五鹤续断多糖的提取及动态分布规律的研究

1、五鹤续断多糖的提取及动态分布规律的研究         【摘要】 目的以恩施州道地药材五鹤续断为原料，初步研究其多糖提取分离及其动态分布规律。方法采用石油醚脱脂、热水浸提、乙醇沉淀分离、sevage脱蛋白、冷冻干燥等方法提取分离续断多糖，并采用蒽酮比色法测定续断多糖的含量，了解其多糖的动态分布规律。结果在提        【摘要】  目的以恩施州道地药材五鹤续断为原料，初步研究其多糖提取分离及其动态分布规律。方法采用石油醚脱脂

2、、热水浸提、乙醇沉淀分离、sevage脱蛋白、冷冻干燥等方法提取分离续断多糖，并采用蒽酮比色法测定续断多糖的含量，了解其多糖的动态分布规律。结果在提取2次、加料液比为120、提取时间2 h、提取温度为95 时，续断多糖得率最高，三年生续断根多糖分布最高。结论五鹤续断多糖分布规律为：三年生根两年生根一年生根叶，人工种植的续断根野生根。 【关键词】  五鹤续断 多糖 提取分离 分布规律Abstract：ObjectiveTo extract and separate polysaccharide in Dipsacus asper and extract polysaccharide a

3、nd study its regularities.MethodsDuring the extraction of polysaccharide, the effects of extraction times, temperature, proportion and time on yield of polysaccharide investigated by orthogonal experiment. The separation procedure of precipitation with alcohol and purification from the removing prot

4、eins and fats were analyzed. The contents of polysaccharides were determined by anthrone colorimetry. ResultsThe results showed that the optimum parameters were as follows: 2 times extraction ratio of material solvent 1:20, the time 2h, the temperature was 95. ConclusionThe regularities of polysacch

5、aride distribution in Dipsacus asper is as follows: the polysaccharide in the roots grew for three years the one for two yearsfor one yearthe one in the leaves, the cultivation Wu-He Dipsacus roots the wild form.Key words：Wu-He Dipsacus asper；  Polysaccharide；Extraction；Separation procedure；

6、60; The regularities of distribution    五鹤续断属于川续断科植物（Dipsacus asper），药用部位为其干燥根，其产地以湖北鹤峰县、五峰县为主，并且是川续断中的优质品1，具有补肝益肾、续接筋骨、抗骨质疏松、止血安胎等功效，临床上主要用于治疗腰膝酸软，跌打损伤，骨折，腰椎骨质增生，先兆性流产和习惯性流产等症状2。已有研究表明，续断根的热水提取物中存在着抗补体多糖和具免疫调节活性的高分子活性成分3。多糖尤其是中药多糖因具有增强机体免疫功能及抗肿瘤等药理作用，而且几乎没有毒性，愈来愈成为当前的研究热点。本研究以五鹤续断为原料

7、，探究续断多糖的提取和动态分布规律，以拓宽五鹤续断的应用范围和产品类型,为进一步开展其药用及保健方面的应用开发奠定基础。1  材料与仪器1.1  采样及样品预处理本研究所用材料均来自恩施州鹤峰县走马镇万寺坪道地药材五鹤续断GAP研究及种植基地，野生续断采自GAP基地周围的环境。采用随机取样的方法，分别取人工种植一年生、二年生、三年生和野生的新鲜植株各10株（其根生长三年以后木质化，不能药用），用无离子水将其根、茎、叶分别洗净，切碎后放在105 的烘箱里杀青3060 min后，于80 下烘至恒重，将各样品用粉碎机打成粉末，过60目筛，装于试剂瓶中，贴上标签，置于干燥器内贮存备

8、用。1.2 仪器与试剂植物样品粉碎机，756MC-紫外分光光度计，RE-52型旋转蒸发器，HWS12电热恒温水浴锅，DGX型电热鼓风干燥箱，磁力搅拌器，pH计（PHS-3C），电子天平，冷冻干燥机，低速大容量多管离心机，双重蒸馏水器。95%乙醇、无水乙醇、氯仿、正丁醇、葡萄糖、石油醚、蒽酮、浓硫酸、HClO4、葡萄糖等，所有试剂均为分析纯（由恩施州人合科贸有限责任公司提供），所用水为双蒸水。2 方法2.1  续断多糖的提取工艺流程石油醚脱脂热水浸提水提液过滤冷冻浓缩乙醇沉淀多糖Sevage试剂去蛋白冷冻干燥测定含量。2.2 多糖含量测定多糖含量测定采用邹琦主编的植物生理生化实验指导中

9、蒽酮比色法4，采用葡萄糖作标准溶液，得线性回归方程曲线为：Y=266.03X-3.004 7，相关系数r2=0.997 6。样品中多糖的测定：吸取样品溶液和蒸馏水（作空白）各1 ml，分别置于试管中，沿壁缓慢加入5 ml冷的蒽酮溶液，混合均匀后，在试管口盖上玻璃塞，在沸水浴上加热10 min后，在流水中冷却20 min，在620 nm波长处以试剂空白作参比，测定吸光度，根据回归曲线查出样品中多糖的浓度。3 结果3.1  五鹤续断中续断多糖的提取影响续断多糖提取率的因素很多，如料液比、温度、时间以及提取次数等，为综合分析各因素的影响程度，本实验采用4因素3水平正交实验5L9（34），以确定续断多糖的最佳提取工艺。实验方案设计见表1。表1  影响续断多糖提取因素实验水平表（略）根据因素水平表1，按正交实验L9（34）浸提。将浸提液过滤、浓缩后，浓缩液加无水乙醇沉淀，4静置过夜后离心(5 000 r/min，15 min)， Sevage试剂去蛋白，冷冻干燥，得续断粗多糖, 重复实验3次，正交实验设计与实验结果见表2。经直观分析，初步筛选出续断多糖提取工艺的最佳水平组合为A2B3C2D2。表2  续断多糖提取正交实验L9（34）结果（略）表3&