秦皮中秦皮甲素的二阶导数差示脉冲极谱法定量研究

1、    秦皮中秦皮甲素的二阶导数差示脉冲极谱法定量研究        摘要：目的：建立中草药秦皮中秦皮甲素的二阶导数差示脉冲极谱定量分析方法。方法：二阶导数差示脉冲极谱法。结果：秦皮甲素在乙醇-2mol.L-1氯化锂-水（215）的底液中，于-1.703V（vs Ag/AgCl）处出现一良好的二阶导数差示脉冲极谱法峰，其峰幅值与秦皮甲素在0.21.6mmol.L-1范围内呈良好的线性关系（r=0.999 8），检测限为50nmol.L-1。结论：本法简便、快速、灵敏，结果准确

2、。关键词：秦皮；秦皮甲素；二阶导数差示脉冲极谱法；定量分析中分类号：R917文献标识码：A文章编号：1008-9926(2000)05-254-04Study on Quantitative Determination of Aesculin in Cortex Fraxini by Secondary Derivative Differential Pulse PolarographyLIANG Yun-Ai(Rizhao Institute for Drug Control,Rizhao276800,Shandong)ZHU Ji-Jun(Donggang People's Hos

3、pital of Rizhao,Rizhao276800,Shandong)LIU Jian-Fang(Rizhao City People's Hospital,Rizhao276800,Shandong)ABSTRACT：Aim The secondary derivative differential pulse polarography was developed for the quantitative determination of the aesculin in medicinal herbs (Cortex Fraxini).Method Secondary deri

4、vative differential pulse polarography.Results By using containing ethanol-2mol.L-1 lithium chloride-water(215)solution,there is a very good secondary derivative differential pulse polarogram peak at -1.703 V(vs Ag/AgCl).The linear relationship between concentration of aesculin and peak height was o

5、btained in the concentration range of 0.21.6mmol.L-1(P<0.01).The determination limit was 50nmol.L-1.Conclusion The method is simple,rapid,sensitive.The results are accurate.KEY WORDS：Cortex Fraxini;Aesculin;Secondary derivative differential pulse polarography;Quantitative determination秦皮始载于神农本草经，

6、列为中品，为木犀科植物苦枥白蜡树、白蜡树、尖叶白蜡树、宿柱白蜡树的干燥枝皮或干皮。具有清热燥湿、收涩、明目的功效，用于热痢、泄泻、赤白带下、目赤肿痛、目生膜等症。其主要有效成分为秦皮甲素1等。秦皮中秦皮甲素的含量测定，药典法2采用薄层色谱法提取分离后，再用紫外分光光度法测定其含量。笔者用二阶导数差示脉冲极谱法（SDDPP）对其进行了定量分析，结果平均回收率为100.7%，RSD为1.58%，n=12。1实验部分1.1主要仪器与试药DP-A型微分脉冲极谱仪：(笔者与中科院大气物理研究所联合研制)；Milli-Q型纯水器(日本日立公司)；Pye Unicam 8800UV/Vis Spectrop

7、hotometer(英国Beckman公司)。秦皮甲素对照品（中国药品生物制品检定所，批号 0740-9303）；秦皮标准品（中国药品生物制品检定所，批号 0970-9302）；秦皮购于日照市药材公司，经山东省药品检验所中草药室徐本明副主任药师鉴定。氯化锂、乙醇、正丁醇、氯仿、甲苯、甲酸、氯化钾等均为分析纯；实验用水为去离子蒸馏水经Milli-QII型纯水器处理制得的高纯水。秦皮甲素标准溶液（40g*ml-1)：精密称取秦皮甲素对照品20.0mg，置500ml容量瓶中，加乙醇125ml溶解，加2mmol*L-1氯化锂溶液62.5ml，加水定容即得。1.2实验条件的选择将DP-A型微分脉冲极谱仪

8、打到SDDPP档。选用滴汞电极为工作电极，滴间隔为15s；Ag/AgCl电极为参比电极，内装1.0mol*L-1的氯化钾参比溶液；微铂电极为辅助电极。将其余4个可能影响试验准确度的试验条件各分为3个水平，采用正交设计试验法进行选择，其因素与水平的设计见表1。表1秦皮甲素因素与水平的设计水平因素A预置电压(V)B电流灵敏度(A.V-1)C扫描速度(mV.s-1)D脉冲振幅(mV)1-0.0105250102-0.05010300203-0.1001535040各取秦皮甲素标准溶液8ml，加入极谱池中，按上述设计，用L9（34）表安排正交设计试验，为了便于统计学处理，将回收率试验结果减80%，结果

9、见表2，表3。实验结果经统计学处理后表明，4种因素对测定结果准确度影响的大小顺序为D>A>B>C，4种因素中，D影响显著（P<0.05），A、B、C影响不显著（P>0.05），最佳试验条件为A2B2C1D3。据此，将4个主要试验条件分别设定为-0.050V，扫描速度为250mV.s-1，电流灵敏度为10A.V-1，脉冲振幅为40mV。1.3实验方法精密称取秦皮甲素对照品10.0mg，置250ml容量瓶中，加乙醇62.50ml溶解，加2mmol.L-1氯化锂溶液31.25ml，加水至刻度，摇匀。取8ml，加入极谱池中，在上述条件下，自-0.050V-2.050V以2

10、50mV*s-1的速度进行阴极扫描，得谱见1。 表2秦皮甲素四因素对测定结果的影响试验号因素回收率试验结果(-80%)合计(k)ABCDyik111111.603.300.205.10212223.995.552.1111.653133313.6016.449.8239.86421237.214.568.9520.725223110.109.9012.4432.44623127.0214.558.8830.4573132-3.20-2.88-6.77-12.858321310.0216.3312.6539.0093321-7.99-5.22-3.46-16.67k156.6112.9774.5

11、520.87k283.6183.0915.729.25k39.4853.6459.4599.58k213204.6921168.22085557.7025435.5589k226990.63216903.9481246.49855.5625k23Ri=k21+k22+k2389.870410285.19462877.24969949.41863534.30259338.4959916.176411207.2958Ri/91142.79941105.49091037.61061245.2551S1=R1/9-CT312.7961275.4876207.6073415.2518SE2=S总-S总1

12、=855.2883fE2=18表3秦皮甲素方差分析表来源平方和自由度均方F值显著性ASA312.79612SA/FA156.3980156.3980/47.5163.29P>0.05BSB275.48762SB/FB137.8938137.8938/47.5162.90P>0.05CSC207.60732SC/FC103.8036103.8036/47.5162.18P>0.05DSD415.25182SD/FD207.6259207.6259/47.5164.47P<0.05误差ESE855.288318SE/FE47.5162066.4311261秦皮甲素的二阶导数

13、差示脉冲极谱2结果与讨论2.1线性试验精密称取秦皮甲素适量，置容量瓶中，加乙醇溶解，精密量取此液适量，置50ml容量瓶中，加乙醇-2mol.L-1氯化锂-水（215）溶液稀释制成含秦皮甲素为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6mmol.L-1的秦皮甲素标准溶液，各取8ml加入极谱池中，在上述条件下进行测定。结果表明，在0.21.6mmol.L-1的浓度范围内，秦皮甲素的浓度C(g.ml-1)与其SDDPP的峰幅值d2i/d2E(mm)呈良好的线性关系。回归方程为：C=0.402 26(d2i/d2E)+24.112 0r=0.999 8,n=82.2加样回收率试验精密

14、量取已知含量的秦皮提取液(含秦皮甲素1.58%）适量，用乙醇-2mol.L-1氯化锂-水(215)溶液制成含秦皮甲素为80.0g.ml-1的溶液，精密量取此液20.00ml加入容量瓶中，精密加入秦皮甲素标准溶液（40.0g.ml-1）7.5、10.00、12.50ml，分别按上述条件进行回收率试验，结果见表4。表4秦皮甲素加样回收率测定结果样品含量(g.ml-1)加入量(g.ml-1)测得量(g.ml-1)回收率(%)(%)RSD(%)32.06.037.5098.68 32.06.038.99102.632.06.037.7899.4232.06.037.9099.7432.08.041.2

15、2103.0 32.08.040.56101.4100.71.5832.08.039.7299.3032.08.040.08100.232.010.043.26103.032.010.042.70101.732.010.041.6699.1932.010.041.9899.952.3秦皮中秦皮甲素的含量测定分别取4批不同品种、不同产地的秦皮，于80烘干至恒重，分别精密称取1.0g，置50ml量瓶中，加乙醇12.5ml，称重，回流提取30min。放冷，称重，加乙醇补足重量，加2mol*L-1氯化锂溶液6.25ml，加水至刻度，摇匀，用滤纸滤过。弃去初滤液，取续滤液8ml加入极谱池中，在上述条件下

16、进行测定，并与药典法2测得结果进行比较，其结果基本一致，见表5。 表5秦皮中秦皮甲素的含量测定结果（n=10）名称产地本法药典法含量(%)RSD(%)含量(%)RSD(%)苦枥白蜡树Fraxinus 吉林1.591.691.602.26rhynchophylla Hance.白蜡树Fraxinus四川1.551.531.562.03chinensis Roxb.尖叶白蜡树Fraxinus chinensis陕西1.561.601.542.18Roxb.var.acuminata Lingelsh. 宿柱白蜡树Fraxinus陕西1.521.491.502.06stylosa Lingelsh.

17、2.4检测限的测定精密称取秦皮甲素对照品适量，置容量瓶中，加乙醇溶解，精密量取适量，用乙醇-2mol.L-1氯化锂-水（215）的溶液稀释制成含秦皮甲素为50、60、70nmol.L-1的溶液，将仪器灵敏度调为0.01A.V-1，其他按上述条件进行扫描，上述3个浓度在-1.703(vs Ag/AgCl)处均可出现二阶导数差示脉冲极谱峰，且峰幅值与其浓度仍呈线性关系，结果表明，本法测定秦皮甲素，检测限可达50nmol.L-1，可用于本品的痕量分析。2.5电极反应机理的初步探讨秦皮甲素的化学结构中含有不饱和的>C=O，在酸性条件下，可于滴汞电极上发生下述还原反应，产生良好的二阶导数差示脉冲极

18、谱峰，据此，对秦皮甲素及秦皮中秦皮甲素的含量建立了二阶导数差示脉冲极谱定量测定法。其电极反应式如下：2.6电极过程可逆性的初步探讨取秦皮甲素样品溶液用常规脉冲极谱法（NPP）3进行正、反向扫描，结果正、反向扫描时NPP波高的比值为71，证明本电极过程是不可逆的。因为在不可逆体系中，由于反扫描时还原产物不会再氧化，所以正、反向扫描时NPP的波高比值为71，理论公式为：式中：i1cath_阴极电流强度；i1anod-阳极电流强度；t1_直流极谱中的汞滴滴下时间，ms;tm_加脉冲到测量电流时的时间隔，ms。 3结论3.1在上述规定条件上，用二阶导数差示脉冲极谱法3测定秦皮甲素，其极谱峰电位为-1.703V（vs Ag/AgCl），可做为本品的定性参考。3.2本试验通过对实验条件的筛选，不仅有利于本法的准确度，而且有利于待测成分出峰，不利于其中可能存在的杂质和分解产物同时出峰，即便它们及本品结构中的其它极谱活性基团可能出峰，亦可经过导数技术处理，故可消除其干扰。3.3本法是在一阶导数差示脉冲极谱法基础上建立起来的一种测试分析新技术4，具有简便、快速、灵敏、准确、经济等特点3。除用于秦皮甲素及秦皮中秦皮甲素的定量分析外，现已成功地用于抗生素5及中草药6等药物的定量分析。)作者简介：梁云爱(1960-)，男，副主任药师。梁云爱（山东省日照市药品检验所山东日照276800）朱