急性眼刺激试验

1、急性眼刺激试验急性毒性试验动物急性毒性试验研究动物在24小时内服用一次或多次后在一定 时间内产生的毒性反应人类使用的药物通常需要动物急性毒性试验。 需要啮齿动物或非啮齿动物通常小鼠或大鼠通过口腔、吸入或皮肤暴露于药物。急性毒性试验主要测量 LD50（浓度），观察急性中毒性能、 经皮吸收能力以及对皮肤、粘膜和眼睛是否有局部刺激等。急性毒性 试验处于药物毒理学研究的早期阶段，对阐明药物的毒性作用和了解 其毒性靶器官具有重要意义。急性毒性试验获得的信息对某些药物的 长期毒性试验剂量的设计和一期临床试验初始剂量的选择具有重要 的参考价值，并能提供一些与人类用药过量所致急性中毒有关的信 息。急性眼刺激/

2、眼腐蚀试验（巴豆油或甲醛）定义：眼刺激:指眼球表面接触试样后可逆的炎症变化眼睛腐蚀性：指眼球表面与被测样品接触造成的不可逆组织损伤。试验的基本原理：将1个试验样品一次滴入每只实验动物一只眼的结膜囊，另一只未 处理的眼作为自身对照。2在规定的时间间隔内，观察对动物眼睛的刺激和腐蚀程度及评 分，从而评价试样对眼睛的刺激观察时间应足以评估刺激效应的可逆性和不可逆性。观察时间至少为 72小时，但一般不超过21d几天。3当动物表现出严重而持久的疼痛迹象时，应以适当的方式处死 动物；4强酸或强碱物质，如酸碱度W 2或酸碱度11.5由于其可预测的 腐蚀特性，不需要测试。5.在皮肤试验中被证明具有腐蚀性或严重

3、刺 激毒性的物质不需要进行眼睛刺激试验， 可以假定这些物质会对眼睛 造成类似的严重后果；6在充分和公认的体外试验结果确定可能产生刺激性或腐蚀性物 质时无需进行体内试验目的:检测外来化合物对实验动物眼睛和粘膜的主要刺激和腐蚀作 用的急性试验，以提供与受试物质接触的人眼和粘膜的潜在危险信息实验动物：优选成年白兔（如果使用其他哺乳动物进行实验，实验者 应提供选择依据），选择对人皮肤和粘膜反应相对相似的动物，常用 动物包括兔和豚鼠动物种类的选择应基于待观察的指标和模型的合 理性。通常选择一种动物进行测试类型的评估。）,体重2 3公斤, 至少3只（如果试验样品的显著效果是可预见的，可以考虑一只动物 如果

4、从动物试验中获得的结果表明受试样品具有严重的刺激性和腐 蚀性，则无需进一步试验。如果结果相反，至少需要3只兔子。有时, 可疑的反应应该在添加动物的进一步实验中得到适当的澄清。）动物应在试验前至少3天适应动物实验室环境。在试验前 24小时，实验 动物的两只眼睛应接受常规检查。 有眼睛刺激症状、角膜缺陷或结膜 损伤的动物不能用于试验。测试药物：对于液体测试样品，原液可以不稀释直接使用，暴露量 为0.5毫升如果测试样品是固体或颗粒，应将其研磨成细粉，并通过 200目筛，暴露量为100毫克气雾剂产品需要喷洒到容器中，并收集 起来再使用对于挥发性物质，可通过在使用前后称量容器质量来估算 剂量。操作步骤（

5、1）固定兔子，轻轻打开兔子右眼的下眼睑，将0.5毫升（100毫克） 的测试样品滴入（或放入）结膜囊，被动关闭上下眼30秒，以防止测 试样品丢失，并使用另一侧未处理的眼睛作为自己的对照或滴剂（2）（正常操作:滴下试样后24小时内不要冲洗眼睛，必要时在 24小时 内冲洗眼睛如果被测样品有明显的刺激迹象， 则选择另外3只动物进 行冲洗试验。将试样滴加 30s后，用生理盐水冲洗5min。水的流速 和流速都不会对眼睛造成伤害。）滴30秒，用生理盐水冲洗滴加试验 样品后10分钟、0.5小时、1小时、1.5小时检查眼睛（正常试验方法:1 小时、24小时、48小时、72小时和4天、7天）。如果在72小时内 没

6、有出现刺激反应，测试可以终止。如果发现角膜受累或有其他眼部 刺激，且患者在7天内未恢复，则观察时间应延长，以确定损伤的可 逆性或不可逆性，一般不超过21天。除了观察角膜、虹膜和结膜外， 还应记录和报告其他损伤效应。经过 24小时的观察和记录，可以用 2%荧光素钠溶液或裂隙灯和放大镜检查角膜和虹膜的变化。在每次 检查中，应根据表1记录眼睛刺激反应，并根据表2评估眼睛刺激强 度。评估规则:根据表2-13对兔角膜、虹膜和结膜的急性刺激反应进行评分。分 别计算三个不同观察时间（本试验：0.5h、1h和1.5h）（正常试验方法:24h、48h和72h）的角膜损伤、虹膜损伤、结膜充血和结膜水肿的 平 均分

7、数”本试验:每只动物的0.5h、1h和1.5h分数之和除以观察数 3）（正常试验方法：每只动物的24h、48h和72h分数之和除以观察数 3）分别根据动物眼睛角膜、虹膜和结膜充血和水肿的平均分数和恢复 时间，根据表2-14和表2-15中的眼睛刺激反应分级标准确定受试对 象对眼睛的刺激强度。鉴定报告除一般鉴定报告的内容外，还应包括以下几个方面：1表记录了每只动物在每个时间点的刺激反应 （本试验:10分钟、0.5 小时、1小时、1.5小时）（正常试验方法：如1小时、24小时、48小时、 72小时和4天、7天）；2.详细描述眼睛以外的其他功能；3刺激/腐蚀 程度和性质的描述；4描述了在每个观察时间点

8、积分时的检查方法（如裂隙灯、生物显微 镜和荧光素染色）。5结论对试验结果的解释：从动物到人类外推的急性眼刺激试验结果的可靠性是有限的。在大多数情况下，白兔比人类对刺激性或腐蚀性物质更敏感。如果在其他动物品系的试验中 获得类似的结果，从动物到人类的推断的可靠性将会增加。表眼刺激反应评分标准观察项目刺激反应判断符号+ 1 2 3 4 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 3 3 4 0 1 2明I糊的虹膜密集部分）灰色透明区域，不清楚的虹膜细节，由于瞳孔大小而几乎不清楚的角膜混浊，正常的虹膜模糊折叠明显加深，充血、肿胀，角膜周围轻微充血，瞳孔的虹膜开口仍对光出血有反应，肉眼可见坏死，对光无反应（或其中一种反应）的血管为正常结膜充血（指眼睑血管充血为鲜红色结膜充血，球结膜血管充血为深红色，血管不易分辨