卵巢上皮性癌组织APE1和P53的表达及其耐药性

1、卵巢上皮性癌组织APE1和P53的表达及其耐药性         08-10-11 15:55:00     编辑：studa20             作者：张颖，王建，辛晓燕，王东，向德兵，林莉  【摘要】  目的： 探讨脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶（APE1）基因和P53在卵巢上皮性癌中的表达相关性，探讨两者与卵巢癌化疗耐药的相关性.

2、方法： 应用免疫组织化学法对原发性卵巢癌组织120例中脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶（APE1）和P53表达状况进行测定. 结果： P53表达与APE1表达强度和亚细胞定位无相关性（P>0.05）. APE1/p53不同表达状态的卵巢癌组织对铂类为基础的化疗敏感性有统计学差异(P<0.05). 结论：APE1和P53在铂类的耐药性产生过程中发挥重要作用，对预测化疗药物敏感性具有一定的临床指导价值. 【关键词】  卵巢肿瘤 脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶 基因 p53 DNA修复【Abstract】 AIM: To investigate the correlation between p

3、53 and apurinic/apyrimidinic endonuclease 1 (APE1) gene expressions in epithelial ovarian carcinoma and their roles in the chemoresistance of ovarian carcinoma. METHODS: The expressions of APE1 and p53 in 120 cases of primary ovarian carcinoma were determined using immunohistochemistryThe relationsh

4、ip between the expression of APE1 and clinical pathological features was analyzed. All the patients did not receive chemotherapy or radiotherapy before operation. RESULTS: All epithelial ovarian carcinomas expressed APE1.P53 gene immunoreactivity in epithelial ovarian carcinomas was present by 50.8%

5、. The location status of APE1/p53 was significantly correlated with platinum-based chemotherapy sensitivity (P<0.05)CONCLUSION: APE1 and p53 play important roles in the drug-resistance of ovarian carcinoma to platinum-based chemotherapy,so they may be used as the indicators of the chemotherapy se

6、nsitivity.【Keywords】  ovarian neoplasms；apurinic/apyrimidinic endonuclease；genes,p53；DNA repair0   引言    卵巢癌是我国最常见的妇科恶性肿瘤之一，耐药是导致其化疗失败的主要原因. 脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(apurinic/apyrimidinic endonuclease 1，APE1)具有DNA损伤修复及氧化还原双重功能，是一种多功能蛋白，对维持DNA的稳定和调节细胞因子的表达具有重要作用. 研究表明，APE1和卵巢癌以铂类为基础

7、的化疗疗效和化疗耐药有相关性；此外，p53蛋白的状态是也决定卵巢癌耐药性的重要因素之一1. 因此，我们采用免疫组化SP法检测卵巢癌中APE1和P53的表达相关性，分析他们与临床化疗疗效及病理指标间的关系.1    材料和方法1.1   材料   标本：取自第四军医大学西京医院和第三军医大学大坪医院1998-01/2007-03经手术确诊的卵巢癌初治患者120例，年龄1981（平均47.2）岁. 其中浆液性囊腺癌54例，粘液性囊腺癌35例，子宫内膜样癌7例,未分化腺癌24例；细胞学分级中高分化癌19例，中分化癌68例，低分化癌

8、33例. 按国际妇产科联盟（FIGO)2003年手术病理分期标准，I期23例、期11例、期73例、期13例. 术后均给予铂类为基础的联合化疗后随访78例，失访24例，随访率65.0%，失访病例截止日期取病例末次住院的出院日期. 试剂：浓缩型APE兔抗人mAb购自Novus  Biologicals公司，工作浓度为15000；SP免疫组化试剂盒Power VisionTM(IgG抗体-HRP多聚体)和DAB显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术公司.1.2   方法   所有组织标本均经甲醛固定，石蜡包埋，切片厚5 m，分别行HE染色核实诊断和SP二

9、步法免疫组化染色. 以PBS替代一抗作为阴性对照，已知APE1阳性的骨肉瘤标本作为阳性对照. 免疫化学分析采用二步法，二甲苯脱蜡，乙醇梯度水化，30 mL/LH2O2一甲醇室温10 min，微波抗原修复，滴加一抗，4过夜，37孵育30 min，DAB-H2O2显色，苏木素复染. 采用磷酸盐缓冲液代替一抗作为免疫染色阴性对照，采用已知APE阳性的骨肉瘤标本作为阳性对照.     将5 m石蜡切片脱蜡水化后,分别行HE染色核实诊断和SP二步法免疫组化染色. 二甲苯脱蜡，乙醇梯度水化，30 mL /LH2O2一甲醇室温10 min，微波抗原修复，滴加一抗，4过夜，37孵

10、育30min，DAB-H202显色，苏木素复染. 阴性对照用PBS代替一抗，已知阳性骨肉瘤组织切片作阳性对照. 光学显微镜镜下观察，免疫阳性信号为棕黄色细小颗粒. 参照文献采用半定量积分法，即对每张切片的阳性细胞率及阳性细胞着色强度进行分级计分，然后根据两项之和确定其阳性强度. 0分为阴性，1分为弱阳性，2分为阳性，3分为强阳性. 阳性细胞率即阳性细胞占计数细胞的比例，以随机计数10个高倍视野细胞为准，阳性细胞<5为0分，5%25%为1分，2650为2分，5175为3分，>75为4分，两项之和13分为弱阳性，35分为中度阳性，57分为强阳性.     统计学处理：采用SPSS13.0软件，对计数资料应用2检验，对等级资料进行秩和检验. P<0.05 为有统计学差异.2   结果 2.1   卵巢癌组织中APE1和P53的表达   APE1在正常卵巢组织中为核表达，而在卵巢上皮癌组织APE1广泛表达，亚细胞定位呈胞核表达、单纯胞质表达或核质共同表达，且其异位染色较胞核染色显著，胞核染色强弱不等. 卵巢癌组织APE1异位表达率为39.2. P53蛋白在卵巢上皮性癌组织中有一定的表达缺失，亚细胞定位为核表达，阳性表达率为50.8%. 在P53阴性表达的卵巢癌中，