丹参酮ⅡA对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及机制

1、丹参酮A对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及机制         09-09-07 11:15:00     编辑：studa20                  作者：李浩，刘开祥，俸军林，曾爱源，唐永刚【摘要】  目的探讨丹参酮A（Tan A）对缺血再灌注损伤大鼠保护作用及对额顶部皮质中性粒细胞

2、浸润、自由基含量、能量代谢的影响。方法将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、Tan A低剂量治疗组和Tan A高剂量治疗组，线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型。Tan A高、低剂量治疗组于术前连续灌胃给药3 d，1次/d。用生化法观察缺血90 min再灌注24 h大鼠额顶部皮质髓过氧化物酶（MPO）活性、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛（MDA）含量、三磷酸腺苷（ATP）含量及脑含水量变化，并进行2，3，5三苯基氯化四氮唑（TTC）染色检测脑梗塞体积。结果Tan A治疗组脑梗塞体积较缺血再灌注组减小，高、低剂量组之间差异亦具有显著性（P<0.05）；与缺血再灌注组比较，Tan A治疗组显著

3、降低MPO活性、MDA含量，增加SOD 、ATP含量，降低脑组织含水量，高、低剂量组之间差异亦具有显著性（P<0.05）。结论Tan A对缺血再灌注脑损伤具有保护作用，其机制可能与减轻缺血再灌注损伤炎症反应，减轻氧化性损伤和改善能量代谢有关。 【关键词】  缺血再灌注； 髓过氧化物酶； 自由基； 三磷酸腺苷； 丹参酮Abstract：ObjectiveTo study the effect of Tanshinone A (Tan A)  on neutrophils infiltration and the contents of free radical and

4、ATP in ischemic frontal and parietal cortex of cerebral ischemia reperfusion（I/R） rats.MethodsIn this experiment, rats were randomly divided into 4 groups, namely sham operated group, I/R group,low dose Tan A treated group and high  dose Tan A treated group. The focal middle cerebral artery occ

5、lusion(MCAO) model was made by suture-occluded method.Rats were pretreated with Tan A ig for 3d,respectively. After 90min MCAO following 24h of reperfusion, the MPO activity, the contents of SOD and MDA in ischemic frontal and parietal cortex were investigated. TTC staining was used to calculate the

6、 cerebral infarct volume.ResultsCompared with I/R group,cerebral infarction volume in low dose Tan A treated group and high  dose Tan A treated group decreased in a dose-dependent manner (all P<0.05). Compared with I/R group, low and high dose Tan A treated groups dose-dependently reduced MP

7、O activity,the content of MDA and brain water content, increased the activity of SOD and the content of ATP. ConclusionTan A may  aueviate cerebral ischemia-reperfusion injury by decreasing the inflammation reaction , free radicals and the disbanlance of energy metabolism.Key words：Ischemia-rep

8、erfusion; Myeloperoxidase; Free radical; ATP；Tanshinone A    丹参Salvia miltorrhiza Bge为唇形科多年生草本植物，是我国传统具有活血化淤作用的中药，已被广泛用于心脑血管疾病的治疗，但其作用机制尚不十分清楚。丹参酮( Tanshinone)是丹参的有效活性组分，其中丹参酮A（Tanshinone A，Tan A） 为丹参酮中含量最高的活性成分。本实验采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，研究丹参酮A对大鼠脑缺血再灌注损伤缺血区额顶部皮质中性粒细胞浸润、自由基含量、能量代谢、脑组织含水量及梗塞体

9、积变化的影响，探讨其对脑再灌注损伤保护作用机制。1  材料与方法1.1  药品与试剂 Tan A由提供上海第一生化药业有限公司提供，纯度85。髓过氧化物酶（MPO），丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。TTC购自中国医药集团上海化学试剂公司。1.2  动物分组及给药方法健康Wistar大鼠，雄性，清洁级，共100只，质量（250±30）g（广西医科大学动物实验中心提供）。按随机分组原则分成假手术组（25只）、缺血再灌注组（25只）、Tan A低剂量治疗组（25只）及Tan A高剂量治疗组（25只）。Ta

10、n低剂量治疗组（15 mg/kg）和高剂量治疗组（30 mg/kg）均于术前连续灌胃给药3 d，1次/d，假手术组和缺血再灌注组给予等量的生理盐水灌胃。第3天给药后1 h建立缺血90 min再灌注24h动物模型。1.3  动物模型的建立参照Longa等1的方法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。采用颈外动脉插入线栓法，各组均进行左侧大脑中动脉栓塞。线栓采用石蜡线栓。线栓直径约0.27 mm，插入深度约18 mm，此时线栓头位于大脑中动脉起始部。缺血90 min时，抽提线栓实现再灌注。神经功能缺陷评分：按照 Longa等1评分标准，各组分别在再灌注24 h进行评分。0分：正常，无神经学征象

11、；1分：动物不能完全神展右前肢；2分：动物右侧肢体瘫痪，行走时向右侧转圈，出现追尾现象；3分：动物行走向右侧跌倒，或动物不能站立或动物打滚；4分：无自发活动，有意识障碍。神经功能缺陷评分在13分为模型成功。1.4 MPO活性的测定 再灌注24h，将大鼠开颅取脑，置于4冰箱5 min，在冰浴下取左侧距离嗅球尖端711 mm之间的额顶部皮质，以试剂盒提供的匀浆介质制成脑组织匀浆。严格按试剂盒说明书步骤要求操作，计算出MPO活力单位。1.5 MDA和SOD的测定再灌注24h，将大鼠开颅取脑，置于4冰箱5 min，在冰浴下取左侧距离嗅球尖端711 mm之间的额顶部皮质，以试剂盒提供的匀浆介质

12、制成脑组织匀浆（步骤和方法同上）。严格按试剂盒说明书步骤要求操作，计算出MDA和SOD含量。1.6  三磷酸腺苷（ATP）含量测定再灌注24 h，将大鼠开颅取脑，置于4冰箱5 min，在冰浴下取左侧距离嗅球尖端711 mm之间的额顶部皮质，迅速加入乙腈，混匀，冰浴离心脱蛋白，离心后取上清液水系滤膜过滤后，-86保存。用高效液相测定ATP含量。1.7  脑含水量检测再灌注24 h，各组随机取5只大鼠，断头取脑后，快速称取左右大脑半球湿重，置110115烤箱内烤至恒重，再分别称其干重，用(湿重- 干重) /湿重的百分比，作为衡量脑含水量指标。1.8 TTC染色再灌注24h，将各组另外5只大鼠深麻后开颅取脑。将鼠脑置于4冰箱20min后，将其切