生理实验部分

1、植物组织水势的测定小液流法实验原理植物组织的水分状况可用水势来表示。植物体细胞之间、组织之间以及植物体与环境之间的水分移动方向都由水势差决定。将植物组织放在已知水势的一系列溶液中，如果植物组织的水势小于某一溶液的水势，则组织吸水，反之组织失水。若两者相等，水分交换保持动态平衡。组织的吸水或失水会使溶液的浓度、密度、电导率以及组织本身的体积与质量发生变化。根据这些参数的变化情况可确定与植物组织等水势的溶液。植物组织水势的测定实验步骤用1.00mol/L蔗糖母液配制一系列不同浓度的蔗糖溶液（0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mol/L）各 10 mL，分别注入编好号的 7

2、支对照组试管中。另取 7 个青霉素小瓶对应试管编号，从对照管中分别吸 2 mL 溶液入相同编号的试验组小瓶中。用打孔器在叶片中部靠近主脉附近打取叶圆片，随机取样，每试验组小瓶中放入 30 片叶圆片，加塞，放置 30 min，其间摇动数次。到时间后，用解剖针沾取少许甲烯蓝粉末加入小瓶中，并震荡，此时溶液呈蓝色。用 7 支毛细滴管从试验组小瓶中依次吸取着色的液体少许，伸入同号对照组溶液的中部，缓慢放出蓝色溶液，轻轻取出滴管，观察蓝色液滴的移动方向。根据公式计算叶片细胞的水势w = - icRTi 为解离系数，蔗糖为 1；c 为小液滴在其中基本不动的溶液的浓度，单位为 mol/L；R 为摩尔气体常数

3、，R = 0.0083 L·MPa/mol·K；T 为热力学温度，单位 K实验结果外液浓度mol/L小液滴移动方向组织水势与外液水势比较组织水势计算               植物的元素缺乏症元素缺乏症检索1、 老叶受影响1） 影响遍及全株，下部叶子干枯并死亡A、植株淡绿色，下部叶子发黄，叶柄短而纤弱缺NB、植株深绿色，并出现红或紫色，下部叶子发黄，叶柄短而纤弱缺P2） 影响限于局部，有缺绿斑，下部叶子不干枯，叶子边缘卷曲呈

4、凹凸不平A、 叶子缺绿斑有时变红，有坏死斑，叶柄纤弱缺MgB、 叶子缺绿斑，在叶边缘和近叶尖或叶脉间出现小坏死斑，叶柄纤弱缺KC、 叶子缺绿斑，叶子包括叶脉产生大的坏死斑，叶子变厚，叶柄变短缺Zn2、 幼叶受影响1） 顶芽死亡，叶子变形和坏死A、 幼叶变钩状，从叶尖和边缘开始死亡缺CaB、 叶基部淡绿色，从基部开始死亡，叶子扭曲缺B2） 顶芽仍活着，缺绿或萎蔫而无坏死斑A、 幼叶萎蔫，不缺绿，茎尖弱缺CuB、 幼叶不发生萎蔫，缺绿a、 有小坏死斑，叶脉仍绿色缺Mnb、 无坏死斑，叶脉仍绿色缺Fec、 无坏死斑，叶脉坏死缺S叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验原理叶绿体色素是植物吸收太阳光能

5、进行光合作用的重要物质，主要由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。根据它们在有机溶剂中的溶解特性，可用丙酮将它们从叶片中提取出来。并可根据它们在不同有机溶剂中的溶解度不同以及在吸附剂上的吸附能力不同，将它们彼此分离开。叶绿素是一种双羧酸的酯，可与碱发生皂化反应，产生的盐能溶于水，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开。叶绿素在光照下可产生暗红色的荧光。叶绿素中的镁可被 H+ 取代而生成褐色的去镁叶绿素；加入铜盐作用，后者则成为绿色的铜代叶绿素。铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作绿色植物的浸渍标本。叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定实验步骤叶绿体色素的提取分离称取新鲜叶片 2 g

6、，放入研钵中加丙酮 5 mL，少许碳酸钙和石英砂，研磨成均浆，再加丙酮 10 mL，以漏斗过滤之，即为色素提取液。把展层用的滤纸剪成 2 cm × 20 cm 的纸条，将其一端剪去两侧，中间留一长约 1.5 cm，宽约 0.5 cm 的窄条。用毛细管吸取叶绿素溶液点于窄条的上方，注意一次所点溶液不可过多，风干后再点，重复多次。在大试管中加入四氯化碳 35 mL 及少许无水硫酸钠。然后将滤纸条固定于软木塞上，插入试管内，使窄条浸入溶剂中（色素点要略高于液面），盖紧软木塞，直立于阴暗处进行层析。待四种色素带清晰展开后，取出滤纸条，稍干后用铅笔勾出色素带边缘。叶绿体色素的理化性质叶绿素的荧

7、光现象 取上述色素提取液少许于试管中，分别在反射光和透射光一侧观察提取液的颜色。铜代反应 取上述色素提取液少许于试管中，1 滴 1 滴加浓盐酸，直至溶液出现褐绿色。然后加醋酸铜晶体少许，慢慢加热溶液，则又产生鲜亮的绿色。黄色素与绿色素的分离 取上述色素提取液 10 mL，加到盛有 20 mL 乙醚的分液漏斗中，摇动分液漏斗，并沿漏斗边缘加入 30 mL 蒸馏水，轻轻摇动分液漏斗，静止片刻，溶液即分为两层。色素已转入上层乙醚中，弃去下层丙酮和水，再用蒸馏水冲洗乙醚溶液 12 次。然后加入 5 mL 30% KOH甲醇溶液，用力摇动分液漏斗，静置约 10 min，再加蒸馏水约 10 mL，摇动后静

8、置，则得到黄色素层和绿色素层。离体叶绿体光还原反应（希尔反应）实验步骤离体叶绿体的提取称取 10 g 新鲜菠菜叶片（去除粗叶脉），剪碎，加10 mL 预冷的提取介质（分两次加入）和少许石英砂，冰浴中迅速研磨成匀浆，再加 10 mL 提取介质，用 4 层纱布将匀浆过滤于一离心管中，2500 r / min 离心 3 min，弃沉淀，上清液 4000 r / min 离心 10 min，弃上清。所得沉淀即为完整叶绿体。用 15 mL 提取介质使叶绿体悬浮，置冰浴中备用。叶绿体光还原反应的测定取 3 支洁净试管，分别编号，按下表加入试剂：管号提取介质/mL叶绿体悬液/mL煮沸时间/min染料/mL1

9、121513注：2号管加热煮沸，然后加染料，3号管为比色时的空白对照将试管置于离 100 W 灯光 60 cm 处照光，3 min 后于 620 nm 处测光密度。（注意：离心机和分光光度计的使用方法）植物呼吸强度的测定（小篮子法）实验原理利用 Ba(OH)2 溶液吸收呼吸过程中释放的CO2，实验结束后，用草酸溶液滴定残留的Ba(OH)2，从空白和样品两者消耗草酸溶液之差，即可计算出呼吸过程中释放 CO2 的量。实验步骤称取萌发的小麦种子 15 g，包入纱布袋内，将纱布袋挂在广口瓶的橡皮瓶塞上，注意不要挂得太低。在广口瓶中加 0.05 mol/L Ba(OH)2 25 mL，塞上瓶塞，用熔化的

10、石蜡密封瓶口，防止漏气。每 10 min 左右轻轻摇动广口瓶，破坏溶液表面的 BaCO3 薄膜，以利对CO2的吸收。1 h 后，打开瓶塞，迅速加 2 滴指示剂，用1/44 mol/L 草酸滴定，直到绿色变成紫色为止。记录所耗用的草酸溶液的体积（mL）数。另取同样重量的煮沸杀死的小麦种子，作同样测定，以次作为对照。计算呼吸强度。种子活力的快速测定（1分）（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）实验原理凡有生命力的种子胚部，在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生命活力的种胚则无此反应。当 TTC 渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（ NADH 或 NADPH ）上的氢还原时，便由无色 TTC 变为红色的 TTF。（红墨水法）实验原理凡活细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的能力，而死的种子胚细胞原生质膜丧失这种能力，于是染料便