海带配子体克隆规模化培育及育苗技术

1、海带配子体克隆规模化培育及育苗技术摘 要：海带配子体克隆能长期保存， 可维持原 有性别， 对保护海带种质资源， 研究海带生理、 生化、 遗传学、规模化培育及生产等方面均具有重要价值。 本文分别从配子体克隆的规模化培养、采苗、幼苗培 育 3 个方面探讨了海带配子体克隆规模化培育及育苗 过程中的关键技术。关键词：海带；配子体克隆；规模化培育 中图分类号： S968 文献标识码： A 我国自发现海带到如今已有 7、80a 时间，是最早 实现海带人工育苗的国家。自 20世纪 50年代初期， 海带养殖业就已成为我国海水养殖领域的龙头产业， 如今我国苗种繁育能力已达 200 亿株，海带养殖面积 超过4万h

2、m2,是全球首屈一指的海带栽培大国。1 海带配子体克隆规模化培养技术要点分析1.1 培养室 海带配子体克隆规模化培养对培养室提出了一定 的要求,除了配备必需的空气消毒及制冷系统以外, 要求培养室应具有足够的隔热性。培养室内应进行培 养架设置,光源可采用日光灯,充气可采用 48m3/h 风量的旋涡式充气机，克隆扩大培养的容器可采用 18.9L 容量的无色矿泉水桶。1.2 培养液 选择自然海水，经过沉淀、砂滤、煮沸、冷却， 或在培养室内进行预冷，后加入 NaNO3-N 10g/m3， KH2PO4-P 1g/m3 等营养盐。若配子体克隆鲜干重每 瓶超过8g,应将培养液中KH2PO4-P的含量提高至

3、 2g/m3。1.3 接种 采用高速组织捣碎机对海带配子体克隆簇状体进 行切割，切割为大小在200400 口 m之间的细胞段， 接种于有效培养水体容量 5000mL 的 3 角烧瓶中。应 根据配子体克隆重量的 1 1.5g/L 进行接种，切忌接 种密度过低。在用高速组织捣碎机切割后会造成许多 细胞机械性损伤，接种水体相对浑浊，极易滋生大量 细菌，对配子体克隆的生长带来不利影响，因此，对 于初始接种的克隆瓶要增加换水频率， 最好每天更换， 待水体稳定后改为 1015d 更换。1.4 规模化培养条件簇状体切割时间控制 规模化培养研究表明，待簇状体直径达 2mm 时， 即需要采用高速组织捣碎机切割，

4、切割时间在10s左 右，使细胞段长200卩m。温度控制研究显示，15C下克隆生长速度最快但极易受到 杂菌的污染，规模化培养应将温度控制在1013C之 间。1.4.3 雄配子体克隆规模化培养起始时间研究显示，雌雄配子体克隆规模化培养比例应为 2：1，雄配子体生长速度更快，因此，应将雄配子体 克隆起始培养时间稍推迟。1.4.4 光照影响规模化培养中，应将 1500 2500Lux 作为配子体 克隆的最适宜光照，将温度 510C200Lux以下光强 及静置培养作为海带种质保存的有效途径。1.4.5 充气悬浮培养充气悬浮培养下，配子体克隆生长速度较静置培养显著提高，同时，应注意将空气采用小滤器进行过

5、滤，以防水质污染。1.4.6 换水及清洗 规模化培养过程中，若克隆生长情况欠佳，粉碎时间过短，水质存在污染时，应相应增加换水次数， 可将克隆置于 300 目筛绢上，采用喷雾器进行多次冲 洗，直至镜检克隆没有附着物为止。此外，还可施加 一定量抗生素，以抑制细菌的生长。2 采苗过程的技术要点采苗多在 8 月上旬进行，切忌将规模化培养的雌 雄配子体克隆直接喷洒在苗帘上，这样易造成细胞团 脱落、密度超标等情况。采苗时应采用发育状态下的 均匀小细胞段进行喷洒。2.1 一次分离将规模化培养的雌雄克隆按鲜重 2：1 的比例混 合，在组织捣碎机进行切割，交替采用快、慢切割， 时间控制在1015s,切割为500

6、600卩m细胞段。2.2 短光照培养采苗前716d进行短光照培养，密度控制在250g/瓶，10h光照下采用充气悬浮进行培养，温度为812 C，光强 1500IX。2.3 二次分离短光照培养后，喷洒苗帘前须进行 2 次切割，经 400目筛绢过滤，所得细胞段多数为 15个细胞。2.4 采苗方法滤出细胞液用低温海水稀释， 采用孔径 1.2mm 的 自制专用喷洒设备将其喷洒于培育池静水水面中，细 胞段受到重力沉落在苗帘上。采用单、双号池分开进 行，第 1 天采用单号池进行采苗，双号池用循环流低温水降温，隔天用双号池采苗，单号池微流水。各苗 帘按克隆鲜重 1g 均匀喷洒。3 幼苗培育技术要点分析 此过程

7、需要在繁育间进行，雌雄克隆经 2 个月的 培育，所获得幼苗可出库。3.1 水温控制采苗过程水温控制在67C,确保静水培育水温 在15C以内，以防不利于配子体发育。静水培育过程 中,为避免采苗池水温升高,在相邻培育池应采用循 环流低温海水降温法控制采苗池的水温，流水过程中 水温为810C。3.2 光照控制基础平均光控制在130014001x,高光为2700IX。 前期5d提1次光，1次平均提1001x,高光提200IX, 后期每3d提1次光，1次平均提150200lx,高光1 次提 300 400Ix。3.3 营养盐配-孢子体 5mm, NaNO3-N 3g/m3, KH2PO4-P0.3g/m

8、3; 5mm 至出库，NaNO3-N 4g/m3, KH2PO4-P 0.4g/m3。孢子体长到2-4列细胞时，采用 FeC6H5O7?5H2O-Fe 0.02g/m3培养 20d。3.4 水流调节采苗第1天用静水，48h后为微流水，72h后正常 流水。3.5 新水量前期新水量占总量 1/2，中期为 2/3，后期为 5/6。 目前，在海带配子体克隆规模化培育及育苗技术 中仍存在不少技术难点还未攻关，例如，适用于规模 化生产的水处理技术、高效克隆分离法、有效的发育 诱导法等，需进一步研究，为提升我国海带配子体克 隆的规模化培育及生产提供技术支持。参考文献1 王素娟.海藻生物技术 M. 上海：上海科学技