隐失波荧光显微镜及其在植物细胞生物学中的应用

1、 第 期 范 路 生 等 ： 失 波 荧 光 显 微 镜 及 其 在 植 物 细 胞 生 物 学 中 的应 用 隐 所得 的结 论完 全 不 同 。 年 ，在 等 的 报 道 中 利 用 ） 为 （ 作 的 内吞 现象 也可 能是植 物 中内吞 的一 种 主要方 式 。 展 望 众 所周 知 ， 物 细胞 的贴壁 性较差 且 有细胞 壁 ， 植 细 胞壁 的厚 度可 随植 物生 长发育 阶段 和生 长状 况 的 不 同而 不 同 ， 如果 利 用 隐失 波 荧 光 显 微镜 对 植 物 的 分泌 囊泡 的标 记 ， 在 隐失 波荧 光 显微 镜 下 对 并 细胞 中 ） 细 胞 板 的融 （

2、与 合 进 行 了观 测 。 结 果 发 现 ， 一 标 记 的分 泌囊 泡持 续 和 快 速 的 与 细 胞 板 的 边 缘 或 中 间进 行 融合。 植 物细 胞 内吞 的研 究 整个 细 胞进行 观 测 仍 有 一定 局 限性 。 因此 ， 使 用 可 高粘 性 多聚赖 氨 酸载玻 片来 改善植 物 细胞 与载玻 片 问 的贴壁 性 。另外 ， 用 原 生 质 体进 行 观测 可 能 会 应 更可 行 ， 而 不足 的是 ， 然 原生 质体 中 的一 些蛋 白在 细 胞膜 上 的动态 可能 会发 生改 变 。 当应用 隐 失波荧 光 显微镜 对 整株 拟南 芥幼 苗 中 定 位 于细胞

3、膜 的蛋 白和靠 近 细胞 膜 的细胞 器及 细胞 骨架 进行观 测 ， 所得 结 果 与荧 光 显 微 镜 或 激 光共 聚 最 近 ， 们对 隐 失波 荧 光 显 微 镜 曾作 了进 一 步 人 的改 进 ， 如采 用 隐失驻 波 （ ） 焦 显微 镜相 比 ， 显然 隐失 波 荧 光 显 微 镜 能得 到信 噪 较 高 的 图像 。 由于拟 南 芥 （ ， ） 在 细胞 分裂 和 细胞 伸 长 过 程 中都 发 挥 着 重 要 作 用 ， 同样 在 家 族 中 的 两 个 成 员 和 在 花粉 管 伸 长 过 程 细 胞 膜 的循 环 中也 起 着 重 要作 用 。 通 常 和 定 位

4、于 细 胞 膜 来激 发样 品 ， 可显 著提 高侧 向分 辨 率 ， 。又 如 通 过双 光子 激发 ， 使光 的 散射所 产生 的背 景大 为降低 ， 从 而 得 到信噪 比更 高 的图 像 ， 可用 一 束 激 光来 激 还 发多 个荧 光基 团 。总之 ， 近年 来 隐失 波荧 光 显微 镜 在 国际上 已逐渐 商 业 化 ， 成 为实 验 室 中一种 不 并 可缺 少 的常规 实验 仪 器 ， 在 植物 细 胞 生 物学 的研 它 究 中作为 观测植 物样 品 表面 的一种 新技 术将有 着 十 分 广 阔 的应 用 前景 。 致谢 ： 者 感谢 中 国科 学 院植 物 研 究 所

5、胡玉 熹 作 研 究 员对本 论 文 的指导 和帮助 。 参考 文献 ： 陈 宜 张 近 年 细 胞 单 分 子 研 究 的 重 要 进 展 生 命 科 学 ， （ ） ， ： 王 文 ，张 超 英 拓 宽 激 光 扫 描 共 聚 焦 显 微 技 术 运 用 的新探索 电 子 显 微 学 报 ， ： ， （ ） 上， 并形 成 明显 的点 状 结 构 。 等 曾通 过 双 通道 的 隐失波 荧光 显微 镜对 和 在 拟南 芥 细胞 膜上 的 点状 结 构 进 行 了观 测 ， 果 发 现 结 两 者都 与 网格蛋 白 的轻 链 （ ） 定 位 ， 应 用 各 共 但 种抑 制剂 处 理 后 ，

6、 们 则 表 现 出不 同 的 动 态 变 化 。 它 例 如用微 管 抑制 剂 胺 磺 灵 和 微 丝 抑 制 剂 分 别 抑 制微管 和 微丝 ， 在 细胞 膜 上 的动 态 均 会 遭 到严 重 破 坏 ， 的 动 态 则 不 会 受 而 影 响 。又如 用 的抑 制 剂 处 理 拟 南芥 幼 苗 ， 会 聚集 在 一 些 较 大 的 未 知 功 能 则 的结 构 中 ， 的荧 光 强 度 和 荧 光 点 的 而 大小 则 不 会 受 影 响 。另 外 ， 固 醇 合 成 的抑 制 剂 用 处 理 ， 在 细 胞 膜上 停 留的 王 莉 娟 ，张英 鸽 ， 飒 ，等 原 子 力 显 微

7、镜 对 生 理 溶 张 液 中活 细 胞 成 像 条 件 的 研 究 电 子 显 微 学 报 ， ， （ ）： 时 间会增 加 ， 中有 的荧 光 点 停 留在 细 胞 膜 上 其 的 时间将会 超 过 。总之 ， 过 隐失 波荧光 显微 通 镜 的观测 和各 种抑 制剂 的处理 结 果 表 明 ， 和 在 细胞 膜 上受 到各 种 因素 的调 节 ， 同样 它们 所 发挥 的功能 也不 完全 相 同。 ， ） ， （ ： ， ， （ ） ， ： 最近 ， 作者 构 建 了 的稳 定 表 达 载 体 ， 并 转化 了拟 南 芥 。通 过 激 光 共 聚 焦 显 微 镜 对 瞬 时转 化 的烟

8、草叶 片和稳 定 转化 的拟 南芥 根细 胞 的观测 ， 果发 现 不 仅定 位 于细胞 膜 表 结 面， 且能 标记 拟南 芥 根端 分生 区 的细胞 板 ， 同时在 细 胞 膜表 面 同样 也 会 形 成 点 状 结 构 。综 合 前 人 的 报 道 和作 者 的研究 结果 可 以认 为 ， 卜 网格蛋 白介 导 ： ， ， （ ） ： ， ， 一 ： 电子显微学报 （ ） ： 第 卷 刘 进 全 内 反 射 荧 光 显 微 术 原 理 及 其 应 用 中 国现 代 教 育 装 备 ， ， ： ， ， （ ） ， ： ， （ ） ， ： ， ， ， （ ） ， ， ： ， （ ） ， ：

9、， ， ， ， ， ， ， ， ， （ ）： ， ， （ ： ） ， ！ ， ， （ ） ： 何化 ，任吉存 全 内反射 荧光成 像技术 及其 在单分 子 检 测 中 的研 究进 展 分 析 测 试 学 报 ， ， （ ）： ， ， ， ， ， ， ， ，（ ）： ， ， ， ： ， （ ） ， ， （ ： ） ， ， ， ） ， （ ： ， ， （ ） ： ， ： ， （ ： ， ） ， ， ， 一 ， ， ， （ ）： ， ， ， ， ） ， （ ： ， ， （ ）： ， ， ， ， ， ， （ ）： ， ， （ ）： ， ， ，（ ） ： ， ， ， ， ， （ ） ， ： ， （ ：

10、， ） ， ， ， ， （ ） ， ： ， ， ， （ ） ： ， ， （ ） ： ， ： ， ， ， （ ： ） 。 ， ， （ ） 第 期 范 路 生 等 ： 失 波 荧 光 显 微 镜 及 其 在 植 物 细胞 生 物 学 中的 应 用 隐 ， “ ”： ， （ ） ： ， ： ， ： ， （ ） ， ， （ ）： ， ， ， ， ， （ ） ： 白永 强 ，朱 星 基 于 全 内 反 射 荧 光 显 微 镜 的 单 个 心 肌 细 胞 内钙 信 号 斑 图 的 介 观 表 征 吉 林 大 学 学 报 （ 学 版 ） ， （ ） 理 ， ： ， ： ， （ ） ， ， ， ， ， ， ，

11、 ， （ ）： ， ） ， （ ： ， ， ， ， ， ， ， ， （ ： ） ， （ ） ， ： ， ， ， ， ： ， （ ） ， ： 一 ， ： ， （ ） ， ， ， ， ， ， ， ）： （ ， （ ： ， ） ， ， ， ， ， ： ， ） ， （ ： ， ， （ ） ： ， ， ， ， ， ， （ ） ， ： ， 电子 显 微 学 报 第 卷 ， ， ， ， （ ， ， ） ， ： ， ， ， ， ， ， ： ； ； ； ； 获 奖 照 片说 明 放在 纳米 世 界 的玫 瑰 绽 在 单 晶衬底上利用磁控溅 射方法 制备 纳米 薄膜 ， 品厚 度约 为 。 电压 为 样 ， 气 保 护 ， 压值 为 × 。 利 用 去 离 子 水 将 溅 射 在 单 晶 衬 底 上 的 氩 气 纳 米 薄 膜 剥 离并 放 到 自制 的 拉 伸 台 上 ， 入 透 射 电镜 进 行 原 位 变 形 实 验 观 察 （ 片 在 放 图 型透射 电镜 下拍摄 获得