郁金散半仿生提取物对急、慢性肠炎的保护作用及其机制研究

1、郁金散半仿生提取物对急、慢性肠炎的保护作用及其机制研究郁金散是中(兽)医临床常用经典方药,主治急慢性肠炎、腹泻、传染性发热、肺炎、肝炎等,疗效显著,现代药理学研究表明其具有抗炎、抗菌及解热镇痛的作用,但对其治疗肠炎作用的确切机制尚无深入研究。本研究采用均匀设计法优选郁金散半仿生提取的最佳工艺条件,对郁金散半仿生提取物(Semi-bionicExtractionofCompoundTurmeric,SET)、醇提物(AlcoholExtraction,AE)及水提物(WaterExtraction,WE)进行平行对照实验,用化学指标结合药效学指标综合评价,确定郁金散的最佳提取方法。研究SET的急

2、性毒性、解热和抗炎镇痛作用,并采用葡聚糖硫酸钠(DextranSulfateSodium,DSS)诱导建立大鼠急性肠炎(AcuteEnteritis,AE)及慢性肠炎(ChronicEnteritis,CE)模型，观察SETM急、慢性肠炎的7B疗作用及其机制,为中药郁金散的开发与应用提供理论依据,主要研究结果如下:1、采用均匀设计法研究郁金散的半仿生提取工艺,以黄芩苷、盐酸小檗碱、大黄素、姜黄素、芍药苷和栀子苷含量为指标,并对提取物总黄酮、总生物碱、总蒽醌进行检测,综合评判工艺参数,优选出郁金散半仿生提取的最佳条件,结合生产实际,确定其工艺参数为:3煎用水pH依次为:2.0,7.0和9.0;提

3、取时间依次为：2,1.5和1.5h。此方法可控性强、操作简单、稳定性较好。2、以干浸膏得率、总蒽醌、总黄酮、总生物碱为化学指标,以抗炎效应(小鼠耳壳肿胀试验)和抗菌效应(体外大肠杆菌、绿脓杆菌、金葡萄球菌及白色念珠菌抑菌试验)为药效学指标，对SETAE及WES行平行又1照实验，比较郁金散不同方法提取物的作用效果。结果表明三种不同方法的提取液的作用效力顺序为:SET>AE>WE,表明用化学指标结合药效学指标综合评价，优选出的郁金散半仿生工艺可行,且提半仿生取法优于传统的水提及醇提法。3、SET对小鼠经口给药LD50为4.20g/kg,置信系数a=0.05时的置信区间为

4、3.63g/kg<LD5(K4.56g/kg;SET对二甲苯致小鼠耳月中胀试验及角叉菜胶致小鼠足跖肿胀急性炎症反应具有明显抑制作用,对干酵母及对2,4-二硝基苯酚致大鼠发热具有一定的解热作用,且呈现量效关系;对冰醋酸致小鼠扭体反应及热刺激致小鼠痛反应试SET具有一定的镇痛作用。4、DSSB导建立大鼠AE模型，动态监测模型大鼠消化功能和组织形态的变化，结果显示SET干预后大鼠体重及24小时摄食量均有所恢复；SET可显著降低DAI值及结肠W/D比值，提示SET可改善模型大鼠消化功能，减轻肠道水月中；血清促炎及抗炎因子检测结果显示SET干预后模型大鼠血清TNF-a、IL-6、IL-1B、IL-

5、8含量降低，IL-10含量升高，结肠组织MDAMPOt量降低,DAQGSH-Pxt量升高；给药后第7d,模型大鼠CMDI及HPS分明显高于正常对照组，经SET干预后，各组CMD吸HPS分值均有不同程度的减小;组织病理学观察显示模型大鼠结肠隐窝和上皮结构消失,腺体多数不完整,炎症细胞广泛浸润,水肿和出血明显,SET高剂量组大鼠结肠组织炎性细胞的浸润明显减少,水肿和充血明显减轻,SET低剂量组大鼠结肠组织依然有大量的炎性细胞浸润和出血点，但比模型组有轻微的好转；RT-PCR检测结果显示,SET干预后模型大鼠NF-kB-p65mRNAiICAM-1mRNA量降低;Westernbloting分析显示

6、,SET干预后模型大鼠结肠组织NFkB-p65及ICAM-1表达降低。提示SET可作为急性肠炎的有效治疗物质。5、DSSB导建立大鼠CE模型，研究SETMCE模型大鼠的治疗作用，结果显示,SET干预后模型大鼠体重及24小时摄食量明显增加，模型大鼠DAI值及结肠W/D比值明显降低；采用扩张球囊对CE大鼠进行结直肠刺激，结果显示SET干预后在第21d、31d、41d及51d,SET高剂量组大鼠腹部撤回反射(AbdominalwithDrawalReflex,AWR)评分明显降低,第42d及51d,SET低剂量组大鼠AWFfi明显降低，结果提示SET可缓解DSS弓I起的CE大鼠内脏痛敏；SET干预后模型大鼠血