选修一基础知识

1、生物选修1知识点专题一：传统发酵技术的应用 一、果酒制作的原理(1)、酵母菌类型：_，具有成形的细胞核。繁殖方式：出芽生殖和孢子生殖。温度低时形成孢子，进入休眠状态；温度适宜时，进行_，繁殖速度快。代谢类型：异养兼性厌氧微生物。(2)、制作原理在有氧条件下，酵母菌进行_，大量_，反应式为：C6H12O66O26CO26H2O在无氧条件下，酵母菌进行_，反应式为：C6H12O62C2H5OH2CO2(3)、影响酒精发酵的环境条件有_。发酵温度控制在_范围内。在_的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物无法适应这一环境而受到抑制。酵母菌生长的最适pH为_。二、果醋制作的原理(1)、醋酸

2、菌：又名醋酸杆菌。类型：_。繁殖方式：_。代谢类型：_。(2)、果醋制作的原理在氧气充足时，能分别把_两种反应物转化为_。当缺少_时可将乙醇转变成乙醛，并进一步转变成醋酸。反应式：C2H5OHO2CH3COOHH2O(3)、影响醋酸菌发酵的条件醋酸菌最适生长温度为_。醋酸菌属于需氧型微生物，发酵过程中需要_。最适pH为_。（4）、酵母菌和醋酸菌的比较 酵母菌 醋酸菌 生物学分类 代谢方式 生长繁殖的最适宜的温度 主要繁殖方式 生活、生产应用 三、腐乳的制作原理1、主要微生物(1)生物学特征：腐乳制作过程中发挥作用的微生物主要是_，属于_，同化作用类型是_。(2)毛霉的作用：毛霉等微生物产生的_

3、酶等能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的_和_；产生的_酶能将豆腐中的脂肪水解为_和_。 2、发酵机理制作腐乳的过程主要是豆腐所含的蛋白质发生生物化学反应的过程。酿造腐乳的主要生产工序是将豆腐进行_和_。(1)、前期发酵主要变化：毛霉在豆腐(白坯)上的生长。条件：发酵温度为_。作用：a.使豆腐表面由一层菌膜包住，形成_。b.毛霉分泌以_为主的各种酶，有利于将豆腐所含有的蛋白质水解为小分子的_。(2)、后期发酵实质：酶与微生物协同参与生化反应的过程。主要变化 3、实验流程4、具体操作(1)让豆腐上长出毛霉选材：所用豆腐的含水量为_左右最适宜，水分过多腐乳不易成形，过少则不利于毛霉的生长。切块：将所选

4、择的豆腐切成3 cm×3 cm×1 cm的小块，若切的过小_，过大则中间部分很难形成腐乳。接种：将切好的豆腐块等距离排放，周围留有一定空隙，并将温度控制在_。该温度下_生长迅速，_等其他微生物生长较缓慢。为了提高毛霉的纯度，也可以将优良毛霉菌种直接接种在豆腐上。(2)加盐腌制：将长满毛霉的豆腐块分层加盐，加盐量要随着层数的加高而_，近瓶口的表层要_。加盐的目的是使_，利于后期制作时成形；同时盐也能_的生长，避免豆腐块腐败变质。长满毛霉的豆腐块与盐的质量分数比为_。(3)加卤汤装瓶：卤汤中酒精的含量应控制在_左右，它能_微生物的生长，同时与腐乳独特的_形成有关。香辛料可以调制

5、腐乳的_，也具有_的作用。(4)密封腌制：将用盐腌制好的豆腐块迅速小心地装入洗刷干净并用沸水消毒的玻璃瓶中，并整齐摆放，然后加入卤汤。将瓶口通过酒精灯的火焰后，用胶条将瓶口密封。在此过程中时刻注意防止杂菌污染。5、影响腐乳品质的因素(1)卤汤直接关系到腐乳的色、香、味卤汤是由_和_配制而成的。卤汤中的酒可以选用料酒、黄酒、米酒、高粱酒等，含量一般控制在_。加酒可以_，同时能使腐乳具有独特的香味。香辛料种类很多，如胡椒、花椒、八角、桂皮、姜、辣椒等，香辛料可以调制腐乳的_，也具有_的作用。(2)控制好材料的用量用盐腌制时，若盐的浓度过低，不足以抑制微生物生长，可能导致_；若盐的浓度过高，会影响_

6、。卤汤中酒的含量应控制在12%左右。酒精含量过高，腐乳成熟的时间会延长；酒精含量过低，不足以抑制微生物生长，可能导致豆腐腐败。(3)掌握好发酵温度和时间毛霉的最适生长温度为1518，保持其生长适宜温度，可缩短发酵时间。温度过低或过高会影响毛霉的_和_，从而影响发酵的进程和发酵质量；时间过短，发酵不充分；时间过长，豆腐会软化不易成形，从而影响_。6、影响腐乳品质的条件：(1)、盐： (2)、酒的用量：(3)、发酵的温度：四、泡菜的制作1、乳酸菌(1)、生物学特征乳酸菌是由原核细胞构成的_；繁殖方式是分裂生殖；新陈代谢类型是_，有氧时发酵(无氧呼吸)受到抑制。(2)、乳酸菌的作用在_条件下，乳酸菌

7、可将_分解成_。反应式：C6H12O62C3H6O3(乳酸)2、泡菜坛的选择标准是_、_、_、_、_，否则容易引起蔬菜腐烂。3、实验流程4、操作步骤(1)、将新鲜蔬菜预先处理成_。(2)、泡菜盐水按清水和盐的质量比为_的比例配制，_备用。(3)、预处理的新鲜蔬菜装至半坛时放入蒜瓣、生姜、香辛料等佐料，并继续装至八成满。(4)、倒入配制好的_，使盐水浸没全部菜料。(5)、盖上泡菜坛盖子，并用水_。发酵时间长短受室内温度的影响。5、腌制的条件(1)、在泡菜的腌制过程中，需要控制的条件包括腌制的_、_和_的用量。(2)、温度过高、食盐用量不足10%、腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增

8、加。6、泡菜腌制过程中乳酸菌和乳酸的变化泡菜发酵可分为三个阶段：(1)、发酵初期：以不产酸的_和_活动为主，同时还有一部分_活动。该时期利用了氧气，产生了缺氧环境，乳酸菌才开始活动。乳酸菌和乳酸的量都比较少。(2)、发酵中期：由于乳酸菌产生了大量乳酸，其他细菌活动受到抑制，只有乳酸菌活动强烈。此时期_数量达到高峰，_的量继续积累。(3)、发酵后期：由于乳酸的积累，酸度继续增长，乳酸菌活动也受到抑制，乳酸菌数量下降。乳酸菌和乳酸在整个发酵过程中的含量变化趋势为：专题2：微生物的培养与应用一、微生物的实验室培养（一）、培养基1.概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的营养物质。2.分类方

9、式分类标准类型备注培养基的 培养基、 培养基和半固体培养基培养基中加入凝固剂（有琼脂、明胶、硅胶等）即为 培养基。 培养基是实验室中最常用的培养基之一。微生物的种类细菌培养基、 培养基、 培养基和霉菌培养培养基的特殊用途基础培养基、加富培养基、 培养基和 培养基选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时 其他种类微生物生长的培养基。 培养基：是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而 不同类型的微生物。如鉴别大肠杆菌的 培养基，鉴别纤维素分解菌的 培养基。3.培养基的化学成分包括 四类营养成分。除此之外，培养基还要满足微生物生长对 、特殊营养物质以及 的要求。（二）、无菌

10、技术1.关键 防止 的入侵。2. 无菌技术包括：（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行 ；（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行 ；（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在 旁进行；（4）避免已灭菌处理的材料用具与 相接触。消毒灭菌概念用较 的物理或化学方法杀死物体 的部分微生物（不包括芽孢和孢子）用较 的理化因素杀死物体 微生物（包括芽孢和孢子）常用方法 消毒法（ 消毒法） 消毒法、紫外线消毒法灼烧灭菌、 灭菌、 灭菌适用对象操作空间、液体、双手等接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等3.比较消毒和灭菌（三）、 实验操作（大肠杆菌的纯化培养）1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算：根据 比

11、例，计算100mL培养基各成分用量。称量：牛肉膏较黏稠，可用玻棒挑取，同 一同称量。称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空气中水分。.溶化：加水加热熔化牛肉膏与称量纸取出称量纸加入蛋白胨和氯化钠继续加热加入 用蒸馏水定容到100mL（整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂）。.灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用 灭菌锅灭菌；所用培养皿用报纸包扎后用 箱灭菌。.倒平板：待培养基冷却至 左右时在 附近操作进行。其过程是：二分解纤维素的微生物的分离(一)、纤维素与纤维素酶1纤维素的化学组成： 三种元素，是一种 糖。2纤维素的分布： 是自然界中纤维素含

12、量最高的天然产物，此外，木材、作物秸秆等也富含纤维素。3纤维素酶的作用：纤维素酶是一种 ，一般认为它至少包括三种组分，即 酶、 酶 酶，前两种酶使纤维素分解成 ，第三种酶将纤维二糖分解成 。（二）、纤维素分解菌的筛选 1筛选方法： 染色法。2筛选原理：刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成 ，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应，当纤维素被 分解后，红色复合物无法形成，出现以 为中心的 ，我们可以通过 来筛选纤维素分解菌。三、试验设计流程 、 、 、 、 。1土壤取样：采集土样时，应选择富含 的环境。 2选择培养： 阅读资料二“选择培养基”，回答以下问题：若设置一个对照实验说明选择培养

13、(1)、目的：增加纤维素分解菌的 ，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物。(2)、制备选择培养基：参照课本旁栏中的比例配制。(3)、选择培养：称取土样20 g，在无菌条件下加入装有30mL培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在 上，在一定温度下振荡培养12 d，直至培养液变 。也可重复选择培养。（4）、梯度稀释： 依次将培养液稀释101107倍。思考是如何操作的？(5)、将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上<1>制备培养基：参照课本旁栏中的比例。 <2>倒平板操作。<3>涂布平板：将稀释度为104106的菌悬液各取01 mL涂布在平板培养基上，30倒置培养。(

14、6)、刚果红染色法：挑选产生 的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。刚果红染色法：常用的刚果红染色法有两种即 .三、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时 或 其他微生物生长。 (2)选择培养基：在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 或 其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。（3）配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择培养 微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养 的微生物，加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球

15、菌等。2统计菌落数目（1）测定微生物数量的常用方法有 和 。（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。3设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中 对实验结果的影响，提高实验结果的 。例如：为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养 的培养基作为空白对照。4、实验设计关于土壤中某细菌的分离与计数实验操作步骤如下： 取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。应先 3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的 中。制备 ：准备

16、牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基组织类型细胞来源细胞形态细胞结构细胞排列细胞去向根尖分生组织愈伤组织相同点将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显 选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为 ，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。样品的 和微生物的 与观察 将10g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液 ml，转移至盛有 ml的生理盐水的无菌大试管中，将土样以1、101、102 依次等比稀释至107稀释度，并按照由107103稀释度的顺序分别吸取 ml进行平板涂布操作。每个稀释度下需要3个选择培养基、1个牛肉膏

17、蛋白胨培养基。 将涂布好的培养皿放在30温度下培养，及时观察和记录。 挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含 培养基的斜面中，观察能否产生如教材中图2-lO的颜色反应。细菌的计数当菌落数目稳定时，选取菌落数在 的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出 ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。专题三 植物组织培养技术一植物组织培养的基本过程 (1)细胞全能性的表达：_的植物组织或细胞，在一定的_、_和_的作用下，发育成完整植株的过程。(2)细胞分化：在植物的_过程中，细胞在_、_和_上都会出现_的差异，形成这些差异的过程叫做细胞分化。(3)植物组织培养的基本过

18、程离体的植物器官、组织或细胞(又叫_)愈伤组织胚状体、丛芽等新个体愈伤组织的特点：细胞_，是一群_的呈_的薄壁细胞。脱分化(去分化)：由_的植物组织或细胞产生_的过程。再分化：由_重新分化成根或芽等器官的过程。(4)条件：_的植物组织或细胞，在一定的_、_和其他外界条件的作用下就可能表现出全能性，发育成完整植株。离体的植物组织或细胞叫做_。二影响植物组织培养的因素(1)培养材料的影响：不同的植物组织，培养的难易程度_。对于同一种植物材料，材料的_、_等也会影响实验结果。因此菊花的组织培养，一般选择_的茎_部_的侧枝。(2)营养物质的影响：常用的_培养基，主要成分包括_、_、_以及蔗糖等。其中_

19、和_提供植物细胞所必需的无机盐；_提供碳源，维持细胞渗透压。(3)植物激素的影响：MS培养基常需添加植物激素。其中_和_是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素，这两种激素的_、_以及_等，都会影响实验结果。(4)环境因素的影响：_、_、_等条件也能影响植物组织培养。三愈伤组织与根尖分生区组织的比较四、实验操作流程1、制备MS培养基A.配制各种母液：配制母液时， 元素浓缩10倍， 元素浓缩100倍， 以及用量较小的有机物一般可按 的质量浓度单独配制成母液。B.配制磁头基的步骤是 C.灭菌的方法： 2、外植体消毒：先用 消毒，再用 消毒，最后用无菌水清洗。3、接种：所有的接种操作都必须在 旁进

20、行，对接种工具在使用前和使用后都要进行 灭菌。4、培养：培养期间应定期消毒，培养温度控制在 ，并且每日用日光灯光照 。5、移栽：先在培养间生长几日，再移栽到土壤中。6、栽培五基础知识1被子植物的花粉是在 中由 经过 分裂形成的。2结合教材内容填下列示意图：小孢子母细胞（2n）（ ）时期（n）单核（ ）期（n）双核期（ ）细胞核（n）（ ）细胞核（n）（ ）细胞（n）（ ）细胞（n）（ ）个精子(n)（ ）分裂（ ）分裂单核（ ）期（n）（ ）分裂3产生花粉植株（即单倍体植株）的两种途径：一是花粉通过 阶段发育为植株，二是通过 阶段发育为植株。这两种途径的区别主要取决于培养基中 的种类及其 度

21、的配比。4填写培育花粉植株的途径图解：（ ）花药中的花粉（ ）（胚状体）（愈伤组织）（ ）丛芽生根移栽3胚状体的结构及其发育过程与种子相似，所以把胚状体到从芽的过程称为 ，而把从愈伤组织到从芽的过程称为 。 5影响花粉植株的主要因素： 和 等。6材料的选择：从花药来看，应当选择 的花药；从花粉来看，应当选择 的花粉；从花蕾来看，应当选择 的花蕾。7选择花药时一般通过 确定花粉发育时期，此时需要对花粉细胞核进行染色，最常用的染色剂是 和 焙花青 ，它们分别可以将细胞核染成 色和 色。8在使用焙花青铬钒溶液时，需要首先将花药用 处理20min。该试剂的配制方法是将 按体积比为 的比例混合均匀。9、

22、填写下列流程图：花蕾（ ）大约30s（ ）清洗（ ）吸干水分（ ）24min（ ）冲洗10剥取花药：消毒后的花蕾，要在 条件下除去花萼、花瓣。11接种花药：剥取的花药要立刻接种到 上。每个培养瓶接种 个花药。12培养：花药培养利用的培养基是 培养基，pH为 ，温度为 ，幼苗形成之前（需要、不需要）光照。13培养2030d后，花药开裂，长出 或释放出 。前者还要转移到 上进行分化培养成再生植株；后者要尽快 并转移到新的培养基上。14通过愈伤组织形成的植株，常常会出现 的变化，因而需要鉴定和筛选。专题四 酶的应用与研究一、果胶与果胶酶 1果胶  （1）作用：果胶是植物

23、_和_的主要组成成分 （2）成分：由_聚合而成的一种高分子化合物。 （3）特点：_ ，影响果汁的出汁率和澄清度 2果胶酶 （1）作用：瓦解植物的细胞壁和胞间层，提高果汁的出汁率和澄清度。 （2） 组成：果胶酶是分解果胶的一类酶总称，包括_等。 3、酶的活性与影响酶活性的因素 （1）酶的活性：酶催化一定化学反应的能力。 （2）酶活性的高低可用在一定的条件下，酶所催化的某一化学反应的_来表示，即单位时间内、单位体积中_或_来表示。 （3）影响酶活性的因素包括：_、_和_等。（4）实验中的变量包括：_

24、、_、_；实验应遵循的原则：_、_、_。二、探讨加酶洗衣粉的洗涤效果1酶绝大多数是蛋白质酶，少数为_；酶具有生物_；酶具有_性、_性的特点，但易_ 、 _、表面活性剂等因素的影响。2加酶洗衣粉是指含 的洗衣粉，目前常用的酶制剂有 、 、淀粉酶和纤维素酶四类。3脂肪酶可以将脂肪分解成 和 ，蛋白酶可以将蛋白质分解成 ，然后在 作用下分解成氨基酸。三、酵母细胞的固定化（一）、固定化酶的应用实例高果糖浆是指 能将葡萄糖转化为果糖的酶是 。使用固定化酶技术，将这种酶固定在一种 上，再将这些酶颗粒装到一个 内，柱子底端装上分布着许多小孔的 。酶颗粒 ，而 。生产过程中，将葡萄糖溶液从反应柱的上端注入，使

25、葡萄糖溶液流过反应柱，与 接触，转化成果糖，从反应柱的下端流出。反应柱能连续使用半年，大大降低了生产成本，提高了果糖的产量和质量。（二）、固定化细胞技术固定化酶和固定化细胞是利用 或 方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包括 、 和 法。一般来说，酶更适合采用 和 法固定，而细胞多采用 法固定化。这是因为细胞个大，而酶分子很小；个大的难以被 或 ，而个小的酶容易从 中漏出。包埋法法固定化细胞即将微生物细胞 包埋在不溶于水的 中。常用的载体有 、 、 、 和 等。专题五 DNA和蛋白质技术一、DNA的粗提取与鉴定1提取DNA的方法提取生物大分子的基本思路是 。对于DNA的粗提取而言，就是要利用

26、 、 等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。1）DNA的溶解性 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的 中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使 充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。请绘制曲线图 ：此外，DNA不溶于 溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步的分离。2）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶能水解 ，但是对 没有影响。大多数蛋白质不能忍受6080oC的高温，而DNA在 以上才会变性。洗涤剂能够瓦解 ，但对DNA没有影响。3）DNA的鉴定 在 条件下，DNA遇 会被染成 色，因此二苯胺可以作为鉴定D

27、NA的试剂。2实验设计1）实验材料的选取 凡是含有 的生物材料都可以考虑，但是使用 的生物组织，成功的可能性更大。在下面的生物材料中选取适合的实验材料：鱼卵、猪肝、菜花（花椰菜）、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基的大肠杆菌思考：哺乳动物的红细胞的特点？2）破碎细胞，获取含DNA的滤液 动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的 ，同时用 搅拌，过滤后收集滤液即可。如果实验材料是植物细胞，需要先用 溶解细胞膜。例如，提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的 和 ，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。思考：为什么加入蒸馏水能使鸡血

28、细胞破裂？ 加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响? 此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ 3）去除滤液中的杂质 阅读课本的三个方案。思考：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？方案二与方案三的原理有什么不同？4）DNA的析出与鉴定 将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积 、冷却的 ，静置 ，溶液中会出现 ，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒 搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为 的NaCl溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml的 。混合均匀后，

29、将试管置于 中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变 。3操作提示以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g ，防止 。加入洗涤剂后，动作要 、 ，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤地操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要 ，以免 ，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。二苯胺试剂要 ，否则会影响鉴定的效果。4结果分析与评价二、多聚酶链式反应扩增DNA片段1、 蛋白质的提取和分离蛋白质的提取分离一般分为四步： 、 、 、 。 2、 样品处理（1）红细胞的洗涤：洗涤的目的是： ，采集的血样药及时采用 分离红细胞，然后用胶头吸管吸上层透明的 ，将

30、下层暗红色的 倒入烧杯中，再加入 ，缓慢搅拌 ，低速短时间离心，如此重复洗涤三次直到 ，表面红细胞已洗干净。（2）血红蛋白的释放：在 和 的作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白（3）分离血红蛋白溶液：将搅拌好的混合溶液离心后，试管中的液体分4层，第1层为无色透明的 ，第2层为白色薄层固体是 ，第3层为红色透明液体这是 ，第4层为其他杂质的暗红色沉淀。将试管中的液体用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。（4）透析：取1ml血红蛋白溶液装入 中，将透析袋放入盛有300ml 20mmol/L的 中，透析12h。透析可以去除样品中的 杂质或用于更换样品的 3、凝胶色

31、谱操作首先要制作 ；第二步是 ，因为 ，所以装柱前要根据色谱柱的体积计算所需要的凝胶量。在填充凝胶柱时，不得有 存在，避免降低分离效果；第三步是 。（一） 血液的组成成分 水分 无机盐、葡萄糖等 血液 白细胞 血细胞 血小板 两个 链 红细胞 血红蛋白 两个 链 最多 四个 基团三、血红蛋白的提取和分离 凝胶色谱法（分配色谱法）：1、概念：根据被分离蛋白质的 ，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来分离蛋白质的有效方法。2、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程 ，移动速度 ，而 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 移动，路程 ，移动速度 ，相对分子质量

32、不同的蛋白质因此得以分离。3、具体过程：凝胶颗粒相对分子质量较小的蛋白质相对分子质量较大的蛋白质（1）（2）（3）（4）（5）BA多孔板A. 的蛋白质由于 作用进入凝胶颗粒内部而被滞留； 的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面，在了里之间迅速通过。B.（1） 混合物上柱；（2）洗脱开始， 的蛋白质扩散进入凝胶颗粒内； 的蛋白质被排阻于凝胶颗粒之外；（3） 的蛋白质被滞留； 的蛋白质被向下移动。（4） 不同的蛋白质分子完全分开；（5） 的蛋白质行程较短，已从 中洗脱出来， 的蛋白质还在行进中。 缓冲溶液：1、概念：在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作

33、用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。2、作用：能够抵制 的对溶液的 的影响，维持PH基本不变。3、缓冲溶液的配制通常由 种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的 就可以制得 使用的缓冲液。电泳：1、概念：指 发生迁移的过程。2、原理：许多重要的生物大分子，如 等都具有 在 下，这些基团会带上 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子 以及分子本身 、 的不同使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中各种分子的分离。3、分类： 电泳 电泳。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带静电荷的多少以及分子的大小等因素。为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入

34、。SDS能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是 。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于 。四 实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理粗分离纯化纯度鉴定1.样品处理 (1)红细胞的洗涤目的：去除 方法： 离心（速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果），然后用胶头吸管吸出上层透明的 ，将下层 的红细胞液体倒入 再加入用 的 质量分数为0.9的氯化钠溶液洗涤低速离心（低速短时间）重复4、5步骤 次，直至上清液中已没有 ，表明洗涤干