固相萃取的步骤

1、固相萃取的步骤 2-1所示，一个完整的固相萃取包括柱或盘的预处理、加样、洗去干扰杂质、分析物洗脱及收集四个步骤。在加样和洗去干扰杂质两步中，要尽可能使分析物彻低吸附在填料上，即不发生穿透现象；而在分析物洗脱及收集过程中，则要使分析物尽可能被彻低解脱，即不发生残留，但上述状况并不是总能达到。要使固相萃取尽可能按设想举行，就要按照被测物及样品基体的性质，挑选合适的吸附剂及洗脱溶剂，挑选时可参照高效液相色谱的有关理论。 图2-1 固相萃取的基本步骤 一、固相萃取柱或盘的预处理 在固定相吸附分析物前，吸附剂必需经过适当的预处理(conditioning)。经过处理，一方面可以除去吸附剂中可能存在的杂质

2、，削减污染；另一方面可使吸附剂溶剂化，从而与样品溶液相匹配，这样在加样吸附时，样品溶液就可与吸附剂表面紧密接触，以保证获得高的萃取效率和大的穿透体积。 不同填料的固相萃取柱或盘，其预处理的办法有所不同。常用的反相c18固相萃取柱的预处理办法普通是：先用适量的通过萃取柱以活化该萃取剂，未经处理的萃取剂c18的长链处于卷曲状态，经正己烷处理后，c18的长链处于舒展状态，呈毛刷状，有利于它与分析物的紧密接触，己活化的萃取剂呈近透亮状态；此时再将适量通过萃取柱以置换正己烷并弥漫萃取剂的微孔，最后用水或缓冲溶液过柱顶替滞留在柱中的甲醇，这样可保证憎水性的萃取剂表面与样品水溶液有良好的接触，提高萃取效率。

3、 有机高聚物型的固相萃取剂的预处理则相对容易，普通可用少量甲醇将其憎水性表面润湿即可，有时也可将此步省略。表面经亲水性基团修饰的有机高聚物萃取剂，不经预处理就可用于样品水溶液的固相萃取。 二、加样或吸附 加样或吸附(loading or adsorption)即用泵或其他适当装置以正压推进或负压抽吸使液体试样以适当流速通过固相萃取柱或盘，在此过程中，分析物被吸附在吸附剂上。为了保证获得高的吸附率，防止分析物的流失，应注重以下几方面的事项： 用合适的溶剂稀释试样，即将样品溶液的溶剂强度调整到合适的范围。如以反相机理固相萃取水样有机物时，以水或水基缓冲溶液为溶剂，其中有机溶剂量不应超过1000(体

4、积分数)。 适当削减试样体积或适当增强固相萃取柱中的填料。加到萃取柱或盘上的试样量的大小与填料的类型、填料的数量、组分的保留性质、试样中分析物及基体组分的浓度等因素有关。固相萃取柱选定后，应先用前沿色谱法作出穿透曲线，从而得到穿透体积。穿透体积的大小不但与试样中分析物的浓度有关，而且与试样基体中竞争性干扰组分的浓度有关。因此，在举行穿透试验时，所挑选的分析物浓度应为实际样品中预期的最大浓度。得到了穿透体积，就得到了该萃取体系可萃取的最大样品溶液体积，因此最后选定的试样体积应当小于穿透体积。 加样萃取的流速应当适当。加样时采纳的合理流速取决于萃取柱或盘的几何外形和萃取填料粒径的大小。采纳小颗粒的

5、填料，萃取效率高，可用法短的柱子和高的流速；采纳较大粒径填料，萃取效率低，则需用法较长的柱子和较低的流速。普通而言，采纳大约10um粒径的固相萃取填料时，用法的柱长应小于10mm，这样即使流速较大，柱两端的反压也不至于太大；采纳粒径为50100um的填料时，则应使柱长大于50mm，并用法较低的流速以获得有效的传质。一个固相萃取体系的合适流速可用下面的容易试验加以确定：配制一深色溶液，让该溶液以一定流速通过萃取柱，假如得到一宽的色谱带，则解释该流速太大，应适当降低。 还应指出的是，在囫囵加样萃取过程中，应尽量避开柱子流干而进入气泡。否则，进入的气泡将会影响样品溶液与吸附剂之间的紧密接触，影响萃取

6、效率。假如不慎使柱流干进入了气泡，最好重新活化柱子后再开头试验。 三、干扰杂质的洗涤 于扰杂质的洗涤(washing the packing)的目的是为了去除吸附在柱子上的少量基体干扰组分。合适的洗涤液应当既能将基体干扰组分尽可能除净，又不会导致被吸附的分析物流失口普通的洗涤液是合适的中等强度的混合溶剂，对反相萃取体系而言，洗涤液是含合适浓度有机溶剂的水或缓冲溶液(有机溶剂比例应大于上样溶液，而小于洗脱剂溶液)。为了确定洗涤液的最佳浓度和体积，可在柱上加入一定量的试样，用510倍固相萃取柱床体积的溶剂洗脱，收集分析流出液，得到洗涤液对分析物信号的洗涤轮廓图。转变洗涤液的组成浓度即溶剂强度，得到

7、不同的洗涤轮廓图，按照该图形确定洗涤液的浓度和体积。 四、洗脱和分析物的收集 洗脱和分析物的收集(elution)即用完可能少量的合适溶剂将被吸附剂吸附的分析物洗脱下来，使其重新进入溶液，再用仪器测定。为了尽可能彻低地将分析物洗脱，并使比分析物吸附更强的杂质尽可能多地留在固相萃取柱上，关键是挑选合适强度的洗脱溶剂。太强的洗脱溶剂既可将分析物洗脱下来，又会将杂质洗脱下来，干扰后续测定。有时为了得到整洁的洗脱溶液，宁愿挑选较弱的溶剂，用法较大体积的溶剂将分析物洗脱后，再用氮气将该溶剂吹干，然后再用合适的办法测定。为了挑选合适的洗脱剂强度和体积，可加一定量的试样于固相萃取柱上，然后再转变洗脱剂的强度和体积，测定不同洗脱条件下分析物的回收率加以比较，选出最抱负的洗脱剂及其用量。在反相机理的固相萃取体系中洗脱剂普通选用合适的有机溶剂，即选用分析物的容量因子k临近于0的有机溶剂。 洗脱时还必需注重一点：洗脱前必需先将残留在柱中的少量试样水溶液用抽真空或吹入压缩空气