VEGF检测在胸部恶性肿瘤中临床意义

1、VEGF 检测在胸部恶性肿瘤中临床意义马晨光150036）摘要 ：目的 ：探讨检测胸部恶性肿瘤患者外周血中血管内皮生长因子（VEGF的临床意义。方法：32例健康志愿者作为正常对照组，45例肺癌患者, 30例食管癌患者。采用ELISA方法检测外周血VEGF勺含量，比较各分组间的差 异。结果：肺癌、食管癌阳性观察组血清 VEG印日性表达率及含量明显高于正常 对照组（P< 0.05） ,VEGF的阳性表达率及含量在按不同的病理生理特征分组的 肺癌、食管癌患者中表现出统计学差异（P< 0.05）。结论：VEGF水平对肺癌、 食管癌患者有诊断价值。血清 VEG冰平与肺癌、食管癌的病理生理特征

2、、恶性 行为密切相关。检测血清VEGF寸于判定肺癌、食管癌病理生理特征有一定参考 意义。VEGFT作为临床常用检测食管癌、肺癌的血清检测物。关键词 ：血管内皮生长因子，肺癌，食管癌，ELISAThe Clinical Value of Detection of Serum Level of VEGFin EsophagealCarcinomaMA Chen-guang(The Provincal Hospital of Heilongjiang 150036)Abstract ： Objective: To research the clinical value for thoracic ma

3、lignant tumors by detection of the serum level of VEGF.Methods: The level of serum VEGFwas determined by using enzyme-linked immunosorbent assay in 45 patients with lung carcinoma and 30 patients with esophageal carcinoma, compared with the levels of the controlsin which there are 32 volunteers for

4、health examination, and then the results were analyzed. Results: The serum levels and positive ratesof VEGF in the positive group are higher than that in healthy group with statistic significant difference ( P < 0.05 ) ; There are significant difference in the serum levels and positive rates of V

5、EGF in the different groups divided on pathophysiologic characters of lung carcinoma and esophageal carcinoma ( P < 0.05 ) . Conclusion: The detection of serum VEGF may be valuable to the diagnosis of lung carcinoma and esophageal carcinoma. The serum level of VEGF in lung carcinoma and esophagea

6、l carcinoma patients were strongly correlated to the pathophysiologic characters and malignant behavior of tumor. There may be some reference value for the prognosis of the pathophysiologic characters of lung carcinoma and esophageal carcinoma by the combined detection of serum VEGF.Key Words: Vascu

7、lar Endothelial Growth Factor; Lung carcinoma; Esophageal carcinoma ， enzyme linked immunosorbent assay肺癌、 食管癌是常见的胸部恶性肿瘤，也是人类最常见的恶性肿瘤之一。我国是肺癌、食管癌的高发国家，近年来二者的发病率逐年升高。食管癌是消化道常见的恶性月中瘤之一，高发年龄在6064岁。我国是世界上食管癌发病率和死亡率最高的国家，全世界每年食管癌新发病例约31.04 万，而我国占16.72 万 ，其中 河南省林县男性食管癌发病率高达478.87/10 万，是世界高发地区之一。肺癌是最常见的肺部原

8、发性恶性肿瘤。世界上至少有35 个国家的男性肺癌为各癌肿死因中第一位，女性仅次于乳腺癌的死亡人数。本病多在40 岁以上发病，发病年龄高峰在60 79 岁之间。男女患病率为2.3:1 。种族、家属史与吸烟对肺癌的发病均有影响。在我国， 肺癌也已在男性中占常见恶性肿瘤的第一位，在女性中占第二位。肺癌、食管癌发病隐匿，早期诊断比较困难，待患者自觉有明显 临床症状时，往往已发展到中晚期，而且预后很差，严重威胁人类的生命与健康，如何实施有效的早期筛选方案，探讨肿瘤的发生和发展机理是目前研究者关注的重要问题。本研究试图通过统计正常对照组及肺癌、食管癌患者的外周血VEGF含量，分析VEGF 在正常对照组及肺

9、癌、食管癌患者中含量和阳性表达情况，以及VEGF 在不同病理生理分组中的差异，研究它们的临床意义及相互关系，希望能够将VEGF 作为临床上有参考意义的常规血清检测物。1 资料与方法1.1 临床资料实验组： 全部病例均为我科从2006 年 9 月至 2009年 1 月收治， 经临床明确诊断（包括钢餐透视、胸部 X线、胸部CK气管镜、胃镜、脱落细胞学、病理切片证实等）为肺癌、食管癌患者。并根据我国1997 年肺癌、食管癌临床病理分期标准确定的临床分期。剔除不符合标准病例，共75例，其中肺癌45例，食管癌30例。肺癌组年龄3679岁，平均60岁。月中瘤 3cm患者19例，月中瘤学 3cm患者26例；

10、按TN*组：I+II期患者30例，III+IV 期患者15例；低分化癌组 21 例，中高分化癌组24 例；无淋巴结转移组18 例，已有淋巴结转移组27例。食管癌组年龄3975岁，平均58岁。月中瘤 3cm患者13例，月中瘤学3cm 患者17例；按TNMH&: I+II期患者11例，III+IV 期患者19例；低分化癌组 10 例，中高分化癌组20 例；无淋巴结转移组12 例，已有淋巴结转移组18 例。正常对照组：共32例，来源于健康志愿者，男21例，女11例，3070岁。无心、肺、肝、肾主要脏器疾患，无家族肿瘤病史。剔除标准：近期有严重感染、手术、创伤史患者；服用类固醇药物及有类风湿患

11、者；妊娠、月经期妇女；已进行过放、化疗的肺癌、食管癌患者；贫血，HbK90g/L。1.2 方法标本的收集与保存VEGF检测所需血清于手术治疗前应用加促凝剂的真空、分离胶采血管采取 晨起空腹静脉血3.5mL,室温放置1015分钟后，2500r/min离心10分钟，分 离血清，将标本分别放入Eppendorf 管中，于20保存待用。检测方法1、检测试剂与方法VEGF检测所需试剂盒购自博奥生物公司。应用ELISA法检测，检测波长450nm。2、设备1）酶标仪：Stat Fax-2100 酶标仪。（2）血液分析仪：Sysmex公司SF-3000自动血液分析仪。（3）结果判定VEG用日性界值采用正常人9

12、5%T信区间上限：107.6pg/mL （x+1.96s）;1.3 统计学处理一数据应用简明统计10.3统计软件包进行统计学分析处理。采用的统计方法为X2检验。2结果2.1 VEGF的阳性表达情况通过上述试验方法、试剂及设备检测血清VEGF含量，记录检测数值。将超过各项指标上限的病例记为阳性病例。统计VEGF在正常对照组、肺癌组、食管癌组以及按不同病理生理特征分组的各组中的阳性表达情况，详见表1、2。表1 VEGF在所有观察对象的阳性表达情况Table 1 The positive rates of serum VEGF in all objects of observation类另I nVE

13、GF阳性n % p正常组32412.50肺癌组452760.00PV 0.05=0.0000食管癌组301653.33PV 0.05=0.00062.2 VEGF的含量比较肺癌组、食管癌组与正常组比较：肺癌组、食管癌患者血清 VEGF含量均较正常对照组显著升高，具有统计 学意义（P< 0.05）不同病理生理特征分组的肺癌、食管癌患者比较：肺癌组：血清VEGF在淋巴结已转移组及III+IV期组含量明显升高，具有 统计学意义（P<0.05）,而不同月中瘤大小（P=0.139）及不同分化程度（P=0.714） VEG的量无显著性统计学差异。食管癌组：血清VEG度量在月中瘤长度3cm组、I

14、II+IV 期组、已有淋巴结转移组中含量升高，具有统计学意义（P< 0.05）,而不同分化程度（P=1.000）VEG哈量无显著性统计学差异。表2 VEGF在不同临床病理生理分组的阳性表达情况Table 2 The positive rates of serum VEGF in the different groups grouped by the clinical pathophysiological characteristics of thoracic malignant tumors类别nVEGF阳性n%P肿瘤 < 3cm19947.37肺大小> 3cm261869.

15、23P> 0.05=0.1392TNM I+II 期301343.33癌分期 III+IV期151493.33P< 0.05=0.0012分化 低分化211257.14组中高分化241562.50P> 0.05=0.7144淋巴无转移18633.33结已转移272177.78P< 0.05=0.0029肿瘤 < 3cm13323.08食大小> 3cm171376.47P< 0.05=0.0086TNM I+II 期11218.18管分期 III+IV期191473.68P< 0.05=0.0068分化 低分化10550.00癌中高分化201155

16、.00P> 0.05=1.0000淋巴无转移12216.67组结已转移181477.78P< 0.05=0.00222.3 肺癌组与食管癌组比较肺癌组血清VEG哈量与食管癌组VEG哈量比较，二者无显著性统计学差异（P>0.05）。3讨论肿瘤血管形成不但为肿瘤细胞生长提供条件, 也使肿瘤细胞较容易地通过尚不成熟的新生血管进入血流进行远处转移。某些恶性肿瘤为了获得足够的氧气和营养物质, 自身可以释放一些化学物质诱导新生血管的形成, 血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor VEGF)被认为是最重要的物质之一 ,VEGF 是一种由肿

17、瘤细胞分泌并特异性作用于血管内皮细胞的一种血管生长 1因子，对血管形成有较强诱导性。VEGF是众多血管生成因子中针对内皮细胞特异性最高，促血管生成作用最强的有丝分裂素，起着中心调控作用，它直接参与诱导肿瘤的血管生成 2,3 ， 是肿瘤生长和转移的基础，近年来受到越来越多的重视。VEGFt早由Senger等在月中瘤细胞分泌物中发现。VEGF8血管通透性增加，可引起月中瘤血管中的蛋白质外渗，有助于月中瘤生长、转移，当VEGFt抑制时，月中瘤新生血管及月中瘤生长将受到抑制。 血清中的VEGFT能是月中瘤细胞、血小板、白细胞共同分泌的结果，病例选择中应用剔除标准可一定程度上地减少肿瘤以外因素对测定结果

18、的影响。本实验结果显示：肺癌患者血清 VEG哈量及阳性表达较正常对照组显著增高(P< 0.001 ),这可能是由于月中瘤细胞分泌的 VEGFS穿过血管壁的血液细胞进入血液循环；或是由于 VEGF使血管壁通透性增加，从而弥散到血液中。据报 4道,VEGFffi月中瘤血管计数可作为肺癌的独立预后因素,通过比较不同临床病理特征的肺癌患者血清VEGF勺含量。发现不同月中瘤大小及不同分化程度 VEG哈量无显著性差异，但血清VEGF含量与淋巴结转移及月中瘤临床分期密切相关 ，提示 5VEGFS肺癌淋巴结转移及临床分期进展过程中起重要作用。曰lis等认为,月中瘤细胞要完成淋巴结转移必须经历以下几个过程

19、。月中瘤细胞进入淋巴结；月中瘤细胞从基质脱落时细胞凋亡得到抑制; 肿瘤细胞逃避免疫监视; 转移灶中血管形成。由此可见, 肿瘤细胞的淋巴结转移受到多个环节的影响, 并可能与VEGFC族的其他成员 VEGF-B VEGF-D VEGF-侬其他血管生长因子的调节有关。文献报道VEGFS达与肺癌淋巴结转移呈正相关 。本研究发现血清 VEGF含量在已有淋巴结转移组中含量升高，提示VEGF可通过血循环而影响癌细胞的淋巴结转移。我们推测,VEGF 在促进肺癌血管生成, 促使血管增加的同时出现大量结构和功能异常的肿瘤血管, 由于这类新生血管管壁不完整, 缺乏基膜, 而VEGF是已知最强的血管渗透剂，能增加微血

20、管（特别是毛细血管后静脉和小静脉） 的渗透性, 加之瘤区缺乏有效的淋巴循环, 导致瘤内及瘤周间质水肿, 使组织间隙变宽和开放, 大量组织间液在回流过程中引导瘤细胞向毛细淋巴管方向运动, 最后随组织液进入毛细淋巴管, 故最终导致淋巴系统转移。Fontanini 等 8 采用RT-PC亚原位杂交方法研究 VEGF121mRN阳EGF165mR曲VEGF189mRb®诽小 细胞肺癌的表达情况时发现，在3种VEGFE型中仅有VEGF121mRNA±与肺门及 9纵隔淋巴结转移密切相关。VEGF12促VEGF最主要的可溶形式,因此我们认为血清VEG哈量可以预测肺癌淋巴结的转移情况。此外

21、本研究还发现随着肺癌 临床分期的进展，血清VEG哈量也随之增高，提示血清VEG含量可作为评价肺癌 临床分期进展的一种有价值的指标。目前国内外学者纷纷研究证实 VEGF1食管癌转移的重要调节因子之一。研 究发现,VEGF水平与食管癌微血管密度、外浸程度、转移及预后等密切相关口0'11。Kitadai等检测了 119例食管癌中VEGF勺表达，结果VEGFft达率为59.7%,且VEGF勺表达与月中瘤浸润深度、月中瘤分期和淋巴结转移密切相关。本研究得到 了类似的结论。食管癌患者血清VEG哈量及阳性表达较正常对照组显著增高（P<0.001）,且血清VEG哈量在月中瘤长度3cm组、川+IV

22、 期组、已有淋巴结转 移组中含量升高（P< 0.05）,说明VEGFE食管癌中有过量的表达，并通过对微 血管的生成促进作用影响食管癌月中瘤的生长。因此，VEGF一方面促进了月中瘤的血管新生，另一方面也间接促进了肿瘤淋巴系统的增生。丰富的微血管系统和淋巴管网使肿瘤具有高度的增殖活性和侵袭性。肿瘤越大，表面积越大，其侵及附近微血管或淋巴管的可能性相对也越大。癌细胞可以直接侵入邻近的微血管或淋巴管或通过静脉一淋巴管交通支形成血路或淋巴路转移。VEGF还可以诱导纤维蛋白溶解酶原激活剂及其在内皮细胞上的受体，进而通过纤维蛋白溶解酶系统以及金属蛋白酶降解肿瘤边缘的基质，扩大原发肿瘤的侵袭性，增加淋巴

23、结转移的可能性 12 。因此，在食管癌临床病理分期中，随着浸润深度的增加和淋巴结转 移的出现，VEG肉升高趋势，检测食管癌患者血清 VEG冰平方法不仅在食管癌诊断中有一定的意义，而且简单易行，尚可较早地反映其发生进展情况，有利于对治疗措施的选择和预后的判断。研究证明VEGF与月中瘤的关系，为合理应用抗 VEGF药物打造了月中瘤治疗的 一个崭新平台。抗VEGF台疗是肺癌治疗白一个崭新领域，它具有特异性强、不易 产生耐药性、不受肿瘤细胞周期限制等优点, VEGF 因其在肿瘤血管生成中的重要作用 , 而成为抗肿瘤血管生成的重要靶点, 具有良好的应用前景。但是, 抗肿瘤血管生成只能抑制肿瘤细胞的生长和

24、转移, 并不能完全消灭肿瘤细胞, 一旦停药肿瘤细胞又可恢复增殖, 而且抗血管生成治疗的靶向性问题、药效监测问题、与细胞毒药物联合使用的问题及最佳用药时机等问题尚有待进一步评价。相信随着对肺癌与的深入研究及其相关学科的发展, 这些问题将会得到解决, 血管靶向治1. Helen Han ,Jan F Silverman,Tibetha S,et al.Vascular endothelialgrowth facto rexpression in stage non-small cell lung cancer correlates with neoangiogenensis and a poor

25、prognosisJ.Annals of Surgical Oncology,2001,8:722. Fong GH, Rossant J, Gertsenstein M, Breitman ML. Role of the Flt-1 receptor tyrosine kinase in regulating the assembly of vascular endothelium. Nature. 1995; 376(6535):66-703. Risau W. What , if anything, is an angiogenic factor? CancerMetastasis Re

26、v. 1996; 15(2):149- 151.4. Fontanini G,Boldrini L,Vignati S,et al.Bcl-2 and p53 regularvascular ndothelial growth factor (vegf)-mediated angiogenesis in non-small cell lung carcinoma J.Eur J Cancer,1998,34(5):7182725.5. Ellis LM,Fidler I.Angiogenesis and metastasis J.Eur J Cancer , 1996,32A(14):2451.6. Niki T,Iba S,Tokunou M,et al.Expression of vascular endothelialgrowth factor