试剂盒提DNA的原理

1、试剂盒提DNA的原理基因组DNA提取试剂盒简介DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，为了进行测序、杂交、基因表达、文库构建等试验， 获得高分子量和高纯度的基因组DNA是非常重要的前提，因此基因组DNA勺提取也是分子生物学试验技术中最重要、最基本的操作之一。试剂盒来进行不同样品的抽提。kVSn2KZ、基因组DNA提取的原则1、保证核酸一级结构的完整性（因为遗传信息全部储存在核酸一级结 构中，故完整的一级结构是保证核酸结构与功能研究的基层2、排除其它分子（如蛋白质、多糖,、脂类、有机溶剂等）的污染，使下游试验顺利进行。二、基因组DNA提取的原理和方法DNA与组

2、蛋白构成核小体，核小体缠绕成中空的螺旋管状结构，即染色丝，染色丝再与许多非组蛋白形成染色体。 染色体存在于细胞核中， 外有核膜及胞膜。从组织中提取DNA必须先将组织分散成单个细胞,然后破碎胞膜及核膜，使染色体释放出来，同时去除与DNA结合的组 蛋白及非组蛋白。5UXEZ2D1、样品预处理从各种不同来源的样品（如细菌、酵母、血液、动植物组织细胞等）Solarbio公司提供各种不同样品基因组DNA提取试剂盒，如植物、动物、细菌、细胞、血液、酵母等基因组DNA提取试剂盒。所提取的基因组纯度高，片段大小在50kb左右。用户可根据需要选用不同的)OGRXvn2z试剂盒提DNA的原理中提取高纯度的基因组D

3、NA因细胞结构及所成分不同，样品预处理方式也不同， 以下简单介绍常用提取材料的预处理方式， 若需详细了 解，请参考本公司各基因组DNA提取试剂盒说明书。reJIDua。部分样品预处理方式 植物材料液氮研磨 动物材料匀浆、液氮研磨 培养细胞蛋白酶K处理 细菌溶菌酶破壁血液红细胞裂解液去红细胞2、细胞裂解CTAB法适用于植物组织、真菌等。CTAB是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，并与核酸形成复合物。该复合物在高盐溶液中(0.7M NaCl)是可溶的，通过有机溶剂抽提， 去除蛋白、多糖、多酚等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。zFGnDqLSDS法:适用于细菌、血液、酵母、动物组织、细胞等。SD

4、S是一种阴离子去污剂，可溶解细胞膜，裂解细胞，使蛋白质变性、染色体解析。其它裂解方法： 物理方式：机械剪切、超声波破碎、研磨匀浆等试剂盒提DNA的原理化学方式：异硫氰酸胍、碱裂解等 酶法：蛋白酶K 3、DNA分离纯化纯化要求：的成分。低程度。纯化方法：细胞破碎后，常使用吸附材料结合方法去除杂质和纯化DNA主要有硅基质材料、 阴离子交换树脂和磁珠等。 因硅基质材料可特异吸附核 酸DNA使用方便、快捷，不需要使用有毒溶剂如酚、氯仿等，使得 提取基因组像过滤一样简单，因此硅基质材料成为大规模分离纯化DNA勺通用方法。ikw2VKu。硅基质材料吸附核酸的原理：主要利用DNA在高盐低pH值环境下与硅基质

5、材料相结合，在低盐高pH值环境下与硅基质材料脱离的特征。其机理可能是高浓度盐离子破坏了硅基质水分子结构，形成阳离子 桥，当盐被清除后，再水化的硅石破坏了基质和DNA之间的吸引力,因而DNA从硅基质上被洗脱下来。Ua7Dc7G注意事项： 尽量简化操作步骤， 缩短提取过程， 以减少各种有害因素对核酸的破坏。减少化学物质对DNA勺降解，为避免过酸、过碱对DNA双链中磷酸二 酯键的破坏，操作多在pH值4.0-10.0的条件下进行。UMojPka防止基因组DNA的生物降解，主核酸样品中不应存在对酶（如核酸内切酶、DNA聚合酶等）有抑制作用其它生物大分子如蛋白质、多糖、多酚和脂类分子等污染应降低到最排除其

6、它核酸分子的污染，如提DNA寸应去除RNA反之亦然。试剂盒提DNA的原理要是DNase降解基因组DNA DNase需二价金属阳离子如Mg2+等的激活，可用EDTA等金属离子螯和剂螯 和Mg2以抑制DNase的活性。jg9KwHx减少物理因素对DNA的降解，物理降解因素主要包括机械剪切力(如剧烈振荡、 搅拌等)，细胞突然置于低渗液中导致的细胞爆炸式破裂，DNase大量释放，样品反复冻融和咼温等。GPPuvnC4、DNA洗脱收集DNA勺洗脱效率取决于以下重要因素:洗脱液成分： 采用硅基质膜吸附的DNA可将DNA在低盐高pH值条件下洗脱下来。pH值在7.0-8.5之间洗脱效率较高，pH值低于7.0则

7、洗脱效率很低。般基因组提取试剂盒中的洗脱缓冲液就是TE(pH8.0)，既为DNA从硅基质膜上洗脱下来提供良好的pH环境，其中的EDTA又能保证DNA不被DNase降解，同时由于EDTA浓度非常低，对核酸内切酶、DNA聚合酶的影响非常微弱，不影响后续试验，可放心使用。JSS9jsu。洗脱液体积: 当洗脱液体积小于30ul时，洗脱效率很低且不稳定；当洗脱液体积在50-200ul时，洗脱效率稳定在80-90%，并可保证得到最大产量, 因此洗脱液体积不能小于30ul。F7Sbyjh。加洗脱液部位：100-200U1洗脱液能完全覆盖硅基质膜，DNA的洗脱量可得到保证,但当洗脱液体积较少如30-50ul时

8、，须在硅基质膜中间部分悬空滴加洗脱液，以确保少量的洗脱液能完全覆盖硅胶膜。coZcBJ3。洗脱液的温度： 在加洗脱液之前，先将洗脱液在60-75 C水浴中预热10分钟，可有试剂盒提DNA的原理效提高DNA勺洗脱效率。洗脱时间和次数： 加入预热的洗脱液后，可在室温放置2-5分钟使DNA完全溶解在洗脱 液里通过离心而洗脱下来。 同时可进行二次或三次洗脱， 即将前次洗 脱下来的洗脱液再上柱、离心，使前次没有洗脱下来的DNA再次溶解 在洗脱液里，从而提高DNA勺产量。lNnE4qY。5、DNA勺定量及检测提取得到的DNA片段需从分子质量、浓度、纯度等方面进行检测，从 而判断DNA质量。用琼脂糖凝胶电泳

9、分析DNA分子质量: 得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力 等因素有关。Solarbio公司的基因组DNA提取试剂盒提取的不同材 料基因组DNA片段大小一般在50kb左右，能很好地满足后续试验的 要求。Wr6k06j。通常用琼脂糖凝胶电泳分析DNA分子质量时，以溴酚蓝为示踪染料,EB染色，紫外观察，并与DNA分子量标准对照即可判断所提DNA的平均分子量。高质量的基因组DNA应显示为单一条带，如DNA 降解则 表现为弥散条带。athpANi。用紫外分光光度计检测DNA浓度和纯度: 浓度测定：DNA在OD26（处有显著吸收峰，OD260直为1相当于大约50ug/ml双链D

10、NA。以下简单介绍OD260的测定方法: 所提基因组DNA样品=100ul进行OD260值测定的待测样品=20ul所提基因组DNA样品+180ulTE=200ulDNA稀释倍数=200ul/20ul=10倍 如200ul待测样品OD26（值=0.2待测样品浓度（即100ul基因组DNA羊品浓度）=50ug/ml X OD2601X稀释倍数=100 ug/mlSNdMfki。试剂盒提DNA的原理所提100ul基因组DNA羊品总量=100 ug/ml X 100ul=10ug DNA纯度测定:般用OD260/OD28值检测DNA羊品的纯度。 正常OD260/OD28值约 为1.7-1.9，说明DN

11、A屯度较好；若OD260/OD28值小于1.7，说明可能有蛋白污染；若OD260/OD28值大于2.0，说明可能有RNA亏染或DNA已经降解。Y5HFBtG注：因为pH值和离子会影响光吸收值，因此洗脱时如不使用洗脱缓 冲液，而使用去离子水，OD260/OD28值会偏低，但并不表示纯度低。试剂盒提DNA的原理在碱性条件下较稳定，因此一般用TE（pH8.0）10 mMTris-HCl（Tris与盐酸形成强的缓冲对）；1 mMEDTA乙 二胺四乙酸，能螯合二价金属阳离子，抑制DNase的活性）；PH8.0（碱性条件可减少DNA勺脱氨作用，防止降解）。ddH2O的正常pH值为7.0,可作为DNA勺储存液，但有些试验室制备的ddH2O呈酸性（pH值小于7.0）,这不仅影响DNA勺洗脱效