高同型半胱氨酸血症对球囊损伤大鼠颈动脉核转录因子NF

1、    高同型半胱氨酸血症对球囊损伤大鼠颈动脉核转录因子NF            作者：时间：2007-11-22 11:04:00                          &#

2、160;                                         作者：徐会圃，刘长梅，冯义柏 【关键词】  ,甲硫氨酸    Effe

3、ct of homocysteine on expressions of  NFB and protooncogene in ballooninjured rat carotid arteries【Abstract】 AIM: To study the effect of homocysteine (Hcy) on the expressions of nuclear factorB (NFB) P65 protein and cfos, cjun mRNA in common carotid artery of rats after balloon injury and to ex

4、plore the possible mechanism by which homocysteine exacerbates neointimal hyperplasia after angioplasty. METHODS:  The expressions of NFB P65 protein and cfos and cjun mRNA were detected by Western blot and semiquantitative RTPCR respectively in the common carotid artery. RESULTS:  The exp

5、ressions of NFB P65 protein and cfos and cjun mRNA were significantly higher in  low  methionine (LM) group（1.12±0.13, 1.40±0.21, 1.43±0.25）（P<0.05） and high methionine (HM) group（1.50±0.37, 1.68±0.27, 1.71±0.30）（P<0.01）than those in control group（0.64&#

6、177;0.06, 1.10±0.15, 1.00±0.13）. The expressions of NFB P65 protein and cfos, cjun mRNA were also significant higher in HM group than those in LM group (P<0.05). CONCLUSION:  Homocysteine may upregulate the transcription of cfos and cjun mRNA in common carotid artery after balloon

7、angioplasty by NFB pathway, which may be responsible for neointimal hyperplasia induced by homocysteine after angioplasty.【Keywords】 methionine; homocysteine; balloon injury; NFkappaB; protooncogenes【摘要】 目的： 观察高蛋氨酸饮食诱导的高同型半胱氨酸血症对大鼠颈动脉球囊损伤后血管组织NFBP65蛋白和原癌基因cfos及cjun mRNA表达的影响，探讨同型半胱氨酸在血管球囊损伤后新内膜过度增生中

8、的可能机制. 方法： 采用Western blot及RTPCR方法分别检测血管组织NFBP65蛋白和cfos及cjun mRNA表达，并做半定量分析. 结果： 低、高蛋氨酸组血管组织NFBP65蛋白、cfos及cjun mRNA的表达均高于对照组，分别为1.12±0.13 vs 0.64±0.06 （P<0.05）, 1.50±0.37 vs 0.64±0.06 (P<0.01), 1.40±0.21 vs 1.10±0.15 （P<0.05）, 1.43±0.25 vs 1.10±0.15 （P

9、<0.01）及1.68±0.27 vs 1.00±0.13 （P<0.05）, 1.71±0.30 vs 1.00±0.13 （P<0.01）,高蛋氨酸组也明显高于低蛋氨酸组(P<0.05). 结论： 同型半胱氨酸有可能通过NFB通路上调血管内皮损伤后动脉组织原癌基因cfos及cjun mRNA的表达，这可能是其促进血管内皮球囊损伤后新内膜过度增生的机制之一.【关键词】 甲硫氨酸；同型半胱氨酸；球囊损伤；原癌基因；NFB 0引言实验研究和临床观察表明，血中同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)升高可引起动脉粥

10、样硬化和血栓形成1-2. 然而其在血管内皮球囊损伤后新内膜增生中的作用及其机制尚不清楚. 我们用高蛋氨酸（methionine）饮食诱导高同型半胱氨酸血症，观察其对血管内皮球囊损伤后血管组织NFB P65蛋白及原癌基因表达的影响，以探讨Hcy促进血管内皮球囊损伤后新内膜过度增生的可能机制.1材料和方法1.1材料健康雄性12 wk SD大鼠30只(华中科技大学同济医学院动物中心提供)，体质量280320 g，随机分为对照组（C）(给普通饲料)，低蛋氨酸组(LM)(含蛋氨酸12 g/kg饮食),高蛋氨酸组(HM)（含蛋氨酸20 g/kg饮食），每组10只，各组均自由进食. 蛋氨酸(北京中山生物技术

11、有限公司，化学纯，批号： 1903001)，总RNA提取试剂(Trizol)及逆转录试剂盒为Giblo公司产品，TaqDNA聚合酶cfos, cjun及内参actin上、下游引物为TaKaRa大连宝生物工程有限公司产品；兔抗大鼠NFB P65多克隆抗体、Western blot检测试剂盒均购自武汉博士德公司. 自制2F球囊导管购自天津乳胶制品厂；PCR扩增仪(美国MJPC150公司)，图像分析仪为上海四星公司产品. 高效液相色谱仪(美国water公司). 1.2方法2结果3讨论我们的实验结果表明短期给予高蛋氨酸饮食，不仅可以引起高蛋氨酸血症，而且可引起高Hcy血症. Hcy在动脉粥样

12、硬化中的作用已得到大量文献资料的认可；最近研究发现高Hcy血症加重了球囊损伤大鼠颈动脉新内膜的增生4，但其在血管内皮球囊损伤后新内膜过度增生中的具体机制，目前尚不清楚.研究表明，血管内皮球囊损伤后的早期，血管壁组织原癌基因cfos及cjun的表达即明显上调5，在1 h左右达高峰. 我们的实验结果表明在血管内皮球囊损伤后1 h处死动物，在对照、低蛋氨酸及高蛋氨酸组cfos, cjun mRNA的表达均明显高于右侧颈总动脉，右侧颈总动脉仅有微弱表达，且发现其表达与Hcy呈浓度依赖关系， 说明Hcy对cfos及cjun的表达有激发作用. 原癌基因cfos及cjun的表达产物活化后可形成活性蛋白1(A

13、ctivation protein1, AP1),是细胞核内重要的转录因子，可激活细胞核DNA转录和核蛋白的合成，参与调控细胞增殖分化和转化等重要生物学行为6，使血管平滑肌细胞可进入增殖周期并发生功能变化，由收缩型转变成活成型. 此外，原癌基因cfos及cjun的转录产物还可介导多种细胞因子，尤其是生长因子的表达. 这就启动了损伤血管局部平滑肌细胞活化的自分泌、旁分泌机制，损伤动脉局部将有持续的血管平滑肌细胞过度增殖和分化，从而有利于血管内皮球囊损伤后新内膜的过度增生而造成再狭窄.本实验涉及的NFB P65是NFB家族/Rel家族的重要组成成员之一，目前研究显示，在细胞中最常见的形式为P65及

14、P50组成的NFB异二聚体，正常情况下与其抑制物IB结合，存在于正常细胞的的胞质内，多种刺激信号，如细胞因子、氧自由基、细菌和病毒产物等可以引起IB的磷酸化和降解，NFB脱离NFB: IB复合体，迅速移位于核内，与特定的基因启动子区的B结合位点结合，诱导基因的表达7，如细胞因子、原癌基因、黏附分子等. 我们的实验比较了NFB P65蛋白在低高蛋氨酸组和对照组大鼠颈动脉球囊损伤后血管组织中的表达，结果发现低、高蛋氨酸两组的表达与对照组有明显差异（P<0.05, P<0.01）,且低高蛋氨酸组两组之间也有显著差异（P<0.05）. 提示NFB可能参与了Hcy介导的平滑肌细胞cfo

15、s, cjun mRNA的表达，这也许是Hcy加重血管内皮球囊损伤后新内膜增生的重要机制之一. Wang等8近期研究发现，Hcy可刺激血管平滑肌细胞NFB的激活，从而使平滑肌细胞表达和释放单核细胞趋化因子，也支持我们的研究. 但关于Hcy诱导NFB活化进而诱导原癌基因表达的胞内信号机制十分复杂，有待于今后进一步阐明.【参考文献】1 Haynes WG. Hyperhomocysteinemia, vascular function and atherosclerosis: Effects of vitamins J. Cardiovasc Drugs Ther, 2002,16(5)

16、391-399.2 Wasilewska A, Narkiewicz M, Rutkowski B, et al. Is there any relationship between lipids and vitamin B levels in persons with elevated risk of atherosclerosis J? Med Sci Monit,  2003,9(3):147-151.3 Ueland PM,Refsum H, Stakler SP, et al. Total homocysteine in plasma or serum: Methods a

17、nd clinical application J. Clin Chem, 1993,39(9):1764-1779.4 徐会圃，冯义柏. 高同型半胱氨酸血症对大鼠颈动脉损伤后新内膜增生的影响J. 中国康复医学杂志，2004,19（2）:115-117.5 Miano JM, Vlasic N, Tota RR, et al. Smooth muscle cell immediateearly gene and growth factor activation follows vascular injury J. Arterioscler Thromb, 1993,13(2):211-219.

18、6 Karin M. The regulation of AP1 activity by mitogen activated protein kinases J. J Biol Chem, 1995,270(28):16483-16486.7 Zhu J, Mix E, Olsson T, et al. Cellular mRNA expression of interferongamma,IL4 and transforming growth factorbeta (TGF) by rat mononuclear cells stimulated    with peripheral nerve myelin antigens in experimental