荧光定量检测HBV

1、荧光定量检测HBV DNA与ELISA法测两对半相关性分析福建医科大学附属协和医院检验科(350001) 陈 莺 陈建森 【摘 要】 目的 探讨荧光定量检测HBV DNA-9乙肝两对半之间的关系及临床意义。方法 运用荧光定量PCR(FQPCR)与ELISA两种方法同时检测242份血清，对其结果加以对比分析。结果 51例乙肝大三阳患者血清HBV DNA检出率100(5151)；60例乙肝小三阳患者血清HBV DNA检出率517(3160)；9例HBsAg(+)、抗一HBs(+)、HBeAg(+)血清HBV DNA检出率100(99)；5例HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗一HBe(+)血清H

2、BV DNA检出率100(55)；11例抗一HBs(+)及31例抗一HBs(+)、抗一HBe(+)、抗一HBc(+)血清HBV DNA检出率0；38例抗一HBs(+)、抗一HBc(+)患者血清HBV DNA检出率79；17例HBsAg(+)、抗一HBc(+)血清HBV DNA检出率588；20例抗一HBc(+)血清HBV DNA检出率10。结论 荧光定量PCR检测HBV DNA具有准确、灵敏、特异等优点，对干乙肝患者临床诊断、疗效观察及预后判断具有重要的临床意义。 【关键词】 荧光定量PCR；HBV DNA；ELISA；乙肝两对半 【中图分类号】R5751 【献标识码】A 【文章编号】1002

3、2600(2003)020118一02乙肝两对半与荧光定量检测HBV DNA是目前临床分析和判断乙肝患者病情及疗效预后的主要依据。为了解两种方法之间的关系，我们应用荧光定量PCR与ELISA法对我院242份血清进行检测，现报告如下。1材料与方法11 研究对象：系2002年9月11月我院门诊及住院病人同时检测乙肝两对半和HBV DNA者。12实验方法：荧光定量PCR检测：乙肝病毒试剂盒购自深圳匹基生物股份有限公司，采用罗氏公司lightcycler荧光PCR仪。ELISA法测乙肝两对半诊断试剂由英科厦门新创科技有限公司提供，检测HBsAg、抗一HBs、HBeAg、抗一HBe、抗一HBc 5个项目

4、，操作严格按试剂盒说明书进行。结果OD值检测采用美国宝特EL311s全自动酶标仪。2结果 见附表。3 讨论 51例乙肝大三阳患者血清检测HBV DNA皆阳性，说明大三阳患者在荧光定量PCR法与ELISA两种测定方法上有良好的一致性，均表明体内HBV有活动性复制L1。60例乙肝小三阳患者血清中有31例检出HBV DNA，阳性率517，说明小三阳患者只有半数左右人群体内含有HBV DNA。本结果同时说明抗一HBe存在并不表示患者体内没有病毒复制，一般认为抗一HBe持续阳性提示HBV复制处于较低水平或HBV可能已和宿主DNA整合并潜伏下来L2。所以小三阳患者体内是否有活动性复制及其水平如何，单靠两对

5、半测定是无法准确判断，而必须进行HBV DNA定量检测。9例HBsAg(+)、抗一HBs(+)、HBeAg(+)、抗一HBc(+)及5例HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗一HBe(+)、抗一HBc(+)患者血清中HBV DNA阳性率达100，结合大三阳模式，我们不难发现这三种模式患者血清中HBeAg皆阳性，说明HBeAg(+)与HBV DNA有良好的一致性，HBeAg可作为HBV复制及具有强感染性的一个指标。11例抗一HBs(+)及31例抗一HBs(+)、抗一HBe(+)、抗一HBc(+)的患者血清中无1例HBVDNA阳性，说明抗一HBs阳性可清除血清中乙肝病毒，为保护性抗体。而38例抗一

6、HBs(+)、抗一HBC(+) 的血清中HBV DNA检出率为79(338)，虽然患者血清中存在抗一HBs抗体，但体内仍有病毒存在，国外研究表明，HBsAg至抗一HBs转换后HBV DNA的变化，抗一HBs出现后2个月58病人血清HBV DNA阳性，6个月时31阳性，12个月时15阳性【3】，本文观察到的结果与文献报道基本一致。17例HBsAg(+)、抗一HBc(+)患者血清中HBV DNA阳性率达588 oA(1017)。此情况可能为血清转换期或前C区突变，如果经过动态观察仍表现为HBsAg(+)，抗一HBc(+)及HBV DNA阳性，可能为前C区突变“】。20例抗一HBc(+)患者血清中检

7、出2例HBV DNA阳性，阳性率10(210)。此情况可能HBV在体内含量低ELlSA法未能检出，或处在“窗口期”。 综上所述，乙肝两对半是HBV在人体内的一种免疫反应状态而表现出的各种模式，ELISA法测乙肝两对半是诊断HBV感染的传统方法，我们知道HBV在电镜下有三种颗粒，大球形颗粒即Dane颗粒仅占02，具有完整的病毒颗粒，而小球形颗粒及管形颗粒占98以上，其仅表达HBsAg而不含DNA，无感染性，因此对于ELlSA检出HBsAg(+)者并不代表其HBV DNA阳性。同时笔者认为对于ELISA判断在灰区范围的人群，除行综合试验确诊是否HBsAg阳性，也可建议进行FQPCR，以判断其是否为

8、乙肝患者。我们知道PCR方法是检测HBV病毒本身，而且能进行量化，可检出培水平病毒含量，而ELISA法只能检出ng水平，因此FQ-PCR能更准确、灵敏地反映HBV的感染和恢复情况，对于乙肝的临床诊断、疗效观察及预后判断比乙肝两对半具有更重要的临床意义。参 考 文 献1 蔡卫平，唐小平，陈劲峰，等慢性乙型肝炎抗HBV DNA定量 检测与病原学标志和肝损害程度的关系中国实用内科杂志， 1998，18：1492 彭文伟传染病学第l版北京：人民卫生出版社，1997153 Loriot MA。Marcellin P，Bismuth E，et a1Demonstration of hepatitis Virus DNA by polymerase chain reaction in the serum liver after spontaneous or thernpeutic induced HBeAg to antiHbe or HBeAg to antiHBs seroconversion in patients with chronic hepatitis BHepatology，1992，15(1)：324 Rodriguez FE，