HPLC法测定噻康唑的含量和有关物质(1)

1、HPLC法测定噻康唑的含量和有关物质(1)        【摘要】 目的 采用高效液相色谱法测定噻康唑的含量及有关物质。方法 采用ODS C18色谱柱：Spherisob C18(4.6mm×250mm，5m)；保护柱(4mm×10cm)，以甲醇乙腈(7030)0.05mol/L含有0.025mol/L 1?硫辛酸的磷酸三乙胺缓冲液(5842，V/V)为流动相(用磷酸调pH至4.0)，流速1.5ml/min，紫外检测波长260nm。结果 HPLC法测定的线性范围为0.120.28mg/ml，r=

2、0.9994，最低检测限为20ng；样品溶液在24h内稳定，日内精密度和日间精密度良好(RSD<1.0%)。回收率为100.1%。结论 采用HPLC法测定噻康唑的含量及有关物质的方法简便，结果可靠。 【关键词】 噻康唑 有关物质 含量测定 HPLC    Determination of the content and the related substances of tioconazole by HPLC    ABSTRACT Objective To determine the content and

3、 the related substances of tioconazole by HPLC. Method The column:ODS C18 column (Spherisob C18 (4.6mm×250mm, 5m); protect column (4mm×10cm); the mobile phase: methanolacetonitrile (7030) triethyamine phosphate buffer (0.05mol/L) containing 1?octanesulphonic acid (0.025mol/L) and adjusted

4、to pH4 with phosphoric acid (5842, V/V); the flow rate: 1.5ml/min; the content of tioconazole and its related substances were detected at 260nm under the same condition. Results The liner detection range of the determination by HPLC is 0.120.28 mg/ml; the correlation coeffient is 0.9994; the detecti

5、on limit is 20ng; the sample solution is stable within 24h; the intra?day and inter?day precisions are both good (RSD<1%). The recovery results are 100.1%. Conclusion The HPLC method is facile and accurate to determine the content and related substances of tioconazole.    KEY

6、WORDS Tioconazole; Related substances; Content determination; HPLC    噻康唑(tioconazole)是Pfizer公司研制开发的抗真菌类药物。文献资料显示它对真菌感染有特效，具有广谱抗菌性1。该产品已被英国药典2000年版(BP2000)2及美国药典28版(USP28?NF23)收载3。噻康唑中可能含有的杂质比较多，BP2002中列出了4种已知杂质：A、B、C、D，USP28?NF23中列出了3种已知杂质A、B、C。BP2000测定噻康唑含量采用容量分析法，有关物质采用HPLC法；而

7、USP28?NF23则采用HPLC法测定其含量与有关物质。众多实验表明，用USP28?NF23及BP2000方法测定有关物质，杂质B与C的分离度较差；用USP28?NF23方法测定噻康唑含量时由于两杂质分离度不好也会造成含量测定不准确。本文参考了相关文献46，采用高效液相色谱法对其含量测定及有关物质的检查方法进行了系统研究。相对于USP及BP收载的标准，本方法根据噻康唑的紫外吸收，未采用USP的219nm，改用260nm，流动相也作了相应的调整。本方法的优势在于在有关物质检查及含量测定中能够有效地分离各组分，提高有关物质B、C分离的分离度，也提高了方法的准确性。1 仪器与试药 

8、60;  PE?LC Series200高效液相色谱仪(Perkin Elmer)。噻康唑(批号：020202，020205，020220，本公司研制样品)， 噻康唑对照品(含量99.6%， USP对照品)，杂质A、杂质B、杂质C和杂质D对照品(USP对照品)，甲醇、乙腈均为色谱纯。水为超纯水，由Milipore水纯化系统所制。    2 色谱条件    色谱柱：(Spherisob C18(4.6mm×250mm，5m)；保护柱(4mm×10cm)；流动相：甲醇乙腈(703

9、0)0.05mol/L含有0.025mol/L 1?硫辛酸的磷酸三乙胺缓冲液(5842，V/V)(用磷酸调pH至4.0)；柱温40；流速1.5ml/min；检测波长260nm；进样体积20l。    3 测定方法    3.1 含量测定    对照品溶液 取噻康唑对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释成每ml中含0.2mg的溶液。    供试品溶液 取本品约100mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，混匀。取1

10、0ml此溶液置50ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。    3.2 有关物质测定    对照品溶液 杂质A、B、C、D各取1mg精密称定，置25ml容量瓶中，加甲醇15ml，溶解后加至刻度。    供试品溶液 取本品100mg，置25ml容量瓶中，加15ml甲醇，振摇使溶解，再加甲醇至刻度。4 结果与讨论    4.1 方法的专属性    通过对噻康唑主产物、溶剂、合成中间体及降解产物进行HPLC分

11、离检测，结果表明采用HPLC法测定噻康唑的含量及有关物质的方法专属性良好(图1)。    采用USP28?NF23该品种有关物质检查方法，杂质B、C分离度不佳，未达到相关要求(图2)。4.2 系统适用性试验    取本品20mg，置100ml容量瓶中，加甲醇至刻度，制备成供试品溶液，进样20l，记录色谱图，计算可得噻康唑的理论塔板数为2236，噻康唑峰与杂质分离度为2.4。    4.3 标准曲线的建立    精密称取噻康唑对照品100

12、mg，置100ml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取6.0、8.0、10.0、12.0和14.0ml分别置于50ml容量瓶中，用甲醇定容。取上述溶液在选定的色谱条件下，进样20l，记录色谱图，根据峰面积计算，以3次测定的峰面积平均值做线性回归，得回归方程为：    表明在0.120.28mg/ml的范围内峰面积与测定浓度呈良好的线性关系。    4.4 方法的精密度    取浓度为0.2mg/ml的噻康唑对照品溶液20l注入液相色谱仪，连续进样5次，噻康唑峰面积的RSD为0.11%(n=5)。取同一批供试品，配成6份溶液，分别进样分析，含量测定结果的RSD为0.66%(n=6)。