黄连中盐酸小檗碱的水提工艺研究

1、第29卷第3期CHINESE中华中OF医药学刊MEDICINEVol29No3Mar20112011年3月ARCHIVESTRADITIONALCHINESE黄连中盐酸小檗碱的水提工艺研究黄家卫，盛振华（浙江中医药大学药学院，浙江杭州310053）要：目的：优选黄连中盐酸小檗碱的最佳提取工艺条件。方法：采用正交试验设计，以盐酸小檗碱的含量为考察指标，考察加水倍量、提取次数和提取时间3因素对提取结果的影响。结果：盐酸小檗碱的最佳提取工艺摘提取时间为1h。结论：该优化提取工艺稳定可行，重现性好，可用于黄连中为加药材12倍量的水回流提取1次，小檗碱的提取。关键词：黄连；盐酸小檗碱；提取工艺中图分类号

2、：R2842文献标识码：A文章编号：16737717（2011）03052803StudyonAqueousExtractionofBerberineFromFranchHUANGJia-wei，SHENGZhen-hua（CollegeofPharmacy，ZhejiangChineseMedicalUniversity，Hangzhou310053，Zhejiang，China）Abstract：Objective：TostudytheoptimalprocessoftheextractionofberberinefromCoptischinensisFranchMeth-ods：Orth

3、ogonaldesignwasusedforstudyingtheeffectofwatervolume，timesofextraction，extractiontimeResult：TheoptimumconditionfortheextractionofCoptischinensisFranchwasextracted1timesby12foldofwater，refluxing1hConclusion：Thisextractionprocessissteady，feasibleandreproducible，andcanbeusedforextractionofberberinefrom

4、CoptischinensisFranchKeywords：CoptischinensisFranch；Berberine；Extractio黄连为毛茛科植物黄连CoptischinensisFranch、三角叶黄连CoptisdeltoideaCYChengetHsiao或云连Coptisteeta1Wall的干燥根茎，具有清热燥湿，泻火解毒等功效，其中公司）；12试药盐酸小檗碱对照品（由中国药品生物制品检定所提供，批号为07139906），乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯其余试剂均为分析纯。黄连购于浙江中医药大学中药水，饮片厂并经中药资源教研室俞冰副教授鉴定为毛莨科植物黄连Coptischin

5、ensisFranch。221方法与结果色谱条件与系统适应性试验5m）；流色谱柱：HypersilBDSC18（250mm×46mm，主要有效成分是以小檗碱为代表的季铵型生物碱抗病毒、抗炎、抗菌、降血糖及免疫调节等作用32，具有，提。有关黄45连及其制剂中盐酸小檗碱的提取和测定已有报道取时一般采用甲醇、氯仿、乙醇等有机溶剂，但存在溶剂用量大，成本高，安全方面等问题。对于盐酸小檗碱含量的测定时，则一般采用薄层扫描法法76、荧光分光光度法等方，但上述两种方法操作繁琐，影响因素多，准确性较差。故本文根据盐酸小檗碱为季铵碱，易溶于水，设计以水溶剂的提取方法，采用正交实验设计，以HPLC法测定

6、盐酸筛选黄连中盐酸小檗碱的水提工艺，为其进小檗碱的含量，一步的研究提供参考。中华中医药528学刊111仪器与试药仪器LumtechK501高效液相色谱仪（绿绵安特分析系统LumtechK2501紫外检测器，EastChrom色装备有限公司），谱工作站；SartoriusBS110s分析天平（北京赛多利天平有限收稿日期：20100920基金项目：浙江省教育厅资助项目（20071129）作者简介：黄家卫（1961），男，浙江杭州人，副教授，研究方向：中药及天然有效成分的研究与开发。002moL·L1KH2PO4=3070，pH=30；流动相：乙腈1速：10mL·min；检测波长

7、：350nm柱温：30；进样量为10L，理论塔板数以盐酸小檗碱计算大于3000，此条件下，样品中盐酸小檗碱的与相邻峰的分离度大于15，色谱图见图1。22对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品145mg，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得浓度为0145mg·mL1的对照品溶液，摇匀，用045m的滤膜过滤，即得。23供试品溶液的制备2试验条件进行精密称取黄连药材5g，分别根据表1、加水回流提取，趁热过滤，转移至250mL量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度。从250mL量瓶，取滤液05mL，置25mL量瓶8第29卷第3期CHINESE中华中OF医药学刊MEDICINEVol29

8、No3Mar20112011年3月ARCHIVESTRADITIONALCHINESEABA盐酸小檗碱标准品图B黄连样品图1盐酸小檗碱图1盐酸小檗碱高效液相色谱图中，加盐酸甲醇=1100混合溶液稀释，60水浴温浸15min，冷却至室温，加盐酸甲醇=1：100混合溶液稀释至刻度，摇匀，045m微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。24线性关系的考察精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液1mL，稀释成浓度为145000、72500、36250、18125、90625、4531g·mL1的系列梯度对照品溶液，按照上述“21”色谱条件，各精密吸取10L注入液相色谱仪，记录峰面积。对峰面积Y和进样量X（g）进行

9、线性回归，得到盐酸小檗碱的回归方程为：Y=3705100X+65515，r=09996，结果表明盐酸小檗碱在004531450g浓度范围内与峰面积具有良好线性关系。25提取工艺研究251因素水平表以盐酸小檗碱的含量为考察指标，采用正交试验对盐酸小檗碱提取的加水倍量，提取次数，提取时间等因素进行探讨，因素水平见表1。表1因素水平表水平因素加水倍量A（倍）提取次数B（次）提取时间C（h）1511282153123252试验方法及数据将制备得各供试品液，按照上述21”项下色谱条件，各进样10L，记录色谱图，测定盐酸小檗碱的含量，结果见表2。表2正交试验表及结果试验号因素ABCD盐酸小糪碱量/%111

10、112840212223037313333320421233487522314009623123742731323642832133954933213797K1919799691053510646K211237109991032110421K3113931085881097110761R2196103106500340SS3004062502190060253方差分析将正交实验结果进行方差分析，结果见表3。表3方差分析表误差来源SSfSFP*A30032150250222005B06252031310457005C0219201103666005误差00600030F005（2，2）=19；F

11、001（2，2）=99。由表2中极差R值大小显示，各因素作用主次为ABC，即加水倍量提取次数提取时间，最佳工艺应为A3B2C3。经方差分析（表3）可知：A因素具有显著性意义（P005），以A3为佳，B、C两因素的影响无显著性意义（P005），故在实验范围内，考虑实际生产成本，最佳优选组合条件为A3B1C1，即药材加12倍量水，提取1次，提取1h。26验证性实验按照上述最佳提取工艺进行验证试验，平行提取3次，测得盐酸小糪碱的平均得率为416%（高于正交表中9次试验的结果），RSD为151%。表明该提取工艺能较好地反映黄连中盐酸小檗碱的提取条件。27精密度试验精密吸取对照品溶液10L，连续进样6次

12、，测定盐酸小檗碱的峰面积的RSD为034%，表明精密度良好。28稳定性试验取供试品溶液在0、2、4、6、8、12h分别进样10L，记录峰面积，结果盐酸小檗碱面积值的RSD为249%，可见供试品溶液在12h内基本稳定。29加样回收实验称取6份已知含量的黄连药材，精密加入适量盐酸小檗碱对照品溶液。按“23”项下方法制备溶液，按上述色谱分析条件进样，测定，计算回收率，结果平均回收率为10005%，RSD为178%。3小结与讨论（1）黄连中的小檗碱一般以季铵型生物碱的状态存在，可以离子化呈强碱性，能溶于水。本实验中黄连的小檗中华中医药529学刊“第29卷第3期CHINESE中华中OF医药学刊MEDIC

13、INEVol29No3Mar20112011年3月ARCHIVESTRADITIONALCHINESE粗针治疗血管性痴呆ADLR评价11张海峰，宣丽华，侯12群，张俊峰（1浙江省中医院针灸科，浙江杭州310006；2浙江中医药大学2008级硕士研究生，浙江杭州310053）要：目的：观察粗针治疗血管性痴呆的疗效。方法：运用粗针从身柱穴沿督脉向下平刺，治疗血管性痴呆并运用日常生活能力量表（ADLR）评分评价。结果：与治疗前评分组内比较，粗针并与口服吡拉西坦组对照，摘60天及180天回访时，组在治疗30天、均有统计学意义：对照组在治疗30天时无统计学意义，治疗60天及18060天及180天回访时组

14、间评分比较均有统计学意义。说明粗天回访时有统计学意义。组间比较，在治疗30天、针和吡拉西坦治疗均有效，粗针治疗优于吡拉西坦。结论：粗针可明显改善血管性痴呆的日常生活能力量表评分，具有积极的治疗血管性痴呆的作用。关键词：粗针；身柱穴；血管性痴呆中图分类号：R246文献标识码：B文章编号：16737717（2011）03053002EvaluationwithADLRonVascularDementiaTreatedwithThickNeedlesZHANGHai-feng1，XUANLi-hua1，HOUQun1，ZHANGJun-feng2（1DepartmentofAcupuncture，Z

15、hejiangHospitalofChineseMedicine，Hangzhou310006，Zhejiang，China；2DepartmentofAcupunctureandMassage，ZhejiangChineseMedicalUniversity，Hangzhou310053，Zhejiang，China）Abstract：Objective：ObservatetheefficacyofVascularDementiaTreatingbythickneedlesMethods：TreatingVascu-comparedwithtakingPiracetamlarDementia

16、withhorizontalprickfromShenzhupointalongDuchannelbythickneedles，Tablets，andcommentedthroughthescoleofADLRResults：Comparingtotheprethreatment，therewasstatisticalsig-nificancewhenthethickneedlesgroupwastreatedfor30d、60dandvisitedonthe180thday，whiletherewasnostatisti-calsignificancewhentreatedfor30dbut

17、statisticalsignificancefor60dandvisitedonthe180thdayinthecontrolgroup；Comparingbetweenthe2groups，therewerestatisticallysignificantdifferenceswhentreatedfor30d、60dandvisitedonthe180thdayItshowedthatboththethickneedlestherapyandtakingPiracetamTabletsareeffectiveintreatingVascularbuttheformerseemedbett

18、erConclusion：ThethickneedlestherapycanobviouslyimproveADLRscoreofDementia，VascularDementiaandhasthepositivetreatmentfunctionKeywords：thickneedle；shenzhupoint；VascularDementia碱的含量以盐酸小檗碱计，将小檗碱转化为盐酸小檗碱进行水为溶剂的提取工艺研究。（2）实验中考察了多种流动相条件910：（1）乙腈磷酸缓冲盐（2080）；（2）乙腈04%磷酸（1882）；（3）甲醇水三乙胺（406001），但结果发现盐酸小檗碱1峰未能达到较好的分离效果，后采用乙腈002moL·LKH2PO4流动相后盐酸小檗碱的分离度有所改善，改变流动2匡海学新世纪全国高等中医药规划教材中药化学M北2003京：中国中医药出版社，3崔学军小檗碱的药理学研究进展及临床新用途J时珍国2006，17（7）：1