂柱内加入高于树脂层 10c m 的乙醇充分浸泡 , 放 出浸液 , 至洗涤液在试管中加水稀释不浑浊 , 再用水 洗涤至无醇味8714874155213 树脂的精选21311 黄连提取液中盐酸小檗碱的含量测定 2131111 标准曲线的制备 采用 D ia monsil 5m C18柱 (250mm ×416mm ; 流动相为乙腈 21g/L磷酸 (体积比为 50 50 , 内含 1g/L十二烷基磺酸钠 ; 流速 :1mL /min; 检测波长 :347n m 。准确称取 1111

16、834mg 用乙 腈 21g /L磷 酸 (体 积 比 为 容 10mL, 121(体 积比为 50 50 为 012237mg/mL 。 分别进样 2、 4、 8、 12、 16L的上述 标准溶 液 , 对 应的盐 酸小 檗 碱 的 质 量 为 01447、 01895、 11789、 21684、 31579g 。以峰面 积 Y 为纵坐标 , X 为横坐标作图 , 106X +229809, r =01223 , 进样 5L, 根据标准曲线计算盐 酸小檗碱的量为 21372g 。 结果见图 3。张 英 , 等 . 大孔树脂分离纯化黄连总生物碱型号的筛选2010年第 27卷 21312 静态

17、吸附和解析实验 准确称取上述 3种湿树脂 2g, 分别装入 100mL 的三角瓶中 , 加入20mL 的黄连提取液 , 其中含有的总生物碱的质量以盐酸小檗碱计为 22188mg, 盐酸小檗碱的质量为 91488mg 。 将上述样品放入摇床 , 在 100次 /min的振速下振荡吸附 24h 。 将吸附后的黄连提取液真空抽滤 。 取滤液 1mL, 加 0105mol/L的 H2S O 4定容至 25mL, 测其吸光度 。 将真空抽滤后的湿树脂倒回 100mL 的三角瓶中 , 加入 40mL 体积分数95%的 乙 醇 , 振 荡 解 吸 24h, 振 荡 速 度 为 100次 /min 。 将解吸

18、后的药液真空抽滤 。取滤液 1mL,加 0105mol/L的 H2S O 4定容至 25mL 。 取上述稀释液 215mL, 加 0105mol/L的 H2S O 4定容至 25mL,测其吸光度 。 分别取上述 3种树脂的解吸液 , 进样10L, 测其峰面积 。 表 2结果显示 , 3种树脂中 ,ADS 23树脂对黄连提取液中的总生物碱和盐酸小檗碱的吸附和解吸效果都是最好的 。表 2 各种树脂精选试验结果Tabl e 2 Re sults of furthe r se l ecti o n f o r di ffe rent type s of树脂 型号m 总生物碱吸附/mgp 总生物碱吸附/

19、%m 总生物 p m通过对 9种大孔树脂的初筛 , 以提取液中总生 物碱的吸附率和解吸率为指标 , 筛选出效果较好的 3种 :HP20、 LD605、 ADS 23。运 用 该 3种 树 脂 , 同时以提取液中盐酸小檗碱的解吸率作为考察指 标 , 进行进一步的静态吸附和解吸实验 , 综合各种 指标 , 本研究发现 ADS 23是一种理想的树脂 , 具 有较好的推广应用价值 。本实验过程中同时发现 , 对总生物碱吸附率高的树脂 , 盐酸小檗碱的吸附效 果也较好 , 分析原因可能是黄连中多数生物碱具有 相似的结构和极性 , 所以对小檗碱和总生物碱的吸 附具有一致性 。参考文献 :1肖崇厚 1中 药

20、 化 学 M 1上 海 :上 海 科 学 技 术 出 版 社 , 2002:14212黄建明 , 郭济贤 , 陈万生 , 等J 1(医学版 , 2003, 30(3 :, , 等 1大孔树脂分离提取麻黄碱的研究 , 2002, 18(2 :971, 戴胜军 1大孔树脂分离夏天无总生物碱的研究 J 1中成药 , 2006, 28(2 :18215邹节明 , 陆浩 , 何斌 , 等 1苦玄参、黄芩与黄柏的大孔树脂 提取研究 J 1中草药 , 2003, 34(3 :22316高红宁 , 金万勤 , 郭立玮 1微滤 大孔树脂法精制苦参中 氧化苦参碱和苦参总黄酮 J 1西北药学杂志 , 2004, 1

21、9 (1 :1217魏英勤 , 房海燕 , 袁久荣 1正交设计法优化黄连提取液大孔 树脂洗脱条件 J 1制剂技术 , 2003, 12(6 :461O pti m i za ti on of M acroporous Resi n for Isol a ti on and Pur i f i ca ti onof Tota l A lka lo i ds fro m Rh i zo ma Copti d isZHAN G Ying, L I W ei m in, G AO Ying(Guangzhou University of TC M , Guangzhou 510405Guangdong

22、, China Abstract:O bjecti ve To select a best type of macr opor ous resin f or the is olati on and purificati on of t otal alkal oids fr om Rhiz o ma Cop tidis . M ethods W ith the ads or p ti on rate and des or p ti on rate of t otal alkal oids fr om Rhiz oma Cop tidis as the observati on indexes, an initial selecti on of macr opor ous resin was carried out in AB 28, HP20, LD605, ADS 23, ADS 25, D151, DA 2201, XAD7and NK A 29. After the initial selecti on, the des or p ti