分子生物学实验常用缓冲液的配制方法

1、本文档如对你有帮助，请帮忙下载支持!各种缓冲液的配制方法Na2HPO4-柠檬酸钠缓冲液PH0.2mol/LNa 2HPO (ml)0.1mol/L柠檬酸 钠(ml)PH0.2mol/LNa 2HPO4 (ml)0.1mol/L柠檬酸钠 (ml)2.20.419.65.210.729.282.41.2418.765.411.158.852.62.1817.825.611.608.402.83.1716.835.812.097.913.04.1115.896.012.637.373.24.9415.066.213.226.783.45.7014.306.413.856.153.66.4413.56

2、6.614.555.453.87.1012.906.815.454.554.07.7112.297.016.473.534.28.2811.727.217.392.614.48.8211.187.418.171.834.69.3510.657.618.731.274.89.8610.147.819.150.855.010.309.708.019.450.55Na2HP。2H2O,分子量=178.05 0.2mol/L 溶液含 35.61g/L柠檬酸.H2O,分子量=210.14 0.1mol/L 溶液含 21.01g/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液(0.1mol/L )PH0.1mol/L柠檬酸

3、(ml)0.1mol/L柠檬酸钠(ml)PH0.1mol/L柠檬酸 (ml)0.1mol/L柠檬酸钠 (ml)3.018.61.45.08.211.83.217.22.85.27.312.73.416.04.05.46.413.63.614.95.15.65.514.53.814.06.05.84.715.34.013.16.96.03.816.24.212.37.76.22.817.24.411.48.66.42.018.04.610.39.76.61.418.64.89.210.8柠檬酸.H2O,分子量=210.14 0.1mol/L 溶液含 21.01g/L 柠檬酸钠.2H2。，分子量=

4、294.12; 0.1mol/L溶液含29.4 g/L醋酸缓冲液(0.2mol/L, 18 C)PH0.2mol/LNaAC(ml)0.2mol/LHAC(ml)PH0.2mol/LNaAC(ml)0.2mol/LHAC(ml)3.60.759.254.85.904.103.81.208.805.07.003.004.01.808.205.27.902.104.22.657.355.48.601.404.43.706.305.69.100.904.64.905.105.89.400.60NaAC.3 H2O,分子量=136.090.2mol/L 溶液含 27.22g/L(1)醋酸盐溶液的配制：

5、醋酸醋酸钠缓冲液(pH3.6)取醋酸钠5.1g,加冰醋酸20ml,再加水稀释至250ml,即得。醋酸醋酸钠缓冲液(pH3.7)取无水醋酸钠20g,加水300ml溶解后，加澳酚蓝指示液1ml及冰醋酸6080ml,至溶液 从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000ml,即得。醋酸醋酸钠缓冲液(pH3.8)取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液 0.5ml,再加水稀释至1000ml,即得。醋酸醋酸钠缓冲液(pH4.5)取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀释至1000ml,即得。醋酸醋酸钠缓冲液(pH4.6)取醋酸钠5.4g,加水50ml

6、使溶解，用冰醋酸调节pH值至4.6,再加水稀释至100ml,即得。醋酸醋酸钠缓冲液(pH6.0)取醋酸钠54.6g,加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至 500ml,即得。用醋酸和醋酸钠配制的缓冲溶液的PH=PKa+lgC(NaAc)/C(HAc)(在此，C(HA印旨醋酸的浓度，C(NaAc)指醋酸钠的浓度，Ka是醋酸的解离常数 =1.8*10-5 (1.8乘10的-5次方)， PKa=-lgKa=4.75,将 PH=5.5代入，可得 C(NaAc)/C(HAc)=5.6通常我 们配制 时会使 C(HAc)=0.1mol/L ,或是 C(HAc)=0.2mol/L 等。若是配制 C

7、(HAc)=0.1mol/L ,则 C(NaAc)=0.56mol/L 称量醋酸钠固体质量为82*0.56=46克 量取冰醋酸体积为 0.1*1000/ 17.5=5.7mL。将称好的醋酸钠和量好的冰醋酸加入1000mL水中溶解、搅拌均匀即可。当然若想配制其它的浓度，也可照公式计算即可，通常缓冲溶液不能配的太稀，否则缓冲能力要下降，太浓的话又浪 费试剂。苯一甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液PH0.1mol/LNaOH(ml)0.2mol/L苯一甲酸氢钾(ml)加水至(ml)4.00.4025.00100.004.23.6525.00100.004.47.3525.00100.004.612.0025.

8、00100.004.817.5025.00100.005.023.6525.00100.005.229.7525.00100.005.435.2525.00100.005.639.7025.00100.005.843.1025.00100.006.045.4025.00100.006.247.0025.00100.000.2mol/L苯二甲酸氢钾溶液：称取在硫酸干燥器中干燥过24小时的苯二甲酸氢钾20.44g溶于水中，稀释至 500ml 0PH0.2mol/LNa 2HPO (ml)0.2mol/LNaH 2PO4 (ml)PH0.2mol/LNa 2HPO4 (ml)0.2mol/LNaH

9、2PO4 (ml)5.88.092.07.061.039.06.012.387.77.272.028.06.218.581.57.481.019.06.426.573.57.687.013.06.637.562.57.891.58.56.849.051.08.094.75.3Na2HPO .2 H2O，分子量=178.05, NaH2Pd . 2 H2O，分子量=156.03 , NaH2PO4 . H2O,分子量=138.03, Na2HPO .12 H2O,分子量=358.22 ,0.2mol/L 溶液含 35.61g/L0.2mol/L 溶液含 31.21g/L0.2mol/L 溶液含

10、27.6g/L0.2mol/L 溶液含 71.64g/L磷酸盐缓冲液（PB0配制方法0.01M PBSPBS (135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4 pH 7.2)PBS缓冲全夜(pH7.2 7.4): NaCl 137mmol/L , KCl 2.7mmol/L, Na2HPO4 4.3mmol/L , KH2PO4 1.4mmol/L称 7.9g NaCl, 0.2g KCl, 0.24g KH2PO4(or 1.44g Na2HPO4)和 1.8g K2HPO4,溶于 800 ml 蒸储 水中，用HCl调节溶液的p

11、H值至7.4,最后加蒸储水定容至1 L。保存于4c冰箱中即可。需要注意的是，通常所说的浓度0.01 M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非 Na离子或K离子的浓度，Na离子和K离子只是用来调节渗透压的。母液的配制：0.2M Na2HPO4 :称取 71.6g Na2HPO4-12H2O,溶于 1000ml 水0.2M NaH2PO4:称取 31.2g NaH2PO4-2H2O,溶于 1000ml 水各种浓度PB(pH=7.4)的配制：先配 0.2M PB (pH=7.4, 100ml):取 19ml 0.2mol/L 的 NaH2PO4, 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即

12、可。然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如：0.1M PB (PH=7.4):取 500ml 0.2M PB ,加水稀释至 1000ml 即可。0.01M PB (PH=7.4):取 50ml 0.2M PB,加水稀释至 1000ml 即可。0.02M PB (PH=7.4):取 100ml 0.2 M PB,加水稀释至 1000ml 即可。若需要 NaCl的话，加入 NaCl至0.9% (g/100ml)即可。另：其它各种另 PH值白0.2M PB (100ml)配方：pH0.2M NaH2PO4 (ml)0.2M Na2HPO4 (ml)5.793.56.55

13、.89285.990106.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.5本文档如对你有帮助，请帮忙下载支持！6.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419817.516847.613877.710.590.57.88.591.57.97938.05.394.70.01M磷酸盐缓冲液（PBSS配制方法称取 8g NaCl、0.2g KCl 1.44g Na2HPO4 和 0.24g KH2PO4,溶于 800ml 蒸储水中，用 H

14、Cl 调节 溶液的pH值至7.4,最后加蒸储水定容至 1L即可。在15lbf/in2（1034 X 105Pa）高压下蒸气灭 菌（至少20 分钟） ，保存存于室温或4冰箱中。需要注意的是，通常所说的浓度0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na 离子或 K 离子的浓度，Na 离子和 K 离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话，则需要在配置的时候分别加入100 u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒。PH7.67.47.27.0H2O1000100010001000NaCl8.58.58.58.5Na2HPO42.22.22.22.2NaH2PO40.10.20

15、.30.4根据经验来看，新鲜配置的PBS搅匀后其PH值约在7.2-7.4之间，可是在温度的影响下，尤其在夏天，其电离常数发生了改变，在经过昼夜的时间后，PH 值会明显改变（我亲自测过偏酸） 。所以做实验的同学可要注意了，PH 值可能会影响实验结果，甚至可能导致阴性。所以务必记得这个时候和天气，要加强实验条件控制问题。每次使用前最好用试纸测一下过夜了的PBG如果发生偏酸或偏碱，注意重新换新液。PBS缓冲液称取 NaCl 8g, KCl 0.2g, Na2HPO4?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g 溶于 900ml 双蒸水中，用盐 酸调pH值至7.4,加水定容至1L,常温保存备用

16、。PBST缓冲液取300川Tween-20加入PBS 100ml中，混匀后即刻使用。现用现配。如果是把所有固体加大十倍，配置为浓缩液，工作时候十倍稀释，那么， 在刚配好浓缩液时，PH 在 6.5 左右，明显偏酸。不能用盐酸调。虽然可以用氢氧化钠颗粒调，但是有更方便的 方法。十倍稀释以后，PH 自动升高到所需要的值。不需要其它任何处理。这个可以先取少量试一试，配好之后再测一次PH8.0的PBS配方详细1 . NaCl 137mmol/L， KCl 2.7mmol/L， Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L2 .向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

17、3 .滴加浓盐酸将pH值调节至8.0,然后加入去离子水将溶液定容至1 L。4 . Wj温Wj压火菌后，室温保存。注意：上述PBS Bufer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mMMgCl2。0.05mol/L PBS僦酸缓冲液 Phosphate Buffer Solution, PBS)勺配制：甲液：0.05mol/L Na2HPO4溶液：称取磷酸氢二钠 9.465g 7.099g,力口蒸 储水至1000ml ;乙液：0.05mol/L KH2P04溶液：称取磷酸二氢钾，9.07g 6.803g,加蒸储水至1000m1。将甲乙液分装在棕色瓶内，于4c冰箱中保

18、存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液，见下表：pH 甲液 ml 乙液 ml5 .292.597.55.595.095.05.9110.090.06.2420.080.06.4730.070.06.6440.060.06.8150.050.06.9860.040.07.1770.030.07.3880.020.07.7390.010.08.0495.05.0你要配制pH=6.8的PBS,可用甲、乙液各 50ml混合即可。硼酸缓冲液(0.2mol/L硼酸盐)PH0.05mol/L 硼砂 (ml)0.2mol/L 硼酸 (ml)PH0.05mol/L 硼砂 (ml)0.2mol

19、/L 硼酸 (ml)7.41.09.08.23.56.57.61.58.58.44.55.57.82.08.08.76.04.08.03.07.09.08.02.0硼砂 Na2B4O7.10H2O,分子量=381.43,0.05mol/L 溶液=0.2mol/L 硼砂含 19.07g/L硼酸，分子量=61.84,0.2mol/L溶液含12.37g/L硼砂易失去结晶水，必须在带塞得瓶中保存；硼砂溶液也可以用半中和的硼酸溶液代替盐酸-氯化钾缓冲液PH0.1mol/LHCl( ml)0.02mol/LKCl(ml)加水至(ml)PH0.1mol/LHCl( ml)0.02mol/LKCl (ml)加

20、水至(ml)1.194.562.701001.723.7638.101001.275.1012.451001.818.6840.601001.359.6820.151001.914.9842.501001.447.4026.301002.011.9044.051001.537.6431.201002.19.4645.031001.629.9035.001002.27.5246.25100苯二甲酸氢钾-盐酸缓冲液PH0.1mol/LH Cl (ml)0.02mol/L 苯一 甲酸氢钾(ml)加水至 (mi)PH0.1mol/LHCl (ml)0.02mol/L 苯一甲酸氢钾(ml)加水至 (mi)2.246.6025.001003.214.8025.001002.439.6025.001003.49.9525.001002.633.0025.001003.66.0025.001002.826.5025.001003.82.6525.001003.020.4025.001000.02mol/L苯二甲酸氢钾溶液：称取在硫酸干燥器中干燥过24小时额苯二甲酸氢钾 20.44g溶于水中，稀释至 500ml磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液PH0.1mol/LN aOH(