试验室常用生化试剂配方

1、实验室常用生化试剂配方1 .常用抗生素配制以及使用说明（参考链霉菌室操作手册 2019版）抗生素英文名称及缩写抗性基因贮藏液浓度（mg/ml） 10025（ 无水乙醇配）50 25 50 50 25（DMSO 配）100 50 3525（0.15M NaOH 配）50（DMSO 配）50 50MM使用终浓度（g/ml ）链霉菌2CMYEME大肠杆菌LA 或 LB氨芳青霉素氯霉素潮霉素卡那霉素壮观霉素链霉素硫链丝菌素红霉素阿泊拉 霉素 紫霉素蔡锭酮酸TMPAmpicillin, Amp bla Chloramphenicol, Cml Hygromycin, Hyg Kanamycin, Km

2、Spectinomycin, Spc Streptomycin, Str Thiostrepton, Thio Erythomycin, Ery Apramycin, Am Viomycin,Vio Nalidixic acid Trimethoprimcat hyg aac/aph aadA str tsr ermE aac（3）IV vph-* 10 10 2 5 10 5 100 1025 25 20 25 10 50-2.5 550-100 2525 50 25 25 20 10-30注意事项：(1) -表示无记录或不能使用，贮存液除特别说明外均用无菌水配制，配制过程请确保抗生素粉末充

3、分溶解混匀后再分装；(2) Km和Am有交叉抗性，同时具有这两种抗性基因时应适当提高抗生素的量，并 设置阴性对照；(3) Hyg、Vio易见光分解，配制好后应用锡箔纸包好，使用过程中建议避光操作。有些抗生素需要在低盐的环境(如DNA®养基)下筛选效率较高，如 Hyg, Km, Vio(4) 用无菌水配制的抗生素需在超净工作台内用0.22m一次性过滤器过滤除菌并分装；氯霉素、TMP硫链丝菌素可以在超净工作台外配制分装，无需过滤除菌，但需确 保配制贮存液所用溶剂(无水乙醇、DMSO未遭受污染，建议配制氯霉素时使用新的无水乙醇，不要使用抽提质粒或总DNA寸用的无水乙醇，以防止污染；DMSO

4、即二甲亚飒，易挥发，有剧毒；(5) 长期不用的抗生素请置于-20C保存，抗生素粉末按照使用说明一般置于4c保存，经常使用时可以暂置于 4c保存；(6) 抗生素的实际使用浓度请结合实验经验进行适当调整；(7) 配制抗生素时应尽量一次性称取抗生素粉末，配制过程中建议穿工作服，戴一次 性橡胶手套及口罩，及时清理称量配制抗生素时使用的台面及器具，以避免抗生素及溶剂 对自身的损伤及对工作环境的污染。注意事项：(1) 表中所列酶均可以用无菌水配制，也可以用相应的缓冲液配制，缓冲液配制方法 参考分子克隆实验指南(第 3版)：蛋白酶K缓冲液：50 mM Tris (pH 8.0) , 1.5 mM 乙酸钙；R

5、Nase A缓冲液：TE (pH 7.6) : 10 mM Tris-HCl , 1 mM EDTA 溶菌酶缓冲液 ：10 mM Tris-HCl (pH 8.0);(2) RNase A配制好后沸水浴处理 5 min ,取出贮存RNase A后首次使用时也需沸水浴处理5 min后再使用；(3)制备原生质体时使用的溶菌酶配制时需过滤除菌，其他情况一般无需过滤除菌；(4)所有酶均应在-20C保存，使用过程中避免反复冻融，配制过程中尽量避免外界 污染。(1) IPTG用无菌水配制，0.22 m一次性滤膜过滤除菌，分装保存于-20C； X-Gal用N-N-二甲基甲酰胺（DMF配制，无需过滤除菌，X-Gal易见光分解, 配制过程中尽量避开强光，分装到离心管后用锡箔纸包好，避光保存于-20C； N-N-二甲基甲酰胺有剧毒，挥发性