花青素的分离提纯测定实验具体方案_第1页
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花青素的分离提纯测定实验具体方案_第3页
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文档简介

1、花青素的提取、测定仪器材料试剂：仪器：旋转蒸发仪，真空泵，分光光度计，真空干燥箱，水浴锅，天平材料：新鲜的紫葡萄和青葡萄试剂：无水乙醇，盐酸，铁氰化钾，三氯乙酸，硫酸亚铁实验步骤一、花青素的提取：1、挑选新鲜的紫葡萄薄洗净晾干，分离出果肉、果皮、籽粒2、将分离晾干的紫色葡萄果皮，80下干燥1h。3、称取2g磨成粉末4、用含有1%盐酸的乙醇溶液浸提2次，合并提取液5、讲合并提取液进行抽滤6、60减压浓缩7、真空干燥8、得粗提取液2、提取条件的优化：p 水平A提取温度 /B乙醇浓度/%C提取时间/minD料液比/（g/ml）p 15050601:10p 26060901:20p 370701201

2、:30实验序号ABCD结果111112122231333421235223162312731328321393321K1K2K3Q确定最佳提取方案然后对果皮、果肉、籽粒进行提取，测定最佳提取部位。3、纯化纸层析法提纯1.取准备好的滤纸条（220cm），将其一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条，并在滤纸剪口上方折叠出一条直线，作为画滤液细线的基准线。2用毛细吸管沾少许滤液在折线上描绘45次，注意要画得匀、直、细，每次画完细线要等其自然变干后再画第二根线。3在大试管中加入常用的展开剂有V(丁醇V(乙酸V(水=415,V(正丁醇V(2mol/LHCl=11,V(乙酸V(浓HCl

3、V(水=15382,1%盐酸,V(浓HClV(水=397等（即层析液）。然后将滤纸条固定于软木塞上，插入试管内，使窄端浸入溶剂中（色素点要略高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁），盖紧软木塞，直立于阴暗处进行层析。4.展开后剪下色斑,以酸化甲(乙醇洗涤、浓缩,即可得到样品。四、花青素的测定1.采用普鲁士蓝法测定花青素的还原能力。取一定浓度的样品溶液1 mL，加入磷酸盐缓冲液和1%K3Fe（CN）6各2.5 mL，混合均匀， 混合液50 保温20 min，快速冷却，加入10 %的三氯乙酸溶液2.5 mL，离心10 min。取上清液2.5 mL， 加入等量蒸馏水和0.1%的FeCl3 1mL，摇匀，10min后700nm下测定吸光值A700，以抗坏血酸为对照。2青素清除体外自由基能力测定。利用Fenton 反应产生羟自由基6。取2 mL PBS（磷酸盐缓冲液pH=7.4）， 依次加入20mmol/L EDTA和12mmol/L FeSO4混合溶液0.1mL，一定浓度的花青素溶液1 mL、100mmol/L H2O2 0.1mL，用磷酸盐缓冲液定容至5 mL，迅速混匀，置于37

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