脂肪来源的干细胞移植对大鼠脑缺血后微血管生成及bFGF和VEGF表达的影响x

1、脂肪来源的干细胞移植对大鼠脑缺血后微血管生成及bFGF和VEGF表达的影响x         11-01-30 11:32:00     编辑：studa20                 作者：王杰华, 刘楠, 杜厚伟, 翁金森, 陈荣华, 肖迎春, 张逸仙【摘要】  目的: 探讨脂肪来源的干细胞（ADS

2、C）移植对大鼠脑缺血后微血管生成的可能机制。方法: 72只清洁级成年雄性SpragueDarley大鼠, 随机分为假手术组(Sham组)、 局灶性脑缺血组（MCAO组）、 溶剂对照组（vehicle组）和ADSC治疗组（ADSC组）, 每组18 只, 采用改良ZeaLonga线栓法制作大脑中动脉栓塞（MCAO）模型, ADSC移植前用DAPI标记, ADSC 组于造模成功1 d后经侧脑室注射入30 L的经DAPI标记的ADSC细胞悬液, 内含1×106细胞, vehicle组则注射同等剂量的PBS, 术后4 d、 7 d和14 d分批处死实验动物, 并断头取脑, 采用免疫组织化学法和

3、半定量RTPCR法检测缺血区脑组织的新生血管及bFGF和VEGF表达的动态变化。结果: 大鼠脑缺血后缺血区即可见大量的微血管生成, 2周达高峰。ADSC组较MCAO组和vehicle组缺血区微血管密度明显增高（P<0.01）; ADSC组术后4 d、 7 d和14 d脑组织中bFGF和VEGF的表达水平较MCAO组和vehicle组明显增高。结论: ADSC移植促进脑缺血大鼠缺血区微血管的生成, 其机制可能与促进bFGF和VEGF的表达有关 【关键词】  脂肪来源的干细胞; 脑梗塞; 血管生成; bFGF; VEGF    Abstract

4、0; AIM: To investigate the effects of adiposederived stem cell (ADSC) transplantation on the angiogenesis in the brain post focal cerebral ischemia in rats. METHODS: 72 male adult SpragueDawley rats were randomly divided into 4 groups: shamoperated group, middle cerebral artery occlusion (MCAO) grou

5、p, vehicle group and MCAO+ADSCtreated group (n=18). A permenant focal cerebral ischemia model was established with the modified Longa's method. ADSC were labeled by DAPI before transplantation. One day after right MCAO, 30 L of cell suspension containing 1×106 cells were injected into the l

6、ateral ventricle of MCAO+ADSCtreated group and the same dose of PBS was given to the vehicle group. On D4, D7 and D14 after MCAO,  the rats were killed to detect the regeneration of microvessel and the expression of bFGF and VEGF in ischemic region by immunohistochemistry and RTPCR. RESULTS: A

7、lot of microvessel proliferate in the injured cortex  reached peak in 2 weeks. The microvessel density in the brain tissues of rats treated with ADSC was higher than that in MCAO group and vehicle group (P<0.01). The expression of bFGF and VEGF in the brain tissues of MCAO+ADSCtreated group

8、was higher than that in MCAO group and vehicle group on D4, D7 and D14 post MCAO. CONCLUSION: The transplantation of ADSC  can promote the revascularization of cerebral ischemia in rats partly by enhancing bFGF and VEGF synthesis in brain.    Keywordsadiposederived stem cell; cer

9、ebral ischemia; angiogenesis; bFGF; VEGF    摘 要  目的:  探讨脂肪来源的干细胞（ADSC）移植对大鼠脑缺血后微血管生成的可能机制。方法: 72只清洁级成年雄性SpragueDarley大鼠, 随机分为假手术组(Sham组)、 局灶性脑缺血组（MCAO组）、 溶剂对照组（vehicle组）和ADSC治疗组（ADSC组）, 每组18 只, 采用改良ZeaLonga线栓法制作大脑中动脉栓塞（MCAO）模型, ADSC移植前用DAPI标记, ADSC 组于造模成功1 d后经侧脑室注射入30 L的经DAP

10、I标记的ADSC细胞悬液, 内含1×106细胞, vehicle组则注射同等剂量的PBS, 术后4 d、 7 d和14 d分批处死实验动物, 并断头取脑, 采用免疫组织化学法和半定量RTPCR法检测缺血区脑组织的新生血管及bFGF和VEGF表达的动态变化。结果: 大鼠脑缺血后缺血区即可见大量的微血管生成, 2周达高峰。ADSC组较MCAO组和vehicle组缺血区微血管密度明显增高（P<0.01）; ADSC组术后4 d、 7 d和14 d脑组织中bFGF和VEGF的表达水平较MCAO组和vehicle组明显增高。结论: ADSC移植促进脑缺血大鼠缺血区微血管的生成, 其机制可

11、能与促进bFGF和VEGF的表达有关。    关键词脂肪来源的干细胞; 脑梗塞; 血管生成; bFGF; VEGF    有研究证实, 脂肪来源的干细胞（adiposederived stem cell, ADSC）在体外可以向多种细胞系分化, 包括成骨细胞、 脂肪细胞、 肌细胞、 神经细胞及内皮细胞1, 2。将ADSC注射入脑缺血大鼠侧脑室, 发现可减轻神经功能的缺损3, 但具体作用机制有待进一步阐明。本研究中, 我们采用大鼠大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion,  MCAO）脑

12、缺血模型进行ADSC移植, 观察不同时间点微血管密度（microvessel density,  MVD）并测定脑组织中碱性成纤维生长因子（basic fibroblast growth factor,  bFGF）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,  VEGF）的表达, 以讨探ADSC移植的脑保护机制, 为ADSC治疗脑血管疾病提供理论依据。    1  材料和方法    1.1  材料  健康雄性SD大鼠72只, 质

13、量250280 g, 用于脑缺血模型制作; 雄性SD大鼠10只, 质量80100  g, 用于细胞的分离培养实验, 购自上海斯莱克实验动物有限责任公司（许可证号: SCXK沪20070003）。DMEM培养基、 2.5 g/L胰酶为Gibco公司产品, 胎牛血清( fetal bovine serum,  FBS)购自海克隆公司, FITC标记的小鼠抗大鼠CD45、 小鼠抗大鼠CD90、 小鼠抗大鼠CD44抗体为AbD公司产品, FITC标记的小鼠抗大鼠CD34抗体为Santa Cruz公司产品, DAPI 为Sigma公司产品, CO2培养箱为Thermo公司产品, 倒置相差显微镜为Olympus公司产品, 兔抗大鼠bFGF、 兔抗大鼠VEGF抗体购自Santa C