RP_HPLC法测定5_羟基色氨酸

1、RP-HP LC法测定52羟基色氨酸李多伟1,张小燕2,孙诗清1,王义潮1(1.西北大学生命科学学院,西安710069;2.西安皓天生物工程技术有限责任公司,西安710075摘要:建立了高效液相色谱法测定52羟基色氨酸。在优化条件下,色谱柱:Symmetry C18柱;流动相:V(甲醇V(水=595;检测波长:276nm。52羟基色氨酸对照品溶液在018410g的范围内与峰面积呈良好线性关系,r=019992;回收率为99194%,RS D=1135%。关键词:52羟基色氨酸;反相高效液相色谱;测定中图分类号:O657.7文献标识码:A文章编号:100020720(20060520592035

2、2羟基色氨酸(简称5HTP,化学命名:52羟基232吲哚基22氨基丙酸1。目前市场上流行的褪黑激素,脑黄金等药物在人体内可以转化为52羟基色氨酸,52羟基色氨酸是一类重要的精神类药物。研究认为,52羟基色氨酸具有影响睡眠、抗衰老、抗抑郁、调节免疫功能等多方面的作用2,3,近年来在国内外医药行业的应用日益广泛,其生产也得到了迅速发展。但是关于52羟基色氨酸的测定方法,文献记载甚少。有报道采用分光光度法,用苯并戊三酮直接显色后进行比色分析定量1,方法较为费时,且灵敏度较差,本文根据色氨酸的性质4,运用高效液相色谱法对52羟基色氨酸进行测定。本法可为常规52羟基色氨酸的测定提供有价值的参考,同时对工

3、业产品进行了分析,可达到更高的准确度及更快的速度,为评定产品的质量提供了重要的手段。1实验部分1.1仪器与试剂美国Waters高效液相分析系统(Waters1525 Binary HP LC Pum p,Waters2487DualAbs orbance Detector,Breeze data analysis system;超声波清洗机AS-320(Auto Science。52羟基色氨酸对照品(美国Sigma公司;样品(标号分别为:HT040320,HT040412,HT040509,HT040608,HT040702:由陕西天一生物技术有限公司提供;甲醇为色谱纯;水为超纯水。1.2色谱

4、条件色谱柱:Symmetry C18柱(4.6mm×150mm,5m;流动相:V(甲醇V(水=595;检测波长: 276nm;柱温:室温;流速:1.0m Lmin。进样量: 20L。1.3溶液的制备1.3.1供试品溶液准确称取样品15.0mg,用甲醇溶解并定容至50m L量瓶中,摇匀,进样前用0.45m微孔滤膜过滤。1.3.2对照品溶液准确称取5HTP对照品10.0 mg,置25m L容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,密塞,作为对照品溶液。准确吸取此溶液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0m L于10m L容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,密塞,作为对照品稀释液。2结果与讨论

5、2.1流动相的选择通过优化,流动相V(甲醇V(水=595时,色谱峰峰形最好,52羟基色氨酸的保留时间约为7min。2.2标准曲线分别准确吸取对照品稀释液20L,按上述色谱条件测定,色谱图见图1。以对照品稀释液95收稿日期:2005203214;修订日期:2005204219作者简介:李多伟(1959-,男,副教授52HTP 量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,作图,得回归方程:y =9172275×107+2135117×106m ,r =019992,5-HTP 在0.84g 点范围内呈良好的线性关系。 图15-HTP 对照品(a 和样品(b 的HP LC 色谱图Fig .

6、1Chrom atograms of (a stand ard of 5-HTP and (b sample of 5-HTP2.3精密度准确吸取0.2mg m L 对照品溶液20L ,重复进样6次,5HTP 的峰面积值的RS D 为0.76%,保留时间的RS D 为0.35%。2.4重复性试验对批号为HT 040320的样品进行6次平行试验测定5HTP 含量,每次进样量为20L ,测的结果RS D 为1.25%,保留时间的RS D 为0.40%。2.5回收率试验取已知量的样液2m L ,共5份,分别准确加5HTP 对照品溶液(准确称取5HTP 对照品10mg ,用甲醇定容至25m L 量瓶中

7、0.5m L ,按“2.1.1”项下方法操作制备溶液,按样品测定方法进行测定,平均回收率为99.94%,RS D 为1.35%。结果见表1。2.6样品分析准确称取样品15.0mg ,用甲醇溶解并定容至50m L 作为样品溶液。按上述色谱条件,采用外标法进行定量测定,以峰面积计算样品中5HTP 质量分数。5批样品测得的质量分数平均值分别为96121%,85165%,97181%,98169%,99112%;RS D 分别为1125%,1122%,1115%,1113%,1126%(n =3。表1回收率测定结果T ab .3R ecovers of contents of 5-HTP样品52HTP

8、 量m g加入量m g实测量m g回收率%平均回收率%RS D%0.220.200.421100.20.180.200.37899.50.210.200.410100.099.94 1.350.200.200.402100.50.200.200.39899.5参考文献1吴塞苏,郝金宏,汤健健.光谱实验室,2001,18(1:1212Ahmed Amer ,Jeff Breu ,Janine McDerm ott.PharmacologyBiochemistry and Behavior ,2004,77(1:1373T atsuo Harumi ,Shoji Matsushima.Journa

9、l of Chromatogra 2phy B ,2000,747(1-2:954文江平,唐爱国.国外医学.临床生物化学与检测学手册,2000,23(6:359Determination of 52hydroxytrytophan by RP 2HP LCLI Duo 2wei31,ZH ANG Xiao 2yan 2,SUN Shi 2qing 1and WANG Yi 2chao 1(1.C ollege of Life Science ,N orthwest Uni 2versity ,X i an 710069;2.X i an H AOTI AN Bio 2engineering T

10、 echnology C o.Ltd.,X i an 710075,Fenxi Shiyanshi ,2006,25(5:5961Abstract :A high performance liquid chromatography (HP LC method was established for determination of 52Hydroxytrytophan.The optimal experiment condition was using C 18column (Symmetry C 18,4.6mm ×150mm ,506m,m obile phase of meth

11、anol2water(595and detection wavelength of276nm.The calibration curve was linear in the range of0.84.0g for5HTP(r=0.9992.The average recovery(n=5was99194%for5HTP(RS D= 1135%.K eyw ords:5HTP;RP-HP LC;Determination“第四届国际华夏学者分析化学研讨会”会议通知The Fourth I nternational Symposium of Worldwide Chinese Scholars onAnalytical Chemistry(ISWCSAC2006第四届国际华夏学者分析化学研讨会(ISWCS AC2006,原名国际华裔学者分析化学研讨会,经中华人民共和国外交部和中国科学技术协会批准,将于2006年9月2226日在大连召开。此次会议的宗旨是进一步加强海内外华裔分析化学学者的相互了解与合作研究。会议期间将同时举办分析化学新产品、新技术展示会。充分展示分析化学、生命科学和