冷浸法提取丹参脂溶性部位工艺研究

1、冷浸法提取丹参脂溶性部位工艺研究    【关键词】   丹参/生产与制备;丹参/化学;丹参酮A/分析;色谱法，高压液相;正交试验丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎，具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦的功效1。 现代 医学 认为，丹参具有扩张冠状动脉，增加冠状动脉血流量，防止心肌缺血和心肌梗死，加快微循环血流，促进毛细血管网开放，抑制心肌收缩，减少能量消耗，扩张血管，降低胆固醇、血脂，抑制凝血，激活纤溶，稳定红细胞膜，提高缺氧耐受力，增加肝脏血流量，保护肝损伤细胞，抗肝纤维化，抑制中枢神经系统以及消炎

2、抗菌等作用2。其脂溶性成分具有抗菌、抗炎、抗氧化等药理作用3。目前提取丹参脂溶性成分的方法主要有乙醇回流法和超临界CO2萃取法4。丹参酮A是丹参脂溶性主要成分之一，丹参酮A对热敏感，在提取制备过程中容易被破坏5，超临界CO2萃取法成本较高。冷浸提取法工艺简单，可室温下操作且成本低。本文对冷浸法提取丹参中的脂溶性部位工艺进行系统研究，旨在优选最佳提取工艺条件，现报道如下。 1仪器和试药 LC10AT高效液相色谱仪(日本岛津);SPD10A紫外检测器(日本岛津);N2000 工作 站;丹参酮A对照品购自 中国 药品生物制品检定所(批号：0766200011);丹参购自山东药材市场，鉴定人为广州中医

3、药大学中药学院关世侠副教授;甲醇为色谱纯，购自SIGMA公司;纯水以双蒸法自制。 2方法与结果 21对照品溶液的制备取丹参酮A对照品约10 mg，精密称定，置25 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀;精密量取1 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。22色谱条件色谱柱：Kromasil C18柱(250 mm×46 mm);流动相：甲醇水(体积比为7525);流速：1 mL/mim;检测波长：270 nm。在此条件下测定丹参酮A对照品及丹参提取物。23标准曲线分别吸取对照溶液25、50、75、100、150、200 L，注入液相色谱仪。以丹参酮A进样量(X)对峰面积(Y

4、)进行线性拟合，丹参酮A回归方程为Y=4×106X，r=0999 4。结果表明：丹参酮A在0039 20313 6 g范围内线性关系良好。24溶剂乙醇浓度选择取8份丹参粉末(过3号筛)，每份约03 g，精密称定后将每2份分成1组，分别精密加入10 mL体积分数为65%、75%、85%、95%的乙醇，冷浸5 h，滤过，收集续滤液，精密量取1 mL置10 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别精密吸取5 L注入液相色谱仪进行测定。 计算 药材提取物中丹参酮A含量：p丹参酮A=m丹参酮A(g)/m药材(g)×100%。表1结果显示，体积分数85%乙醇提取丹参酮A含量比体积分数9

5、5%乙醇提取丹参酮A含量低125%,故本实验选择体积分数95%乙醇作为提取溶剂。25粉碎提取试验取同一批丹参药材，一份粉碎(过3号筛)，一份切碎，再分别称取3份，每份50 g，加8倍量体积分数95%乙醇冷浸过夜，滤过，精密吸取1 mL置10 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别精密吸取5 L注入液相色谱仪测定。结果见表2。两组间比较无显著性差异(P>005)。所以从节省能源上考虑，丹参药材不必粉碎成粉末，只需切碎后进行投料。26正交试验选用体积分数95%乙醇作溶剂，取丹参50 g，共9份，按正交条件进行试验，结果见表3、表4表1溶剂乙醇浓度选择试验结果表2粉碎提取试验结果表3因素水平

6、表27方差分析将正交试验结果进行方差分析。表5结果显示，A(乙醇用量)、B(冷浸次数)、C(冷浸时间)影响冷浸提取效果的因素顺序为：B>C>A，B因素对提取有显著性影响，A因素和C因素对提取无显著性影响，考虑到节省能源和时间以有利于 工业 生产，因此确定提取工艺为A2B2C2，即用8倍量体积分数95%乙醇冷浸提取2次，每次3 h。28工艺验证试验为考察上述优选提取工艺的稳定性，取丹参3份，每份50 g，按该工艺条件即药材用8倍量体积分数95%乙醇冷浸提取2次，每次3 h，分别测定丹参酮A提取量。结果见表6。按正交实验优先的最佳工艺进行验证试验，3次结果都处于较高水平，这说明该提取工艺是稳定可行的。表4正交水平表表5正交方差分析表6工艺验证试验结果3程文君,张艳萍.丹参脂溶性成分抗菌消炎作用及其 临床 应用J. 中国 现代实用 医学 杂志,2007,3(6):61.4赵小亮,雷浩东,张继.丹参有效成分提取的研究概述J.安徽 农业 科学 ,2007,35(6):1795.5苏子仁,刘中秋.丹参醇提液在浓缩、干燥工艺过程中的化学成分变化研究(I)丹参酮A湿热降解机理探讨J.中成药,1997,19(1):5.6周昊,彭国平.丹参的传统提取工艺与超临界CO2萃取大孔树脂联用工艺的比较研究J.中华中医药学刊,2007,25(4):