虎杖植物提取物国际商务标准编制说明

1、国际商务标准虎杖提取物编制说明1 任务来源 本标准的制定工作，是由中国医药保健品进出口商会提出而进行的,国际商务标准植物提取物编号为WM 。本标准由长沙绿蔓生物科技有限公司、中国医药保健品进出口商会等单位负责起草。2 标准制定的意义 虎杖提取物是以蓼科植物虎杖的干燥根和根茎中提取分离获得。其提取物中白藜芦醇具有抑制单胺氧化酶、抗氧化、消除自由基、抗血小板聚集抗肿瘤等功效1，已广泛用于医药、保健品、化妆品等多种行业，国际市场需求很大。常用天然提取物质量标准参考手册2003中规定了白藜芦醇的产品技术指标和检验方法，但在这当中没有规定白藜芦醇的来源是否为虎杖且这里面的规格是白藜芦醇及糖苷95%；中华

2、人民共和国药典2010版一部中规定了原料虎杖的产品技术指标和检验方法，但在这当中都没有规定对白藜芦醇的含量检测且对农药残留、重金属没有限制规定；查阅国外标准也没有找到控制该产品品质的相关标准。当前外贸出口贸易中的食品安全形式十分严峻，为保障国家外贸经济运行的安全和我国人民群众的食品卫生安全，及时建立虎杖提取物白藜芦醇的国内质控标准具有重要的现实意义。3 标准编写规则本标准遵循GB/T1.1-2009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则；GB/T20001.2-2001标准化工作指南 第2部分：采用国际标准的规则和GB/T20001.4-2001标准编写规则 第4部分：化学分析方法规则

3、编写。还参照相关国家标准编写指南的要求2 10。4 标准编制依据和主要内容4.1本标准主要从以下几方面制定产品的技术要求： 4.1.1 真伪方面： 鉴别。用感官及理化方法鉴别产品的真伪； 4.1.2 安全方面：按中国药典中药质量标准研究制定技术要求（国家药典委员会）中的规定，注重中药安全性检测方法和指标的建立和完善，加强对重金属及有害元素、残留溶剂、微生物等外源污染物的检测； 4.1.3 产品质量方面：参考中国药典2010年版及相关文献资料，根据产品的实际功效，选定相应的功效成分控制产品的质量；4.2 规格： 市场上虎杖提取物规格有很多种，其中不同规格的产品在某些技术参数上有所区别，在这里只是

4、针对常用规格，即50%、98%白藜芦醇两种规格。4.3 技术指标： 本标准参照中国常用天然提取物质量标准参考手册2003中白藜芦醇产品技术指标；欧洲药典、美国药典、日本药典中对重金属、溶剂残留、微生物的限度要求；结合抽查全国各地50%、98%规格虎杖提取的实际检测结果及客户对这产品的技术要求，最终确定本标准的产品技术指标。4.4 检测方法： 本标准中粒度、干燥失重、炽灼残渣、重金属、微生物检测采用中华人民共和国药典2010版一部附录中规定方法，溶剂残留检测采用中华人民共和国药典2010版二部附录中规定方法，白藜芦醇含量检测采用常用天然提取物质量标准参考手册2003中规定方法，鉴别及大黄素含量检

5、测参照中华人民共和国药典2010版一部正文中大黄规定方法，由于本标准中产品为提取物，所以在样品溶液制备过程中直接甲醇提取溶解即可。同时对各项检测方法分别进行方法学考察、样品测定。5 名称、分子式、相对分子质量及CAS编号5.1 中文名称：白藜芦醇。5.2 英文名称：Resveratrol。5.3 分子式： C14H12O3。5.4 分子结构式：5.5 分子量：228.245.6 国际食品法典委员会食品添加剂INS（International Numbering System）编号：958。5.7 CAS编号：501-36-0。6 产品技术要求6.1 性状描述：50%白藜芦醇规格的虎杖提取物呈现

6、黄棕色或棕褐色粉末、98%白藜芦醇规格的虎杖提取物呈现白色或类白色粉末。6.2 功能：白藜芦醇具有抑制单胺氧化酶、抗氧化、消除自由基、抗血小板聚集抗肿瘤等功效。6.3 技术指标确定6.3.1 感官指标 根据产品的生产要求，结合产品的实际情况进行描述，能直观的体现产品的外在质量。经对10批规格为50%白藜芦醇样品实际观察，样品多为黄棕色或棕褐色粉状，对10批规格为98%白藜芦醇样品实际观察，样品多为白色或类白色粉状。6.3.2 鉴别 白藜芦醇来源广，主要存在于葡萄属、蓼属、花生属、藜芦属等21个科、31个属的至少72种植物中，其中包括虎杖、决明、桑树等常用要用植物，以及葡萄、花生等农作物。为防止

7、其他掺假产品替代虎杖提取物，此标准中添加虎杖提取物的鉴别项，在中华人民共和国药典2010版一部正文虎杖中，大黄素为虎杖的一个鉴别成分，故在此标准中采用大黄素检出与否作为虎杖提取物的鉴别指标，而规格98%白藜芦醇纯度很高，故在此标准中鉴别项只针对50%规格的虎杖提取物，98%不在鉴别项范围内。 在此标准中，考虑大黄素的泻下活性，有对虎杖提取物中大黄素含量的限度要求，所以虎杖提取物中大黄素的含量测定同时作为其鉴别项6.3.3 粒度 按照中国药典2010版一部附录 B第二法对98%样品进行过筛分析时，发现98%白藜芦醇样品在筛动过程中由于很轻又很容易结团，如果不借助外力基本上很难过筛下去，考虑98%

8、白藜芦醇的特殊性，在此标准中没有98%规格的过筛分析。 按照中国药典2010版一部附录 B第二法规定方法对10批样品（50%规格）进行测定，测定结果见表1：表1 虎杖提取物（50%规格）粒度测定结果生产厂家批号规格80目过筛率（%）厂家AA-150%白藜芦醇97.3厂家AA-250%白藜芦醇96.6厂家BB-150%白藜芦醇97.1厂家BB-250%白藜芦醇96.9厂家CC-150%白藜芦醇95.4厂家DD-150%白藜芦醇98.1厂家DD-250%白藜芦醇96.2厂家EE-150%白藜芦醇94.8厂家FF-150%白藜芦醇95.7厂家GG-150%白藜芦醇96.7结果表明： 50%白藜芦醇过

9、80目筛的通过率大部分在95%以上，为了更好控制产品质量，将粒度的限度确定为：95%6.3.4 干燥失重 按照中国药典2010版一部附录 G规定方法对20批样品进行测定，测定结果见表2：表2 虎杖提取物干燥失重测定结果生产厂家批号规格干燥失重（%）厂家AA-150%白藜芦醇2.94厂家AA-250%白藜芦醇2.69厂家BB-150%白藜芦醇3.42厂家BB-250%白藜芦醇2.77厂家CC-150%白藜芦醇5.16厂家DD-150%白藜芦醇4.08厂家DD-250%白藜芦醇3.13厂家EE-150%白藜芦醇6.79厂家FF-150%白藜芦醇4.27厂家GG-150%白藜芦醇2.29厂家AA-3

10、98%白藜芦醇0.43厂家BB-398%白藜芦醇0.51厂家BB-498%白藜芦醇0.57厂家BB-598%白藜芦醇0.56厂家CC-298%白藜芦醇0.81厂家CC-398%白藜芦醇0.74厂家DD-398%白藜芦醇0.60厂家FF-298%白藜芦醇0.55厂家HH-198%白藜芦醇1.24厂家II-198%白藜芦醇0.36结果表明： 50%白藜芦醇的干燥失重绝大部分在5%以下，为了更好控制产品质量，将干燥失重的限度确定为：不得过5.0%。 98%白藜芦醇的干燥失重绝大部分在1%以下，为了更好控制产品质量，将干燥失重的限度确定为：不得过1.0%。6.3.5 炽灼残渣按照中国药典2010版一部

11、附录 J规定方法对20批样品进行测定，测定结果见表3：表3 虎杖提取物炽灼残渣测定结果生产厂家批号规格炽灼残渣（%）厂家AA-150%白藜芦醇2.29厂家AA-250%白藜芦醇2.30厂家BB-150%白藜芦醇3.61厂家BB-250%白藜芦醇1.11厂家CC-150%白藜芦醇4.47厂家DD-150%白藜芦醇3.45厂家DD-250%白藜芦醇2.07厂家EE-150%白藜芦醇1.64厂家FF-150%白藜芦醇2.53厂家GG-150%白藜芦醇5.16厂家AA-398%白藜芦醇0.23厂家BB-398%白藜芦醇0.16厂家BB-498%白藜芦醇0.43厂家BB-598%白藜芦醇0.27厂家CC

12、-298%白藜芦醇0.74厂家CC-398%白藜芦醇0.19厂家DD-398%白藜芦醇0.24厂家FF-298%白藜芦醇0.30厂家HH-198%白藜芦醇0.46厂家II-198%白藜芦醇0.21结果表明： 50%白藜芦醇的炽灼残渣绝大部分在5%以下，为了更好控制产品质量，将炽灼残渣的限度确定为：不得过5.0%。 98%白藜芦醇的炽灼残渣绝大部分在0.5%以下，为了更好控制产品质量，将炽灼残渣的限度确定为：不得过0.5%。6.3.6 重金属及有害元素 中药中残留的重金属及有害元素问题，已是中药行业十分关注的问题之一。对于虎杖提取物这种广泛用于保健食品、药品中的原料，若重金属及有害元素超标，长期

13、服用势必会产生重金属及有害元素的蓄积，危害身体健康。因此，对重金属及有害元素的控制是十分必要的。 按照中国药典2010版一部附录 B第一法（原子分光光度法）对部分地区和厂家的虎杖原料及20批虎杖提取物样品进行测定，测得结果见表4. 通过检索、查阅相关药典及文献资料，汇整了部分国家和地区对中药重金属及有害元素的限度标准，具体见表5。表4 虎杖原药材及虎杖提取物的重金属及有害元素测定结果表 注：检测限为0.01mg/kg a 虎杖原药材测定结果表来源铅（mg/kg）镉（mg/kg）砷（mg/kg）汞（mg/kg）铜（mg/kg）广西（自购）0.37未检出0.110.027.07江西（自购）0.25

14、未检出0.080.053.96四川（自购）0.10未检出0.05未检出4.64贵州（自购）0.38未检出0.04未检出3.23厂家A0.33未检出0.120.024.74厂家B0.24未检出0.050.025.50厂家C0.31未检出0.310.045.91厂家D0.25未检出0.060.044.65 b 虎杖提取物的测定结果表生产厂家批号规格铅（mg/kg）镉（mg/kg）砷（mg/kg）汞（mg/kg）铜（mg/kg）厂家AA-150%白藜芦醇0.77未检出0.020.025.98厂家AA-250%白藜芦醇0.45未检出0.06未检出4.46厂家BB-150%白藜芦醇0.67未检出0.03

15、未检出3.12厂家BB-250%白藜芦醇1.24未检出0.090.012.23厂家CC-150%白藜芦醇0.33未检出0.030.014.72厂家DD-150%白藜芦醇0.57未检出0.07未检出6.35厂家DD-250%白藜芦醇0.58未检出0.030.021.47厂家EE-150%白藜芦醇0.11未检出0.01未检出7.75厂家FF-150%白藜芦醇1.03未检出0.50未检出0.92厂家GG-150%白藜芦醇0.36未检出0.02未检出2.27厂家AA-398%白藜芦醇未检出未检出0.020.016.39厂家BB-398%白藜芦醇0.47未检出0.120.015.02厂家BB-498%白

16、藜芦醇0.32未检出0.030.013.61厂家BB-598%白藜芦醇0.83未检出0.230.013.55厂家CC-298%白藜芦醇0.37未检出0.06未检出4.16厂家CC-398%白藜芦醇0.39未检出0.34未检出3.88厂家DD-398%白藜芦醇0.76未检出1.03未检出4.43厂家FF-298%白藜芦醇0.44未检出0.02未检出5.32厂家HH-198%白藜芦醇0.18未检出0.09未检出4.16厂家II-198%白藜芦醇0.30未检出0.030.013.82表5 部分国家和地区对中药重金属及有害元素的限度标准11-19（mg/kg）国家/地区使用对象铅（Pb）汞（Hg）砷（

17、As）镉（Cd）铜（Cu）中国大陆进出口药用植物及制药50.220.320香港中药材50.220.3-澳门外用中成药及传统药物200.55-150台湾中药材302-2-新加坡中成药200.55-150韩国草药50.230.3-日本药材20-2-英国草药5-5-加拿大草药材100.250.3-膳食补充剂原料10-50.3-美国草药产品10-0.3-饮食补充剂原料10-50.3-WHO草药10-0.3- 参照部分国家和地区对中药重金属及有害元素的限度标准，结合虎杖原料、虎杖提取物样品的有害元素检测结果，最终确定虎杖提取物重金属及有害元素的限度标准为：铅（Pb）3.0mg/kg 、汞（Hg）0.2m

18、g/kg 、砷（As）2.0mg/kg 、镉（Cd）0.3mg/kg 、铜（Cu）20mg/kg 。6.3.7 农药残留 农药的使用大大减少了食物中存在的昆虫，真菌和霉菌，药用植物中的农药残留是在耕作过程中喷洒农药，改良土壤，在贮藏过程中使用薰蒸剂而积聚起来的。但考虑农药残留品种繁多，对于不同的用途农残限度要求差别很大，且不同国家和地区对其限度要求也不一，因此在这里不体现农残的限制，对于出口产品，应符合出口目的国相关法规的规定；对于进口产品，依据不同用途，应符合我国相关法规的规定。6.3.8 溶剂残留 虎杖提取物是以乙醇提取，经提纯、浓缩干燥而得，所以在产品中有甲醇乙醇存在的可能，为确保提取物

19、使用安全，参照中国药典（2010年版二部）残留溶剂测定法（附录 P第一法）对20批样品进行甲醇乙醇残留的检测，检测结果见表6。表6 虎杖提取物的甲醇乙醇测定结果表生产厂家批号规格甲醇残留（mg/kg）乙醇残留（mg/kg）厂家AA-150%白藜芦醇10.917.08厂家AA-250%白藜芦醇24.9419.21厂家BB-150%白藜芦醇11.2613.51厂家BB-250%白藜芦醇54.3245.32厂家CC-150%白藜芦醇25.2729.18厂家DD-150%白藜芦醇19.1316.45厂家DD-250%白藜芦醇27.1120.31厂家EE-150%白藜芦醇20.3941.92厂家FF-1

20、50%白藜芦醇49.6257.12厂家GG-150%白藜芦醇24.3530.43厂家AA-398%白藜芦醇8.7425.79厂家BB-398%白藜芦醇7.2141.82厂家BB-498%白藜芦醇13.8921.85厂家BB-598%白藜芦醇5.7024.70厂家CC-298%白藜芦醇4.1564.15厂家CC-398%白藜芦醇6.483.79厂家DD-398%白藜芦醇7.174.51厂家FF-298%白藜芦醇8.0319.02厂家HH-198%白藜芦醇16.1135.21厂家II-198%白藜芦醇9.0430.07 查阅相关药典，其中对药品中甲醇、乙醇的限度规定均为甲醇残留不超过3000ppm

21、、乙醇残留不超过5000ppm；但植物提取物属于食品，所以对甲醇乙醇的要求更严格，结合对20批样品甲醇乙醇的检测结果及客户对甲醇乙醇残留限度的要求以及复核单位对虎杖提取物中甲醇乙醇结果，为了更好控制产品质量，将甲醇、乙醇的限度确定为：甲醇残留不超过100ppm、乙醇残留不能超过500ppm。6.3.9 黄曲霉毒素 虎杖提取物是以干燥的虎杖根为原料，在加工、贮藏、运输等过程中基本不易发生霉变，产生黄曲霉毒素，因此在这里不体现黄曲霉毒素的限度要求，但考虑黄曲霉毒素的高毒性，对于出口产品，应符合出口目的国相关法规的规定；对于进口产品，依据不同用途，应符合我国相关法规的规定。6.3.10 微生物 植物

22、提取物下游或终端产品的微生物检测是植物提取物质量控制的重要内容，微生物生命个体小，但危害非常严重，稍有不慎即会导致中毒甚至死亡。而植物提取物终端产品，特别是功能性食品、食品添加剂和植物源日用化学品等，常含有微生物生长所需要的水分、碳源和氮源，因此在贮运过程中易使产品腐败变质；而植物提取物产品通常为摄入性产品，微生物滋生导致腐败变质的产品被人、畜等生物误食以后就会导致疾病或中毒。植物提取物从原料采收、生产、贮运及销售各环节都可能存在微生物污染问题，因此对植物提取产品进行微生物检测，控制和减少这些过程中的污染，从而避免因污染引起的危害至关重要。 参照2010年版一部附录 C中规定方法对20批样品进

23、行微生物的检测，检测结果见表7。 通过检索、查阅相关药典及文献资料，汇整了部分国家对中药微生物的限度标准，具体见表8。表7 虎杖提取物的微生物测定结果表生产厂家批号规格菌落总数（cfu/g）霉菌（cfu/g）酵母菌（cfu/g）大肠埃希菌（cfu/g）沙门氏菌（cfu/25g）厂家AA-150%白藜芦醇8731010未检出未检出厂家AA-250%白藜芦醇6311535未检出未检出厂家BB-150%白藜芦醇8651010未检出未检出厂家BB-250%白藜芦醇5672520未检出未检出厂家CC-150%白藜芦醇6831010未检出未检出厂家DD-150%白藜芦醇6053010未检出未检出厂家DD-

24、250%白藜芦醇7021010未检出未检出厂家EE-150%白藜芦醇4733010未检出未检出厂家FF-150%白藜芦醇102410659未检出未检出厂家GG-150%白藜芦醇5101010未检出未检出厂家AA-398%白藜芦醇7413613未检出未检出厂家BB-398%白藜芦醇3621010未检出未检出厂家BB-498%白藜芦醇4241010未检出未检出厂家BB-598%白藜芦醇5161046未检出未检出厂家CC-298%白藜芦醇7134015未检出未检出厂家CC-398%白藜芦醇4571320未检出未检出厂家DD-398%白藜芦醇6322018未检出未检出厂家FF-298%白藜芦醇3141

25、020未检出未检出厂家HH-198%白藜芦醇2231010未检出未检出厂家II-198%白藜芦醇5473420未检出未检出表8 部分国家对中药微生物的限度标准20 21 22国家使用对象菌落总数（cfu/g）霉菌及酵母菌（cfu/g）大肠埃希菌（cfu/g）沙门氏菌（cfu/25g）中国含药材原粉的不同制剂102 -104102未检出未检出白藜芦醇103102未检出未检出欧洲植物药产品（如提取物）104102未检出未检出美国植物提取物粉末104103未检出未检出 参照部分国家对中药微生物的限度标准，结合对20批样品的微生物检测结果，为更好的控制产品质量，最终确定虎杖提取物微生物的限度标准为：菌

26、落总数1000cfu/g 、霉菌及酵母菌数100cfu/g 、每1g样品中不得检出大肠埃希菌和每25g样品中不得检出沙门氏菌。6.3.11 大黄素含量 采用附录B方法对20批样品进行大黄素的含量检测，检测结果见表9.表9 大黄素检测结果生产厂家批号规格大黄素含量（%）厂家AA-150%白藜芦醇1.81厂家AA-250%白藜芦醇1.03厂家BB-150%白藜芦醇1.05厂家BB-250%白藜芦醇1.12厂家CC-150%白藜芦醇1.65厂家DD-150%白藜芦醇1.32厂家DD-250%白藜芦醇0.98厂家EE-150%白藜芦醇0.64厂家FF-150%白藜芦醇1.47厂家GG-150%白藜芦醇

27、1.08厂家AA-398%白藜芦醇0.02厂家BB-398%白藜芦醇未检出厂家BB-498%白藜芦醇0.07厂家BB-598%白藜芦醇0.08厂家CC-298%白藜芦醇1.03厂家CC-398%白藜芦醇未检出厂家DD-398%白藜芦醇未检出厂家FF-298%白藜芦醇0.04厂家HH-198%白藜芦醇0.01厂家II-198%白藜芦醇0.07 虎杖提取物中主要活性成分为白藜芦醇和大黄素，其中大黄素是属于蒽醌类化合物，具有一定的泻下活性，长期使用会对人体肠胃等器官照成一定的影响。结合客户对虎杖提取物中大黄素的限量要求以及对20批样品中大黄素含量检测结果，为更好的控制产品的质量、保证人体的健康，最终

28、确定虎杖提取物大黄素的限度标准为：规格98%白藜芦醇中大黄素含量低于0.1%、规格50%白藜芦醇中大黄素含量低于2.0%。6.4 技术要求：虎杖提取物技术指标见表10。表10 虎杖提取物技术指标项 目规格与指标50%白藜芦醇98%白藜芦醇鉴别样品液相色谱图中应出现大黄素色谱峰，色谱特征应与标准品一致。-白藜芦醇含量，%50 98大黄素，%2.00.1干燥失重，%5.01.0炽灼残渣，%5.00.5粒度（80目筛通过率），%95-溶剂残留甲醇，mg/kg100乙醇，mg/kg500铜（Cu），mg/kg20铅（Pb）， mg/kg 3.0镉（Cd），mg/kg0.3汞（Hg），mg/kg0.2砷

29、（As），mg/kg2.0菌落总数，cfu/g 1000酵母菌及霉菌，cfu/g 100大肠埃希氏杆菌，cfu/g不得检出沙门氏菌，cfu/25g不得检出7 检验方法验证7.1 干燥失重 检验方法采用中国药典2010版一部附录 G中规定方法。7.1.1 仪器 天平：感量为0.1mg，电热恒温干燥箱7.1.2 操作步骤 称取1 g样品，精确至0.0001 g，按中国药典2010版一部附录 G中规定方法进行。7.1.3 验证试验结果 50%白藜芦醇（B-1）、98%白藜芦醇（B-3）两种规格的平行测定结果及相对标准偏差见表11、表12。表11 虎杖提取物（50%）干燥失重平行测定结果样品编号容器重

30、量g样品称样量g容器样品处理后重量g干燥失重%50%-170.12041.169071.24913.4550%-270.22621.092771.27953.6150%-369.64341.232170.83153.5750%-471.28441.412772.65023.3250%-570.48691.335671.23203.6950%-671.09271.179472.23203.40SRSD%3.50670.13983.9869表12 虎杖提取物（98%）干燥失重平行测定结果样品编号容器重量g样品称样量g容器样品处理后重量g干燥失重%98%-770.30171.302271.59660

31、.56098%-869.88621.205971.08520.57298%-969.59491.305570.89310.55998%-1069.93991.136071.06890.61698%-1166.44231.219667.65440.61598%-1269.94271.295371.23030.594SRSD%0.58600.02614.45397.1.4 精密度要求 以6次平行结果计，相对标准偏差值不大于5%。7.2 炽灼残渣 检验方法采用中国药典2010版一部附录 J中规定方法。7.2.1 仪器 天平：感量为0.1mg，马弗炉7.2.2 操作步骤 称取1 g样品，精确至0.00

32、01 g，按中国药典2010版一部附录 J中规定方法进行。7.2.3 验证试验结果 50%白藜芦醇（B-1）、98%白藜芦醇（B-3）两种规格的平行测定结果及相对标准偏差见表13、表14。表13 虎杖提取物（50%）炽灼残渣平行测定结果样品编号容器重量g样品称样量g容器样品灼烧后重量g炽灼残渣%50%-137.09841.036537.13553.5850%-232.68351.397432.73183.4650%-333.87291.135033.91293.5250%-435.79051.041635.82913.7150%-534.68901.321834.73783.6950%-630

33、.69131.110030.72983.47SRSD%3.57170.10833.0332表14 虎杖提取物（98%）炽灼残渣平行测定结果样品编号容器重量g样品称样量g容器样品灼烧后重量g炽灼残渣%98%-732.59981.031932.60160.17498%-834.76541.421834.76790.17698%-935.63971.308035.64190.16898%-1037.57161.013837.57330.16898%-1132.75131.500532.75400.18098%-1234.30901.283734.31120.171SRSD%0.17280.00482

34、.74947.2.4 精密度要求 以6次平行结果计，相对标准偏差值不大于5%。7.3 溶剂残留 检验方法采用中国药典2010版二部附录 P第一法。7.3.1仪器 天平：感量为0.1mg， 气相色谱仪（FID检测器）。7.3.2 操作步骤 称取样品（B-1）1.9945g，样品（B-3）2.0021g，分别添加工作标准液0.1ml，甲醇（117.2ug/ml）、乙醇（124.3ug/ml），按中国药典2010版二部附录 P第一法进行检测，平行测定6次，并计算回收率及RSD值。7.3.3 验证试验结果 50%白藜芦醇（B-1）、98%白藜芦醇（B-3）两种规格的溶剂残留加标实验测定结果及相对标准偏

35、差见表15。表15 甲醇、乙醇残留的精密度与回收率测定结果样品规格标样加入量（ug/kg）样品含量（ug/kg）样品加标测得值 （ug/kg）平均值（ug/kg）标准偏差（S）RSD%回收率（%）50%白藜芦醇甲醇5.911.2616.97 18.13 18.1517.49 17.16 17.05 17.49170.53263.0446105.6乙醇6.213.5119.98 18.23 18.96 18.03 20.59 19.2119.16670.99015.165691.298%白藜芦醇甲醇5.87.2114.08 13.87 14.22 12.65 13.64 13.2313.5150

36、0.56664.1926108.7乙醇6.241.8248.97 50.23 47.89 47.56 48.76 46.8548.37671.19742.4751105.8 结果表明：两种规格的样品溶剂残留（甲醇、乙醇）加标回收率范围在91.2%-108.7%之间，相对标准偏差（RSD%）在2.48%-5.16%之间，具有良好的精密度和准确度。7.4 重金属及有害元素 检验方法采用中国药典2010版一部附录 B第一法。7.4.1 仪器 天平：感量为0.1mg， 原子吸收光谱仪（石墨炉、火焰、氢化物发生器）。7.4.2 操作步骤 称取0.5 g样品，精确至0.0001 g，分别添加各工作标准液，

37、按中国药典2010版一部附录 B中规定方法进行，平行测定6次，并计算回收率及RSD值。7.4.3 验证试验结果 50%白藜芦醇（B-1）、98%白藜芦醇（B-3）两种规格的精密度及回收率测定结果见表16。表16 有害元素的精密度与回收率测定结果样品规格元素加入量（mg/kg）样品含量（mg/kg）样品加标测得值 （mg/kg）平均值（mg/kg）标准偏差（S）RSD%回收率（%）50%白藜芦醇Pb1.000.671.69 1.71 1.68 1.65 1.66 1.721.6850.02741.6253101.5Cr0.20未检出0.224 0.214 0.2190.238 0.237 0.2

38、27 0.2260.00964.2415113.0As0.200.030.241 0.235 0.2390.227 0.226 0.2230.22980.00903.925299.9Hg0.20未检出0.213 0.206 0.1970.214 0.195 0.1940.20320.00914.4611101.6Cu10.03.1213.01 13.23 13.0912.77 13.35 12.8513.05000.22091.692899.398%白藜芦醇Pb1.000.471.47 1.56 1.52 1.46 1.35 1.471.46670.07204.910399.7Cr0.20未检

39、出0.234 0.214 0.2290.218 0.237 0.2310.22720.00924.0282113.6As0.200.120.331 0.299 0.315 0.304 0.328 0.3330.31830.01464.573099.2Hg0.200.010.209 0.207 0.2310.217 0.209 0.2200.21550.00924.2506102.8Cu10.05.0214.78 14.96 15.1315.04 14.91 16.1415.16000.49453.2618101.4 结果表明：Pb、Cd、As、Hg、Cu五种元素的加标回收率范围在99.2%-1

40、13.6%之间，相对标准偏差（RSD%）在1.62%-4.91%之间，具有良好的精密度和准确度。7.4.4 精密度要求 取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果。两次平行测定结果的绝对差值，铅应不大于算术平均值的20%，镉应不大于算术平均值的10%，砷应不大于算术平均值的15%，汞应不大于算术平均值的20%，铜应不大于算术平均值的10%。7.5 白藜芦醇含量检测1 检验方法参照常用天然提取物质量标准参考手册2003中白藜芦醇含量检测的方法。7.5.1 仪器：使用岛津SPD-15C高效液相色谱仪，紫外检测器。7.5.2 白藜芦醇标准品：白藜芦醇（sigma），纯度98.0%（HPLC）。7.5.

41、3 色谱条件a) WondaSil C18 5um 4.6*250mm；b) 流动相：乙腈-水（27:73，v/v）溶液，经0.45 µm滤膜过滤、超声备用；c) 柱温：室温；d) 检测波长：303 nm； e) 流速：1.2mL/min；f) 进样量：10 µL。7.5.4 分析步骤7.5.4.1 对照品溶液的制备 精密称取白藜芦醇对照品约10mg，置于100mL棕色量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，即得0.10mg/ml对照品溶液。7.5.4.2 供试品溶液的制备 取虎杖提取物粉末适量（依含量而定），精密称定，置于100mL棕色量瓶中，加入约80mL甲醇，超声提取15

42、min后取出，放置至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀。用0.45m微孔滤膜过滤，滤液置于棕色试样瓶中，即得供试溶液。7.5.5 测定方法 别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10µL注入液相色谱仪，按外标法测定含量。7.5.6 验证试验结果 50%白藜芦醇（B-1）、98%白藜芦醇（B-3）两种规格的10次平行测定结果及相对标准偏差见表17，原始色谱图见附录1、附录2。表17 白藜芦醇含量10平行测定结果规格样品编号称样量mg白藜芦醇峰面积测定结果 （%）50%白藜芦醇16.8495380750.326.6489940951.337.7563545250.6412.5953156352.75

43、11.4882308253.5613.01017000154.0712.1882823250.486.6505981953.0910.9797649550.5106.8496950550.5SRSD%51.681.462.8298%白藜芦醇117.5719852199.3127.6724129798.613 8.1771671098.61410.4994388899.01510.61017199699.31610.71019558898.6176.2593750299.1187.3695324198.61910.2980280799.5206.7642472599.3SRSD%98.990.3

44、60.377.5.7 色谱系统稳定性试验 取白藜芦醇标准溶液，连续进样5针，分别计算： 1）重复性：5次测试值的峰面积及保留时间的RSD值，以白藜芦醇计，峰面积的RSD值应不高于1.0%，保留时间的RSD值应不高于2.0%。 2）拖尾因子：以白藜芦醇计应不高于2.0。 3）理论塔板数：以白藜芦醇计应不低于2000。 结果见表18、表19，图谱见附录3。表18 重复性试验结果样品编号白藜芦醇峰面积保留时间min169903057.477269460617.477370710167.474469461327.472570839567.479SRSD%700749466551.20.957.4758

45、0.00280.04表19 色谱系统稳定性试验结果编 号项目结果15次测试峰面积的RSD值0.95%25次测试保留时间的RSD值0.04%3拖尾因子0.84理论塔板数153197.5.8 线性范围 配制不同浓度的白藜芦醇标准品溶液，在上述色谱条件下，10l进样分析，以白藜芦醇（resveratrol）峰面积为纵坐标，以白藜芦醇溶液浓度为横坐标做标准曲线，线性相关系数（R2）应不低于0.9950。 白藜芦醇线性范围结果见表20、表21。表20 白藜芦醇线性范围试验结果样品编号白藜芦醇浓度mg/ml白藜芦醇峰面积线性方程相关系数R210.02432387411y=96213629.6x-8297.

46、4R2=0.999820.0486463712430.0729695417540.0972930748450.121511732187表21 白藜芦醇标准曲线7.5.9 检测限和定量限 用浓度为0.0243mg/ml的虎杖提取物标准溶液各进样3次。按照下列公式分别计算定量限和检测限： 其中QL-定量限DL-检测限=三次进样响应值的标准差S=标准曲线斜率 检测限和定量限结果见表22。表22 白藜芦醇检测限和定量限样 品编 号白藜芦醇峰面积标准差标准曲线斜率检测限ug/ml定量限ug/ml1236418822396.1296213629.60.772.3322407954323943277.5.1

47、0 回收率试验 分别取已知含量的虎杖提取物（50%、98%白藜芦醇两种规格）加入一定量的白藜芦醇对照品，配制成适宜的浓度，每个浓度配制两份，进行HPLC分析。以白藜芦醇计，回收率结果应在90%-110%之间。回收率结果分别见表23。表23 白藜芦醇回收率试验结果样品编号加入量（mg）样品含量（mg）样品加标测得值（mg）回收率（%）50%-13.7310.3813.6195.250%-24.1511.8315.3694.850%-33.829.4713.71104.450%-43.2410.4613.3196.350%-53.4412.7116.56103.250%-63.928.6712.62100.398%-1