畜禽血液和病料采集技术

1、第一章 畜禽血液和病料采集技术第一节 畜禽血液采集技术一、要求:1、所有采血用具均应事先以消毒、干燥处理;2、采血部位要进行剪毛、清拭并按常规进行消毒(先碘酊后酒 精。3、怀疑传染病时,采血过程要防止到处流散,检后的残余血液 及所用器皿要进行消毒处理。4、需抗凝的要加入抗凝剂。常用的抗凝剂有:双草酸盐抗凝剂:草酸钾 0.6克;草酸铵 1.2克;蒸馏水 加至 10 0毫升; 溶解后, 吸取 0.5毫升, 加入供采血用的试管或小瓶中, 置干燥箱内 (温度不能超过 80 , 烘干备用 (实际含草酸盐 1 0毫克,可供 5毫升全血抗凝用枸橼酸钠 6mg 可使 1ml 血液不凝固,或配成 3.8%的溶液

2、。 适用于血钙的测定和血沉测定时的抗凝。乙二胺四乙酸二钠(EDTA 二钠每 10毫克可使 5毫升全血 抗凝;或配成 10%的溶液,每 2滴可使 5毫升全血抗凝。 肝素对血中有机成分和无机成分测定均无影响,多用于科研。 常用肝素钠配成 1ml 内含 1mg (0.1%的水溶液,取 0.1ml 分装 于小试管或小青霉素瓶中,在 80以下烤干后备用,可使 51 0ml 血液不凝固。5、需分离血清的血液(不抗凝,试管要静置、斜放,便于血 清晰出。6、注意安全。二、家禽血样的采集(一 鸡翅内侧静脉采血1、器械准备:酒精棉球;小试管或细塑料管,试管架;镊子; 配 57#针尖的一次性注射器。2、保定:手提保

3、定。助手一手抓住两只鸡腿,一手抓鸡翅根部, 以拇指按压静脉管。3、部位确定:鸡翅内侧腋静脉,肉眼可见。4、操作:助手抓住鸡翅根部,以拇指按压静脉管,使之充盈。 术者左手大拇指捏住鸡翅内侧, 余四指捏住鸡翅外侧, 展平鸡翅, 右手持针,沿血管方向,于血管傍先刺入皮下,然后再斜刺向血 管, 抽取血液 (此法避免拔针后出血过多 。 也可直接刺向血管, 抽取血液(采用此法,拔针后要用干棉球按压数分钟止血。或 者将鸡翅摆平,直接先将静脉用针刺破,待血液流出后,用细塑 料管利用虹吸的原理吸取血液,事毕,用火将细塑料管一头封 闭。(二 鸡心脏采血方法 1操作要点:鸡左侧向上横卧保定,拔去胸上部部分羽毛,寻找

4、由胸骨走向肩胛的皮下大静脉, 心脏约在该静脉的分支下侧, 有时 用食指可摸到心脏跳动。用酒精消毒后,以碘酊标记部位。针头 (7#刺入时,如触及胸骨可稍拔出,使针头稍向右偏,避开 胸骨,再将针头向里刺入,边刺边抽动活塞,若刺入心脏,便有 血液涌入注射器,术毕,局部消毒。方法 2操作要点:鸡仰卧保定, 鸡头部朝向术者, 拔去胸上部少许羽毛, 用手指在胸骨上方、嗉囊下方摸得一凹窝,右手持针(7#, 自胸骨上方凹窝斜向前下方心脏方向(鸡的左侧、术者的右侧 刺入,边刺边抽动活塞,若刺入心脏,便有血液涌入注射器,术 毕,局部消毒。注意:此法(含方法 1、 2采血后,多会引起鸡只死亡,仅适 用于淘汰鸡的采血

5、。(三 鸡头部静脉窦采血1、器械准备:酒精或碘酊棉球;小试管,试管架;镊子;配 5 -7#短针尖的一次性注射器。2、保定:助手一手抓鸡的两只腿,一手抓鸡的两翅,使头部向 上。术者左手食指和中指夹住鸡喙,大拇指压住颈上部,以此固 定头部。3、部位确定:鸡头后部,枕骨大孔为刺入点。4、操作:鸡只如上述方法确切保定后,枕骨大孔部少许拔毛, 消毒,术者右手持针,自枕骨大孔进针,针头对准喙尖,约与颈椎纵轴成 45°角,刺入约 0.50.8cm (视鸡只大小,刺入静脉 窦后,针头感觉无阻力,抽取血液,术毕消毒。注意:此法采血后, 亦会引起鸡只死亡, 故适用于淘汰鸡的采血。 苗鸡采血亦可用此法。第

6、二节畜禽病料采集技术一、样品采集的原则采集检测样品是诊断检测工作的重要内容。采样的时机是否适 宜, 样品是否具有代表性, 样品处理、 保存、 运送是否合适及时, 与检验结果的准确性、可靠性关系极大。采集样品时,需要符合 以下规定:1、适时采样。根据检测要求及检测对象和检验项目的不同,选 择适当的采样时机十分重要。 样品是有时间要求的, 应严格按规 定时间采样, 有临床症状需要作病原分离的, 样品必须在病初的 发热期或症状典型时采样,病死的动物,应立即采样。2、合理采样。根据诊断检测的要求,须严格按照规定采集各种 足够数量的样品外, 不同疫病的需检样品各异, 应按可能的疫病 侧重采样。对未能确定

7、为何种疫病的,应全面采样。3、典型采样。选取未经药物治疗、症状最典型或病变最明显的 样品,如有并发症,还应兼顾采样。4、无菌采样。采集检验样品除供病理组织学检验外还供病原学 及血清学检验, 供病原学及血清学检验的样品, 必须无菌操作采样,采样用具、容器均须无菌处理,尸体剖检需采集样品的,先 采样后检查,以免人为污染样品。5、适量采样。采集样品的数量要满足诊断检测的需要,并留有 余地,以备必要时复检使用。6、样品处理。采集的样品应一种样品一个容器,立即密封,根 据样品的性状检验要求的不同, 作暂时的冷藏、 冷冻或其它处理。 供病毒学检验的样品,数小时内要送到实验室,只作冷藏处理, 超过数小时的要

8、冷冻处理,(冻结方法:可将样品放入 -30冰 箱内冻结, 然后再装入有大小冰块或干冰的冷藏瓶 (箱 内运送, 亦可将装入样品的容器放入隔热保温瓶内, 再放入冰块, 然后按 100g冰块加入食盐约 35克,立即将隔热保温瓶瓶口塞紧。瓶 内温度可达 -21左右。供细菌学检验或血清学检验的样品, 冷藏送实验室即可。 装样品的容器应贴上标签, 标签要防止因冻 结而脱落,标签标明采集的时间、地点、号码和样品名称,并附 上发病、死亡等相关资料,尽快送实验室。7、安全采样。既要保护采样人员,以要防止病原外泄,还要防 止样品受到污染。8、样品包装。主要是密闭,防止样品损坏、污染和外泄等意外 发生。迅速送检。应

9、尽快送实验室进行检测,延误送检时间,会影响到 检测质量和结果的可靠性。二、血液样品的采集1、病毒检验用血液样品。应在动物发病初体温升高期采集。血 液样品必须是脱纤血或是抗凝血。抗凝剂可选用肝素或 EDTA , 枸缘酸钠对病毒有轻微毒性,一般不宜采用。采血前,在真空采 血管或其它容器内按每毫升血液加入 0.1%肝素 1ml 或 EDTA20 mg 。采集的血液立即与抗凝剂充分混合,防止凝固。采脱纤血 时,先在容器内加入适量小玻璃珠,加入血液后,反复振荡,以 便脱去血液纤维。 采集的血液经密封后贴上标签, 以冷藏状态立 即送实验室。 必要时, 可在血液中按每毫升加入青霉素和链霉素 各 500100

10、0IU ,以抑制血源性可采血中污染的细菌。2、细菌检验样品。采血应在动物发病初体温升高或发病期,未 经药物治疗期间采集。血液应脱纤或加肝素抗凝剂 (或 EDTA 或 枸缘酸钠 ,但不可加入抗生素。采集的血液经密封后贴上标签, 以冷藏状态立即送实验室,否则须置 4冰箱内暂时保存,但时 间不宜过久,以免溶血。3、血清学检验样品。用作血清学检验的样品不加抗凝剂或脱纤 处理。为保障血清质量,一般情况下,空腹采血较好。采集的血 液贴上标签, 室温静置待凝固后送实验室, 并尽快将自然析出的 血清或经离心分离出的血清吸出, 按需要分装, 再贴上标签冷藏 保存备检。较长时间才检验的,应冻结保存,但不能反复冻融

11、, 否则抗体效价下降。作血清学检验的血液,在采血、运送、分离 血清过程中,应避免溶血,以免影响检验结果。采集双份血清检 测比较抗体效价变化的, 第一份血清采于发病的初期并作冻结保存,第二份血清采于第一份血清后 34周,双份血清同时送实 验室。 4、 寄生虫检验样品。因不同的血液寄生虫在血液中出现 的时机及部位各不相同,因此需要根据各种血液寄生虫病的特 点,取相应时机及部位的血液制成血涂片,送实验室。三、组织样品的采集组织样品一般由扑杀动物或病死尸体剖中采集。从尸体采样时, 先剥去动物胸腹部皮肤, 以无菌器械将腹腔打开, 根据检验目的 和生前疫病的初步诊断,无菌采集不同的组织。1、病毒检验样品。

12、作病毒检验的组织,必须以无菌技术采集, 组织应分别放入灭菌的容器内并立即密封, 贴上标签, 放入冷藏 容器立即送实验室。如果时间较长,可作冻结状态运送,也可将 组织块浸泡在 PH7.4左右的乳汉液或磷酸缓冲肉汤保护液内, 并按每毫升保护液加入青霉素、链霉素各 1000IU ,然后放入冷 藏容器内送实验室。2、细菌检验样品。供细菌检验的组织样品,应新鲜并以无菌技 术采集。 如遇尸体已经腐败, 某些疫病的致病菌仍可采集于长骨 或肋骨, 从骨髓中分离细菌。 采集的所有组织分别放入灭菌的容 器内并立即密封,贴上标签,放入冷藏容器立即送实验室。 四、粪便样品的采集1、病毒检验样品。分离病毒的粪便必须新鲜

13、。少量采集时,以 灭菌的棉拭子从直肠深处或泄殖腔粘膜上蘸取粪便, 并立即投入 灭菌的试管内密封,或在试管内加入少量 PH7.4的保护液再密封。贴上标签冷藏送实验室。2、细菌检验样品。作细菌检验的粪便,最好在动物使用抗菌药 物之前, 从直肠或泄殖腔粘膜上采集, 采样方法与供病毒检验的 相同。 可投入无菌缓冲盐水或肉汤的指形管内, 贴上标签冷藏送 实验室。3、寄生虫检验样品。粪便样品应选取新排出的或直接从直肠内 采得, 以保持虫体或虫体节片及虫卵的固有形态, 一般寄生虫检 验的粪便用量较多。采得的粪便以冷藏不冻结状态送实验室。第三节 几种畜禽疫病的样品采集一、禽流感的样品采集、保存和运输病毒主要在

14、呼吸道粘膜细胞内增殖。(一 病禽1、至少从 5只濒死禽采集样品。样品包括:泄殖腔拭子和气管 拭子 (置于缓冲液中 各 5个 (小珍禽可采集新鲜粪便 ;气管和肺 的混样 5个,肠管及内容物的混样 5个;肝、脾、肾和脑等组织 样品 (不能混样 各 5个。采集方法:1 泄殖腔棉拭子:将棉拭子插入肛门并旋转,使粪便 沾在拭子上, 后放在运输缓冲液中。 2 气管棉拭子:活鸡采样时, 将棉拭子插入活鸡的气管内,轻轻擦拭气管壁并放入缓冲液中。 死亡动物采气管样品时, 可在肺和气管离体情况下进行采集, 应 将棉拭子插入较深部位用力擦拭, 并按上述方法将棉拭子放在运输缓冲液中。 3 粪便样品:可从活禽市场采取新

15、鲜粪便,用棉拭 子沾取粪便,并将采好的样品放在运输缓冲液中。2、分别采集至少 10个病鸡的血样 (急性发病期血清 。采集 10只病禽的血样,使用一次性采血器,心脏或翅静脉采血,每只禽 采血样 2ml 3ml ,经离心或自然析出血清后,将血清移到指形 管中。封好口,贴好标签。不同禽只的血样不能混合。(二 病死禽无发病禽时,可从死亡不久的病禽采样,采样要求同病禽。 棉拭子单独放入容器, 容器中盛放含有抗菌素的 PH 值为 7.07. 4的 PBS 液。抗生素的选择视当地情况而定,组织和气管拭子 悬液中加入青霉素 (20001U/mL 、 链霉素 (2 mg /mL 、 庆大霉 素 (50g/mL 、制霉菌素 (100001U/mL 。但粪便和泄殖腔拭 子所用的抗生素浓度应