W2102-4 酶联免疫法快速检测饲料中黄曲霉毒素总量-微教材

1、农产品/食品质量安全检测技术课程-微教材微课编号W2102微课名称酶联免疫法快速检测饲料中黄曲霉毒素总量所属模块生物安全快速检测子模块生物毒素/真菌毒素的快速检测关键词饲料；黄曲霉毒素总量；快速检测是否通用通用 农产品 食品是否重点建设是 否微课类型实验实训型微课形式实地拍摄式微课类型实验实训型教学目标1、 掌握黄曲霉毒素总量快速检测中的注意事项和检测方法教学内容知识点技能点1、 掌握黄曲霉毒素总量快速检测中的注意事项2、 掌握黄曲霉毒素总量快速检测的方法1、掌握黄曲霉毒素总量快速检测的方法2、掌握黄曲霉毒素总量快速检测中的数据计算知识讲解1、测定前注意事项（1）、使用之前将所有试剂和需用板条

2、的温度回升至室温(2025)。否则会导致所有标准品的OD值偏低，每加一种试剂前请将其摇匀。（2）、使用之后立即将所有试剂放回28。（3）、显色剂有任何颜色表明显色剂变质，0标准的吸光度值小于0.5，表示试剂变质。（4）、浓缩洗涤液低温下如有结晶属正常现象，请37水浴溶解后使用。（5）、洗板拍干后应立即进行下一步操作，如板孔干燥，则会出现标准曲线线性不好，重复性差的现象。（6）、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。（7）、黄曲霉毒素可致癌，应戴手套操作。边学边练任务：酶联免疫法快速检测饲料中黄曲霉毒素总量操作步骤：1、检测前准备先将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温(2025

3、)平衡30min以上，每种液体试剂使用前须摇匀。取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于28。不要冷冻，将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置，以免混淆。2、上机检测具体检测过程主要分为以下几个步骤：（1）、加标准品和样本：加标准品/样本50L到对应的微孔中。 （2）、再加入黄曲霉毒素总量（AFT）酶标物50L /孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境中反应15min。（3）、洗板：将微孔板取出，小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液300L/孔，充分洗涤4次，每次间隔10s，用吸

4、水纸拍干。（4）、显色：加入底物液100L/孔，用盖板膜盖板后置室温避光环境反应15min。（5）、测定：加入终止液50L /孔，轻轻振荡混匀。（6）、设置检测参数：打开机器，设定酶标仪于450nm处(建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据)，按如下顺序选择“样品测试”“毒素类”“黄曲霉总量”“修改”“稀释倍数”“标准液浓度值”“返回”“毒素类”“黄曲霉总量”“测试”“标准品重复个数”“起始样本号”样品名称“饲料”“检测”“结果”“打印”，检测报告就出来了，特别提醒本次检测项目稀释倍数为24，标准样品设置了0，六个浓度，样本3个，每个均设2个重复。3、结果处理1、百分吸光率的计算标准品或样本的吸光值的平均值（双孔）除以第一个标准（0标准）的吸光度值，再乘以100%，即百分吸光度值（%）=B/B0100%B标准溶液或样本溶液的平均吸光度值B00ng/mL(ppb)标准溶液的平均吸光度值。2、标准曲线的绘制与计算以标准品百分吸光率为纵坐标，以黄曲霉毒素总量标准品浓度（ng/mL(ppb)）的对数为横坐标