HPV临床常用检测方法

1、由于HPV不能在体外细胞培养，故不能用简便的血清血检测进行HPV的诊断和分型。临床上用于检测HPV的方法包括细胞学方法、免疫组化、原位杂交、斑点杂交、核酸印迹和PCR等，其中以PCR方法的敏感性最高，是目前应用最多感染的HPV型别、含量、持续时间决定病变的发展与预后，是进行HPV检测的主要内容。目前主要是通过应用分子生物学方法进行HPV DNA的检测。1、现有的HPV实验室主要检测手段： 聚合酶链反应(PCR, Polymerase Cha in Reactio n):扩增位于两段已知序列之间的DNA片断的方法。该法有较高的敏感度，可进行HPV分型,缺点是对实验室环境要求较高 ,容易发生样本间

2、的交叉污染，从而导致假阳性率高。 核酸杂交检测有较好的特异性和敏感度，还可以进行HPV DNA的分型,各种核酸杂交检测方法有一定 的优缺点。A核酸印迹原位杂交适用于HPV分型和HPV DNA分子量鉴定，虽然灵敏度高，但因操作复杂，需要新鲜组织 标本,不便在临床上大规模使用。B斑点印迹其敏感度和特异性均低于核酸印迹原位杂交法，虽然经济实用，但实验过程存在有放射性污染,是环保所不能轻视的问题。C原位杂交(in situ hybridization ，种核酸杂交技术，可用来测定基因或特定核苷 酸序列在核酸分子的所在部位， 检测重组体DNA)通过非放射性探针对石蜡组织进行检测 能作定位检测，假阳性率低

3、，但灵敏度不高，大大降低了临床使用价值。D 杂交捕获法(Hybrid Capture)杂交捕获试验是利用化学发光对抗体捕获的信号加以放大。首先使DNA双链释放并分解成为可以杂交的核苷酸单链，DNA单链与RNA组合探针结合为 RNA-DNA杂合体，特异性抗体将RNA-DNA 杂合体捕获，偶联有碱性磷酸酶的第二抗体与RNA-DNA 杂合体结合，碱性磷酸酶使酶底物发光，根据光的强弱可确定碱性磷酸酶的含量，从而确定RNA-DNA 杂合体的含量。能检测13种高危型HPV,包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、 56、58、59、68。各种检测方法的比较各种检测方法的比较方法学灵

4、敏度特异性技术特点细胞学(Cytology )低低操作容易，成本较低，准确度较差斑点印迹(Dot blot )中中有一定放射性核酸印迹原位杂交(southernblothybridization )高高标准、麻烦，不宜大规模使用原位杂交(In Situhybridization )高中蜡块组织包埋内检测 HPV杂交捕获(HC、HC2)高中无放射性，易使用，高、低危型间有交叉反应，且不能分型普通多聚酶链反应(PCR)很高中取材容易，但目前已应用试剂的只能检测少 数单一型别，如6、11、18等，且由于技术上的 问题存在假阳性2、最新推出的HPV的实验室检测技术高灵敏度高危型HPV分型多色荧光实时

5、PCR试剂：为欧洲著名分子生物学研究机构专门针对宫颈癌筛查而全新设计的高危型HPV分型多色荧光实时 PCR检测试剂，可同时检测高危型中最主要的 16、18、31/33、35/45 型。了解宫颈疾病人乳头状瘤病毒（HPV ）感染患者中 HPV亚型分布情况及高危型HPV的年龄分布。方法采用专利Invader酶切信号放大法，利用Cervista HPV HR Cervisat 核酸杂交基因分型试剂检测宫颈脱落细胞HPV的14个亚型DNA。HPV型组亚型备注A5/A651，56，66A718，39，45，59，68A916，31，33，35，52，58L3 HFVHybriMitx居用核酸井子杂交仪*

6、 BNA槎耿试 刑徂和人乳头状*SIS毒植Bfi分子快速亲交基閃分型 试剂款(Hyhrik«美加专利(W2CI87)均为凯晋 生物科技有限公时产品口采用低密度撰因芯片利导 流杂交技术(byfcridizaLon)应用專核 昔粮探师杂兗叮筮岀13种髙危亚型(HPV 1趴 I仏：M、33、35、39x 4仇 51、J2. 56, 58, 59, 68). 5 种低危亚型(HPV6. LU 42、43 和 44) 及中国人特有的离危亚型(CW304, S3. 66)fl M 休步mar：利用訓普生物化学科技公可的基 H&#提试闸盒提取样本DNA,FTC-200 ( MJ Rrsch

7、) PCR扩壇由反应体系為#,条件为列 T9 miuF 95 T： 20 s, 55 3G «T 72 12 M .r 扩增 40 r®环，72无廷伸3 min。的七预热后*在 HybriMaj医用檢匯分子快極杂交仪乎台上放人标 记有21种HPV莘因SS轟核音醉探针的低密度華因 芯片，将扩増产物賈95 X：变性5 min,冰浴2血儿 加入检涮料内进杼10 min的診流杂左酶标尿 色：加人封阻液封用为反蛊的空白徹孔”酹扳显色 后观察栓离结星彳阳性点呈现蓝幫色圆点，爭个圆 点阳性即为多据感坚*每献芯片上有PCR反应质 桂点和衆交显色质控点各I个。HPV基因分型检测试剂盒(PCR

8、-反向点杂交法)【产品用途】对人乳头瘤病毒(HPV )的感染情况进行定性检测并加以分型，能够检测23种HPV基因型，直接提示感染HPV的基因型；包括18种高危和5种低危型，可用于临床 HPV感染的辅助诊断。【产品优势】1. 精确分型：能同时对 23种HPV基因型进行精确分型，包括 18种高危型和5种地位型；2. 效率高：单次检测标本数量可达96份；3. 性能好：特异性强、重复性好，均高于98% ；4. 设备通用：如普通 PCR仪和杂交仪，适应于大、中、小型实验室；5. 内部质控：具有真正意义上的内部质控，检测结果更加准确；6. 可以检测多种临床标本。【技术方法】采用 PCR 和反向点杂交法相结合的基因芯片技术【检测原理】通过检测杂交将大量不同序列的探针分子固定于支持物的不同位置上， 然后与已做标记的样本进行杂交， 信号的强度和分布来进行分析。【检测标本】宫颈脱落细胞、液基细胞学标本、疣体组