苹果的组织培养

1、苹果的组织培养苹果的组织培养是采用无菌培养技术,将来自优良植物的茎尖、腋芽、叶片、等器官以及他们的组织切片进行离体培养,使之在短期内获得大量遗传性一致的个体的方法.1973 年 Jones 等培育苹果砧木 M-26 和 M-9 的茎尖获得成功,之后美国的 Button 等利用此技术大量繁殖了英国东茂林试验站育成的苹果砧木 M-27,促进了其推广应用.我国在这方面也进行了大量工作,加速了苹果新品种的推广应用.另外,由于离体技术处理严格,所以很容易脱除昆虫、一般真菌病害和一些细菌病原及病毒,是复壮品种的有效措施.已成功脱除的病毒和病害有苹果褪绿叶斑病毒、花叶病病毒、轮纹病等.1 苹果矮化砧组织培养

2、(1)材料方法：苹果矮化砧 GM256,春季芽萌动后取田间的枝条,将萌发的新芽,用自来水冲洗后 75%酒精 0.51min,0.1%升汞 5min,然后剥取 0.5mm左右长的茎尖,接种于诱导培养基上.以 MS 为根本培养基,pH 值为 5.8,培养室温度 24C,湿度 60%左右.将初代培养出的芽接种到增殖培养基上,连续继代(每次 2530d)2 次.将长至 2cm 左右的试管苗接入生根培养基中诱导生根.(2)结果：外植体诱导.外植体接种到诱导培养基中,在正常的光照培养条件下均不能诱导出芽,暗培养20d和 30d 的黄化苗经光照后很快变绿,正常生长.而暗培养 40d 的黄化苗玻璃化严重,经光

3、照后也很难正常生长.诱导培养基中,60d 后,当 BA 浓度低于 2mg/L,NAA 浓度高于 1mg/L 时不利于矮化砧芽的诱导.旧 A也不适宜矮化砧芽的诱导.适宜的浓度和种类是:MS+BA2mg/L+NAA0.1mg/L. 增 殖 . 诱 导 培 养 出 的 芽 接 种 到 增 殖 培 养 基 上 连 续 继 代 ( 每 次 25 30d)2 次 , 在MS+BA2.0mg/L+NAA0.05mg/L 和,MS+BA3.0mg/L+NAA0.10mg/L 上苗生长健壮,增殖快,可增殖 56 倍.BA 浓度为 1.0 和 1.5,NAA 浓度为 0.1mg/L 时试管苗增殖少,只增殖 12

4、倍,有叶片黄化,玻璃化苗现象.生根培养.将长至 2cm 左右的试管苗接入接入生根培养基中诱导生根,20d 后,1/2MS+IBA0.5mg/L对生根效果最好,生根快,生根数多,平均 5.8 条/苗,生根率可达 86.3%,浓度超过 2mg/L 那么抑制生根,只形成愈伤组织.暗培养和光培养对生根无明显差异.2 苹果抗寒砧木组培(1)材料方法：砧木品种：珠美海棠、小金海棠、77-34.在春季植株萌发后,切取嫩芽 0.5-1.0cm 清水冲洗,先用 75%I酒精浸泡15s,再用0.1%升汞浸4-5min,无菌水冲洗干净.以,MS为根本培养基,蔗糖浓度为3%,琼脂0.7%,附加不同种类、浓度激素.(2

5、)结果：芽绣导.不同砧木品种的芽绣导对激素的要求是有差异的,30d后,MS+BA0.7mg/L+IBA0.3mg/L是小金海棠最适培养基,幼苗粗壮,萌发芽为 3.8 倍；MS+BA0.7mg/L+IBA0.5mg/L 是 77-34 最适培养基,萌发芽也是 3.8 倍；MS+BA0.7mg/L+IBA0.1mg/L 是珠美海棠最适培养基,萌发芽为 4.1 倍.生根培养基.1/2MS+IBA1.0mg/L 为小金海棠、77-34、珠美海棠的最适生根培养基,生根率均达 94%左右,平均达 2.6 条根/苗左右；生根苗移栽.选取生长健壮、苗高 1.5-2cm、茎粗大于 1mm 根系较多的试管苗,经半

6、开瓶锻炼苗7d后,转移至盛有蛭石的营养钵中,252C,保湿15d,再将营养钵转入温室中,在遮光、保湿条件下放置 5-20d 移入大田.移栽成活率 55-60%o3 苹果脱毒组培(1)材料方法：材料：早春,将上年芽接或切接的盆栽长富 2 号苹果苗移人温室,待新梢长出 35 片新叶时,放人热处理箱中,37C 恒温热处理 30d 或 32C 与 37c 每 8h 变换一次,变温热处理 60d.脱毒率可达 80%以上.热处理结束后,从盆栽苗嫩梢上采集生长旺盛、长约 23cm 顶梢,流水冲洗 510min,去掉小叶.70%乙醇浸泡 30S,蒸储水冲洗后放人 0.1%HgCl2 中消毒 10min,无菌水

7、冲洗 35 次,解剥镜下迅速剥取 1.0mm的茎尖进行别离培养,接种于起始培养基上.培养基： 起始培养基以 Ms 为根本的培养基,附加 6BA 和 NAA,白糖 3%,琼脂 0.36%,pH5.8.培养条件温度 2630C,光照强度 15002000Lx,10h/d.(2)结果：芽诱导.适宜苹果芽诱导培养基为：MS+6-BAl.0mg/L+NAA0.1mg/L.诱导的芽生长正常可卡发育成新梢.继代培养.选择诱导的芽丛切割成单芽茎段,转接于设计的继代培养基上,适宜的苹果继代培养基为： MS+6BAl.0mg/L+NAA0.05mg/L.自糖 4%,琼脂 0.36mg/I.培养条件为光照强度 20

8、002500Lx,光照时间为 1416h/d,适宜温度为 25c20C.40d 后增殖 6.1 倍.生根培养.选择生长正常的继代培养苗,剪成单芽茎段,插入生根培养基中,苹果适宜的生根培养基为：l/2MS+IAAl.5mg/L.白糖 25%,琼脂 0.36%.培养 30d 后,平均 4-6 条根/苗,长达 0.51.0cm.根白且粗,多直接生于茎基部.炼苗、移栽.强光闭瓶锻炼生根培养 2025d,不定根长至 1.0cm 时,将培养瓶移至 2035X1000lx强光下,不去封口膜继续培养 20d 左右,使试管苗幼茎更加充实健壮.光强时可遮荫限制温度在 35C 以下.闭瓶锻炼后开瓶锻炼,除去封口膜,

9、继续锻炼 25d,使试管苗适应低湿环境.过渡移栽.从瓶内取出经过锻炼生根的试管苗,冲去根部的培养基,移栽于营养钵中其基质为园土：腐熟发黑锯末：河沙=1:2:1 混和配制,于温度 25C 的塑料大棚中培育.将营养钵小苗放在塑料大棚内加盖有薄膜的小拱棚内,早晚各洒水 1 次,13d 保持空气相对湿度在 85%以上,基质水分不宜过多.1 周后开始逐渐揭膜放风,直至完全除去薄膜.过渡移栽 30d 左右,地上局部生长到 10cm 左右时可移至大田.4 苹果茎尖培养品种为新红星等.春季田间取一年生枝单芽茎段经 0.1%升汞外表消毒后,CaC122H2O150,MgS04.7H20150,FeSO47H20ZnSO4.7H2O8.6KI0.8,CuSO4.5H2O0.025,C0Cl26H200.025NaMoO42H2O-,肌醇-甘烟酸 0.5,生物索 1.5.氨酸 2,盐酸硫胺素 1.0,盐酸毗哆将萌动之腋芽露出C17大量元素同CH300mg/L,蔗糖7d1000-2000lx,14h/d4-5 片小叶,剥取C17 其它同 MS30g/L,琼脂6g/L,再暗培养茎尖接