试验三细菌生理生化鉴定-LOPAT试验

1、菌落圆形，污白色，全缘，微凹，光滑实验三细菌生理生化鉴定-LOPAT试验一、实验目的：1 了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定lopat实验方法二、实验材料：彳弥猴桃溃疡病病原菌（分类地位薄壁菌门Gracilicutes , Proteobacterial冈假单胞 菌科Pseudomonadacea锻单胞杆菌属 Pseudomonas SPA培养基:蔗糖20g，蛋白 陈5g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁0.25g琼脂15g，蒸储水1000ml对照SPA培养基:葡萄糖20g，蛋白陈5g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁0.25g ,琼 脂15g，蒸储水1000mlThornley培养基配方：蛋白陈1g

2、，精氨酸10g，氯化钠5g，磷酸氢二钾0.3g ,酚 红0.01g ,琼脂6g，蒸储水1000ml1%二甲基对苯二胺盐酸盐，3 108 /ml的菌液（病原菌，烟草,马铃薯；灭菌培养皿及培养基（平板110套、未灭菌培养皿110套,接种针15个，试管110 支，接种针55把，滤纸55张,试剂瓶55个，胶头滴管55支，喷壶55个三、试验方法：果聚糖试验（Levan formation :用细菌悬浮液，在SPA培养基上，再用葡萄糖代替蔗糖培养基平板上分别划线。 在25c条件下培养3- 7 d,形成白色、粘稠、圆顶、隆起而有闪光的菌落为阳性反 应。在此条件下，在SPA培养基上可形成前述菌落，果聚糖试验为

3、阳性；而在用葡 萄糖代替蔗糖培养基上，不形成前述菌落。氧化酶试验（oxidase reaction :在培养皿内放一张滤纸，滤纸上加3-4滴1%二甲基对苯二胺盐酸盐，使其湿 润。用玻棒挑 取生长24 h的菌苔涂在滤纸上 若菌苔在10 s内变成紫色，为阳性反 应;在60 s以后变色 或一直不变色，为阴性反应。在此条件下，菌苔的氧化酶试验为阴性反应氧化酶（细胞色素氧化酶是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶马铃薯软腐试验 （potato erroring capacity :在马铃薯上彳刺伤伤口，将细菌接到伤口上，几天后观察，是否出现软腐。精氨酸双水解酶检验（argine reaction :配制Tho

4、rnley培养基。每试管装3- 4 ml培养基灭菌，冷却，针刺接种细菌至培 养基底部，立即用凡士林封管，在27c条件下培养7 do在此条件下，精氨酸双水解酶为阴性，颜色不变。细菌的精氨酸双水解作用是将精氨酸经过两步水解，生成有机胺和无机氨。鉴定细菌的精氨 酸试验，无论发酵菌还是非发酵菌，革兰阳性菌还是革兰阴性菌，测的 都是精氨酸双水解酶，使用脱竣酶试验培养基。所以，赖氨酸脱竣酶，鸟氨酸脱竣酶和精氨酸双水解酶用同一种基 础培养基，为Moeller配方或Falkow配方，均须加盖石 蜡油。对于发酵菌，细菌生长后，培养基变黄为阴性，变紫为阳性；对非发酵菌，培养基 颜色不变为阴性，变黄为阳性。另有一 种精氨酸双水解酶专用培养基，其中使用的是 酚红指示剂。这种配方目前已不使用。 细菌生化反应表中的精氨酸双水解酶的阳 性百分率也不是在这种培养基上做的，所以,该配方实际已淘汰。烟草过敏性反应（tobacoo hypersensitivity :将在26c条件下，培养72 d的菌株，用无菌水配成3 X0