ELISA法抗HCV阳性献血者分片段试剂和RTPCR法检测结果分析

1、ELISA法抗HCV阳性献血者分片段试剂和RTPCR法检测结果分析    【摘要】nbsp;nbsp;目的nbsp;观察无偿献血者标本中ELISA法抗HCV检测的假阳性问题以及ELISA法对HCV不同抗原片段的反应性。方法nbsp;留取本站无偿献血者中抗HCV阳性（两种试剂检测阳性）样本56份和可疑样本（单试剂检测阳性）90份，分别使用抗     作者：余加宏    作者单位：安徽省蚌埠市中心血站 质量控制科，233000    【摘要

2、】  目的 观察无偿献血者标本中ELISA法抗HCV检测的假阳性问题以及ELISA法对HCV不同抗原片段的反应性。方法 留取本站无偿献血者中抗HCV阳性（两种试剂检测阳性）样本56份和可疑样本（单试剂检测阳性）90份，分别使用抗HCV分片段试剂和RTPCR试剂进行检测，对使用分片段抗HCV试剂检测单片段和两个以上片段（2个片段）阳性的样本再进行RTPCR的确证检测。结果 56份抗HCV阳性的样本中分片段试剂两个片段以上阳性45份（80.4%），RTPCR阳性19份（42.2%）；单试剂抗HCV检测阳性样本90份中分片段抗HCV双片段以上阳性12份（13.3%），RTPCR阳性0份（0

3、%）；单试剂抗HCV检测阳性样本90份中分片段抗HCV单片段阳性20份（22.2%），RTPCR阳性1份（1.1%）；154份阴性样本分片段抗HCV试剂单片段阳性3份，RTPCR检测全部阴性。结论 目前采用两种抗HCV试剂对献血者进行抗HCV筛选，能够保证血液安全；抗HCV试剂检测的假阳性率偏高，导致一些献血者的检测结果被误判；单试剂抗HCV检测存在一定的漏检率，对献血者进行抗HCV进行检测时应选择恰当的配伍试剂。 【关键词】  抗HCV 分片段抗HCV检测 假阳性 RT PCR Outcome analysis of fragment reagent and RTPCR tests

4、 on ILISA antiHCV positive blood donors  YU Jiahong, WANG Nan, LIU Lin (Bengbu Blood Center, Anhui 233000, China) 【】    To investigate the false positives among voluntary blood donors specimens in the antiHCV test and ELISA reactions to different HCV antigen fragments.  Methods&#

5、160; Fiftysix antiHCV positive specimens (confirmed positive by the two reagent tests) and ninety suspicious specimens (confirmed by a single reagent test) were taken which were further tested with antiHCV fragment and RTPCR reagents. Those tested as positive by antiHCV fragment reagent on a single

6、fragment and over two  fragments (2 fragments) were further identified by RTPCR.   Results  Among the 56 specimens of antiHCV positives, 45 (80.4%) were positive with more than two fragments in fragment reagent, and 19 (42.2%) were RTPCR positive; Of the 90 positive specimens whi

7、ch underwent single reagent antiHCV test, 12 cases (13.3%) were fragment antiHCV positive over two fragments. No RTPCR positive appeared. Of the 90 positive specimens tested by single reagent antiHCV, 20 (22.2%) were fragment antiHCV single fragment positive by fragment antiHCV, and one RTPCR positi

8、ve. Among 154 negative specimens there were 3 single fragment positives by fragment antiHCV reagent while all of them were negative by RTPCR tests. Conclusion  Screening blood donors with both of the two antiHCV reagents can promise the safety of blood. AntiHCV reagent alone may result in sligh

9、t high false positive rate while single reagent antiHCV may lead to a certain rate of missing detection. So proper coordination is the key to antiHCV test. 【 】  AntiHCV； Fragment antiHCV test； False positive； RTPCR method 丙型肝炎病毒是经血液传播肝炎最常见的肝炎类型之一，抗HCV检测是预防的关键1，目前抗HCV试剂已是第三代检测试剂，特异性和灵敏度都有了较大幅度的提

10、高，但不同厂家的试剂仍有一定的假阳性率和漏检率23。笔者将本血站1年多来检测无偿献血者42293人份样本中筛查的抗HCV阳性和可疑的样本使用分片段抗HCV试剂检测，然后再用RTPCR法对分片段试剂检测阳性的样本进行确证，以观察抗HCV双试剂和单试剂阳性的分片段试剂的反应性以及抗原确证检测情况，现将结果报告如下。 1  材料与方法 1.1  样本来源  本站2006年7月至2007年12月间所检测的42 293份无偿献血者标本，使用ELISA法抗HCV两种试剂检测阳性56份（阳性）；单试剂检测阳性90份（可疑）；154份阴性血清来自日常无偿献血标本各项检测都正常的合

11、格血样。均由站质控科收集。 1.2  样本处理  阴性标本为血站对献血者进行HBsAg、抗HCV、抗HIV、梅毒ELISA、ALT进行两种不同厂家试剂检测阴性的标本；阳性样本是两种不同厂家试剂同时检测阳性的样本；可疑样本是抗HCV检测只有一种试剂检测阳性的样本。所有样本都是从全血血袋中留取放置80环境下保存。 1.3  试剂与仪器  抗HCV试剂分别来自厦门新创和北京高达；分片段抗HCV试剂来自北京金伟凯；RTPCR试剂由广州中山大学达安基因股份有限公司提供。仪器：SUNRISE酶标仪（瑞士），TECAN Columbas洗板机（奥地利），FQD33A基

12、因扩增仪(日本)。 1.4  检测方法  所有操作全部按试剂操作说明书进行操作；ELISA法抗HCV和分片段抗HCV试剂的结果判断以酶标仪判断结果为准，S/C值1为阳性，S/C值1为阴性。分片段抗HCV检测单片段和双片段以上阳性的标本均采用RTPCR法进行检测。 2  结果 2.1  146份抗HCV阳性和可疑血清双片段以上阳性结果  见表1。 2.2  146份抗HCV阳性和可疑血清单片段阳性结果  见表2。 表1  146份抗HCV阳性和可疑血清用分片断试剂检测双片断以上阳性结果（略） 注：分片断检测阳性数分别

13、与A、B单试剂ELISA抗HCV检测阳性数进行比较，差异有显著性（2A=20.7  PA0.05；2B=11.3，PB0.05）。 表2  146份抗HCV阳性和可疑血清用分片断试剂检测单片断阳性结果（略） 3  讨论     近几年随着分子生物学技术的发展，研究丙型肝炎病毒的抗原性不断深入，诊断丙型肝炎的试剂盒日臻完善，检测结果的准确性已有大幅提高，但仍存在部分受血者发生输血后丙型肝炎感染和部分献血者被误判为丙型肝炎病毒抗体阳性4。     从表1中可看出双试剂抗HCV检测阳性标本56份，分片段抗HCV

14、试剂检测两个及两个片段以上阳性45份（80.4%），RTPCR阳性19份（33.9%）；A试剂为7份（12%）、B试剂为5份（15.6%），RTPCR阳性数为0。经统计学处理单试剂与双试剂抗HCV阳性的分片段试剂检测阳性率是有明显差异，表明双试剂检测的准确性远远高于单试剂，使用两种不同厂家的抗HCV试剂进行血液检测是必要的5。     从表1和表2可以看出，A、B两种ELISA抗HCV试剂单独检测阳性的90份标本中单片段阳性20份（22.2%），双片段以上阳性12份（13.3%），用RTPCR法确证后仅1例（1.1%）阳性。可见抗HCV ELISA试剂的假阳性问题

15、还较普遍，这是由于各厂家ELISA试剂盒使用的抗原成分配伍以及抗原的纯化程度不同造成的。另外也有报道使用RIBA法对抗HCV ELISA检测结果进行确证，结果表明抗HCV ELISA试剂存在假阳性问题6。这对于血液资源是一种浪费，也给无偿献血者带来很大的不该有的心理负担，还有待于生产厂家进一步提高试剂质量，降低假阳性率。     表2显示抗HCV检测阳性的146份标本中单片段阳性的有28份（19.2%），经RTPCR确证后有4份（2.7%）阳性，这与有关报道相似7，说明单片段阳性的标本也不容忽视。值得关注的是表2中有1例B试剂检测阳性且RTPCR确证阳性，A试剂却

16、没有检出，说明A试剂存在漏检现象。也有报道表明，由于不同厂家的试剂盒包被NS3和NS4非结构区抗原的纯度不同而导致试剂盒对不同片段的抗体检出率也不尽相同8。     上述结果表明目前不同厂家试剂由于方法学的原因都存在不同程度的漏检或假阳性现象。因此血站在选择抗HCV试剂时应做试剂评价，最好采用血清盘对试剂做整体评价，选择两种试剂包被抗原有互补性的试剂作为两次检测试剂。     154份阴性标本中单片段阳性的有3份，分别是NS5阳性2份，NS4阳性1份，RTPCR检测均为阴性，表明目前抗HCV检测的血液是安全的。 【参考文献】 

17、0; Agarwal SK,Dash SC,Irshad M,et al.Impact of hepatitis c virus infection on renal transplant outcome in Indiaa single centre studyJ.J Assoc Physicians India,2000,48(12):1155.    2 Colin C,Lanoir D,Touzet S,et al.Sensitivity and specificity of thirdgeneration hepatitis C virus a

18、ntibody detection assays:an analysis of the literatureJ.J Viral Hepat,2001,Mar,8(2):8795.    3 Xiu Bs,Ling SG,Song XG,et al.Crossreactivity of hypervariable region 1 chimera of hepatitis C vivusJ.World Gastroenterol.2003,9(6):1256.    4 张贺秋，陈 坤，宋晓国，等.用国产重组不同优势抗原研制丙型肝炎病毒抗体确认试剂J.陕西医学检验，2002，16（1）：13.    5 高 峰，张 晰，王 迅，等.血液病毒标志物两次检测模式的探讨J.中国输血杂志