电针对高脂血症大鼠血脂、超敏C反应蛋白、脂联素的调节作用

1、电针对高脂血症大鼠血脂、超敏C反应蛋白、脂联素的调节作用严志康，杨智杰，陈锋（武汉大学人民医院针灸科，武汉430060）摘要：目的：观察针刺和电针对高脂血症大鼠血脂、超敏C反应蛋白（HS-CRP）、脂联素（Adiponectin，ADPN）的调节作用及作用机理。方法：健康成年Wistar大鼠32只，随机分为正常对照组、模型组、手针组、电针组每组8只。采用高脂饲料饮食造模，正常对照组给予基础饲料，余组均给予高脂饲料，平均每只大鼠30g/日。连续喂养40天，造模成功后，手针组针刺大鼠“后三里”和“中脘”穴。电针组针刺并用电针刺激。4周后抽血观察不同处理因素对血清TC、TG、LDL-C、HDL-C、

2、采用免疫散射比浊法检测HS-CRP、应用酶联免疫法进行检测ADPN。并观察手针，电针对以上指标的影响。结果：模型组TC、TG、LDL-C、HS-CRP显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)，HDL-C 、ADPN显著低于对照组（P<0.05）。电针组、手针组 TC、TG、LDL-C、HS-CRP显著低于模型组(P<0.05或P<0.01)，HDL-C、ADPN显著高于模型组（P<0.01）。手针组 TC、TG、LDL-C、HS-CRP高于电针组(P<0.05或P<0.01)，HDL-C、ADPN显著低于电针组（P<0.01）。手针组H

3、DL-C和电针组无统计学差异。结论：电针和手针可以有效的调节高脂血症大鼠的血脂水平，并可以降低HS-CRP水平，升高脂联素（ADPN）的水平。电针疗效优于手针。关键词：电针；高脂血症；超敏C反应蛋白；脂联素The effect of Electro-Acupuncture on blood-lipid, high-sensitivity C-reactive protein(HS-CRP) and adiponectin (ADPN) in hyperlipidemia ratsYan zhikang,Yang zhijie,Chen Feng(Department of Acu-moxibu

4、stion,Renmin Hospital oh Wuhan University)Abstract：Objective: The purpose of this study was to observe the effect and principle of electro-acupuncture on blood-lipid, high-sensitivity C-reactive protein(HS-CRP) and adiponectin (ADPN) in hyperlipidemia rats.第一作者：严志康 武汉大学人民医院针灸科430060 e-mail:122346938

5、第一作者：严志康 武汉大学人民医院针灸科430060 e-mail:122346938Methods: 32 male Wistar rats were randomly divided into four groups:control group, hyperlipidemia model group, acupuncture group, electro-acupuncture group.With 8 rats in each group. Except for the control group,hyperlipemic rats were induced by high fat di

6、et, the average daily per rat 30g. Feed the rats for 40 days.After 4 weeks of acupuncture and electro- acupuncture,serum levels of triglyceride(TG), total cholesterol(TC), high density lipoprotein cholesterol(HDL-C) ,low density lipoprotein cholesterol (LDL-C), high-sensitivity C-reactive protein (H

7、S-CRP)and adiponectin(ADPN)were detected.Results: After treatment for 4 weeks, the levels of TC,TG,LDL-C, HS-CRP in electro-acupuncture group, acupuncture group were reduced (P<0.05 or P<0.01) and the levels of HDL-C、ADPN were elevated (P<0.01), compared with hyperlipidemia model group.Conc

8、lusion: Electro-acupuncture has modulation effect on hyperlipidemia and can reduce the level of HS-CRP, increase the level of adiponectin(ADPN) in hyperlipemic rats induced by high fat diet. Key words：Electro-acupuncture，Hyperlipoidemia，HS-CRP，Adiponectin(ADPN)，Experimental research引言高脂血症(hyperlipid

9、emia,HL)是由于脂肪代谢或转运异常导致血浆中脂类浓度异常，包括血总胆固醇（TC）升高、甘油三脂(TG)升高、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)升高或高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)降低的一类脂质代谢紊乱性疾病，是目前公认的动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)和心脑血管疾病的主要危险因素。针刺配电针对本型高脂血症患者临床疗效较好1。近年来针灸治疗单纯性肥胖已经取得了显著成果，体针、耳针、灸法、针刺结合推拿拔罐，以及穴位埋线对单纯性肥胖有较好疗效2。研究发现超敏C反应蛋白（HS-CRP）、脂联素（Adiponectin，ADPN）和肥胖、高脂血症、以及心脑血管疾病有直接关系。H

10、s-CRP是目前被认为是和动脉粥样硬化关系最为密切的炎症标志物之一3，脂联素与动脉粥样硬化、高脂血症也有密切的关系45。本实验通过对高脂血症大鼠的血脂水平、超敏C反应蛋白（HS-CRP）、脂联素（Adiponectin，ADPN）探讨电针对高脂血症大鼠作用机制。1 实验方法1.1 实验动物与模型制备雄性Wistar大鼠，32只，SPF级，体重180±20g，由湖北省实验动物中心提供，许可证号：No.00009561。（本实验遵循国际上广泛接受的减少、替代、优化为主的3R实验动物伦理学原则）随机分为正常对照组、模型组、手针组、电针组，每组8只。使用食饲高脂饲料法（平均每只鼠每日30g）

11、进行造模，配方(%)组成为：基础饲料81，胆固醇2，猪油7，蛋黄粉10，造模时间40天。正常对照组喂基础饲料，40天后尾静脉采血测定血脂水平，TC、TG、LDL-C显著升高清（SPF级雄性SD大鼠血清TC、TG、LDL-C、 HDL-C值分别为1.60± 0.42mmol L、0.75±0。30mmol L、0.45±0.17mmol L、0.90±0.10 mmol L）。HDL-C显著降低，说明高脂血症模型复制成功6。1.2干预方法手针组、电针组大鼠固定，用0.25mm*10mm毫针分别针刺“后三里”和“中脘”穴，4mm和2mm，平补平泻手法行针1m

12、in。电针组用6805电针仪，频率20Hz连续波，(1.5V、4mA)持续20min，“后三里”穴左右交替取穴。对照组、模型组仅固定20min不行针刺。各组干预1次/d，连续4周，干预期间各组均给予正常饮食。实验结束后，动物禁食过夜，次日断头处死。采血，离心，分离血清待测7。同时剖取肝脏组织块，进行石蜡包埋切片，HE染色后制成组织切片待观察。1.3观察指标及测定方法（1）TC、TG、LDL-C、HDL-C检测：从各实验组大鼠采血，3000 r/ min 离心5 min ，取上层血清，用奥林巴斯AU640 全自动生化分析仪测定甘油三脂( TG) 、总胆固醇( TC) 、低密度脂蛋白(LDL-C)

13、 、高密度脂蛋白( HDL-C) 含量8。（2）HS-CRP的检测：采用免疫散射比浊法，五点定标，按说明书编辑参数，在全自动生化检测仪上测定。Hs-CRP正常值为0-lmg/L。（3）脂连素的测定：取血及分离血清同前，应用酶联免疫法进行检测，实验前按说明书配好血清，提前配置好所有试剂按以下步骤在酶标仪上进行检测9。1.4实验试剂蛋黄粉，武汉银河化工有限公司提供，批号为20091220；胆固醇，蓝恒生物有限公司提供，批号为100220；TC试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司提供，批号为20100220；TG试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司提供，批号为20100315；HDL-C试剂盒，中生

14、北控生物科技股份有限公司提供，批号为20100130；LDL-C试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司提供，批号为20091230；apoA-试剂盒，武汉华美生物工程有限公司提供，批号为20100322；apo-B试剂盒，武汉华美生物工程有限公司提供，批号为20100228；Lp（a）试剂盒，武汉华美生物工程有限公司提供，批号为20100315；HS-CRP试剂盒，武汉谷歌生物有限公司提供，批号为20100218；脂联素试剂盒，武汉华美生物工程有限公司提供，批号为20100121。1.5统计方法实验过程中的动物无脱失，32只大鼠全部计入统计。数据以均数±标准差（±s）表示，用

15、SPSS17.0 统计软件进行数据分析，统计方法用单因素方差分析，两两比较采用 q 检验，以P0.05为有统计学意义。2 实验结果2.1造模后大鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平造模后，与正常对照组相比，模型组、手针组、电针组大鼠血清中TC、TG、LDL-C的水平均显著升高（P<0.05或P<0.01），HDL-C的水平显著降低（P<0.01），表示高脂血症大鼠模型复制成功。见表1表1 造模后大鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平（±）组别nTC(mmol/l)TG(mmol/l)LDL-C(mmol/l)HDL-C(mmol/l)正常对照组81.45

16、±0.120.48±0.120.40±0.070.89±0.09模型组82.24±0.65 1.06±0.29 0.71±0.05 0.71±0.06 手针组82.35±0.591.05±0.27 0.72±0.05 0.72±0.04 电针组82.26±0.641.07±0.30 0.69±0.07 0.71±0.06 注：与正常对照组相比，P<0.05 P<0.01Fig 1 Comparison among the c

17、ontrol group, hyperlipidemia model group, acupuncture group, electro-acupuncture group in the level of TC、TG、LDL-C、HDL-C after high fat diet for 40days.2.2治疗4周后，大鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C的水平模型组的TC、TG、LDL-C水平明显高于正常对照组，HDL-C水平又明显低于正常对照组，且都具有显著性（P<0.01）；与模型组比，手针组、电针组的TC、TG、LDL-C水平又有显著的降低（P<0.05或P<0.0

18、1），HDL-C水平又有显著的升高（P<0.01），说明各组均有较好的调整血脂的作用；电针组中TC、TG、LDL-C水平均显著降低（P<0.05或P<0.01），HDL-C水平显著升高（P<0.01），与手针组比电针组中TC、TG、LDL-C水平均降低，且有显著差异性（P<0.05），HDL-C水平与手针组无明显差异性（P>0.05）。见表2表2 治疗4周后，大鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C的水平（±）组别nTC(mmol/l)TG(mmol/l)HDL-C(mmol/l)LDL-C(mmol/l)正常对照组81.47±0.110.

19、83±0.171.09±0.230.40±0.07模型组82.90±0.791.50±0.350.47±0.090.87±0.15手针组82.15±0.161.00±0.230.92±0.110.60±0.07电针组81.77±0.070.83±0.161.03±0.080.45±0.09注：与模型组相比，P<0.05 ；与手针组相比，P<0.05Fig 2 Comparison among the control group, hy

20、perlipidemia model group, acupuncture group, electro-acupuncture group in the level of TC、TG、LDL-C、HDL-C after acupuncture and electro- acupuncture treatment.2.3治疗4周后，大鼠HS-CRP和脂联素（ADPN）的水平与正常对照组比，模型组HS-CRP水平显著升高（P<0.01），脂联素（ADPN）水平显著降低（P<0.01）；与模型组比，各组的HS-CRP水平显著降低（P<0.01），脂联素（ADPN）水平显著升高（P

21、<0.01）；与手针组比，电针组中HS-CRP水平明显降低（P<0.05），脂联素（ADPN）水平明显升高（P<0.05）。见表3表3 治疗4周后，大鼠HS-CRP和脂联素（ADPN）的水平（±）组别nHS-CRP（mg/L）脂联素（ADPN）（g/L）正常对照组80.258±0. 0662.402±0.636模型组80.474±0.0700.888±0.219手针组80.318±0.0511.691±0.364电针组80.250±0.0922.125±0.308注：与模型组相比，P&l

22、t;0.01；与手针组相比，P<0.05Fig 2 Comparison among the control group, hyperlipidemia model group, acupuncture group, electro-acupuncture group in the level of HS-CRP and ADPN after acupuncture and electro- acupuncture treatment.3病理结果正常对照组大鼠肝脏镜下观察肝细胞、肝小叶、中央静脉清晰。模型组大鼠肝脏肝细胞大泡性或以大泡性为主的混合性脂肪变性；肝细胞气球样变，甚至伴肝细胞不

23、同程度坏死，视野内50-75%肝细胞脂肪变性；手针组大鼠肝脏视野内30%-50%的肝细胞脂肪变性。电针组大鼠肝脏接近正常。附图144 讨论高脂血症以TC、TG、LDL-C升高或HDL-C降低为主要临床表现，已成为动脉粥样硬化和心脑血管疾病的主要危险因素10。Hs-CRP是目前被认为是和动脉粥样硬化关系最为密切的炎症标志物之一，有研究表明，Hs-CRP水平可反映动脉粥样硬化的斑块的稳定程度11。血脂是血浆中胆固醇、甘油三酯 (triglyceride,TG)和类脂如磷脂等的总称。与临床密切相关的血脂主要是胆固醇和甘油三酯，其他还有游离脂肪酸(FFA)和磷脂等。在人体内胆固醇主要以游离胆固醇及胆固

24、醇脂形式存在。TG是甘油分子中的三个羟基被脂肪酸酯化而形成。循环血液中的胆固醇和TG必须与特殊的蛋白质即载脂蛋白(apo1ipoprotein，apo)结合形成脂蛋白，才能被运输至组织进行代谢。应用超速离心方法，可将血浆脂蛋白分为：乳糜微粒(chylomicron，CM)、极低密度脂蛋白(very low density 1ipoprotein，VLDL)、中间密度脂蛋白(intermediate densily 1ipoprotein，IDL)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)和高密度脂蛋白(high density Lipoprotein，HDL) 1

25、213。C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是一种炎症急性时相的反应物，应激状态下主要由肝脏合成和分泌，在体内参与内源性防御功能，它不仅与低密度脂蛋白选择性相结合，而且与粥样斑块内氧化修饰后的低密度脂蛋白特异性结合，进而在斑块内沉积下来发挥相应的生物学效应。由于健康人体内的CRP水平通常<3 mg/L，因此，临床上使用高敏感的方法(可检测到<0. 3mg/L的水平)检测到的CRP又被称为hs-CRP14。hs-CRP目前被认为是和动脉粥样硬化关系最为密切的炎症标志物之一，有研究表明，hs-CRP水平可反映动脉粥样硬化的斑块的稳定程度，又有研究报道，hs-CRP

26、参与高脂血症的发生、发展，并与血清TG、TC、LDL-C呈显著正相关15。脂联素(adiponectin，ADPN)是脂肪细胞分泌的一种脂肪细胞因子，是一种多肽激素，具有多种生理作用。近年研究发现，脂联素具有抗As和抗炎的作用，与致动脉粥样硬化的血脂成分呈负相关，而与对动脉粥样硬化有保护性的血脂成分呈正相关。HS-CRP参与高脂血症的发生、发展，并与血清TG、TC、LDL-C呈显著正相关16。脂联素(adiponectin，ADPN)是脂肪细胞分泌的一种脂肪细胞因子，近年来研究发现，脂联素与动脉粥样硬化、高脂血症也有密切的关系，与致动脉粥样硬化的血脂成分呈负相关，而与对动脉粥样硬化有保护性的血

27、脂成分呈正相关17。针灸治疗高脂血症具有疗效好、无副作用、简便廉价等特点，电针能加强针刺的疗效发挥最大疗效，减少反弹，有更好的降脂作用18。本研究发现针刺和电针可以降低高脂血症模型大鼠 TC、TG、LDL-C水平、升高HDL-C水平，说明电针可以很好的调节高脂血症大鼠血脂水平19。高脂血症大鼠不仅血脂指标异常而且HS-CRP增高、脂联素降低,说明HS-CRP、脂联素是高脂血症脂肪代谢中的相关环节20，本研究表明电针可以显著降低高脂血症模型大鼠HS-CRP水平，显著升高高脂血症模型大鼠脂联素（ADPN）的水平。证明针刺减肥是通过调节c反应蛋白和脂联素水平发挥降脂的作用。总之，电针可有效调节c反应

28、蛋白和脂联素水平，从而达到调节高脂血症大鼠血脂水平的作用。参考文献1韩海荣.针药并用对单纯性肥胖大鼠瘦素含量及瘦素受体表达的影响J.中医药信息,2010,27（6）:76-79Han H R.Influence of acupuncture combined with taditional chinese medicine on leptin level and leptin receptor expression in simple obesity ratsJ.Zhong Yi Yao Xin Xi(Info On Trad Chin Medi,Chin) ,2010,27（6）:76-79

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