超全实验室试剂配制资料

1、一、实验室常用试剂、缓冲液的配制方法1、1 M Tris-HCl (pH7.4，7.6，8.0)组份浓度 1 M Tris-HCl配制量 1L配制方法 1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中。 2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.按下表加入浓HCl量调节所需要的pH值。pH值浓HCl7.4约70 ml7.6约60 ml8.0约42ml4.将溶液定容至1 L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高l，溶液的pH值大约降低0.03个单位。2、1.5 M Tris-HCl (pH8.8

2、) 组份浓度 1.5 MTris-HCl配制量 1 L配制方法 1.称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。 2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.用浓HCl调节pH值至8.8。 4.将溶液定容至1 L。 5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高l，溶液的pH值大约降低0.03个单位。3、1 0×TE Buffer (pH7.4, 7.6，8.0) 组份浓度 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 1.量取下列溶液，置于l L烧杯中。1

3、M Tris-HCl Buffer(pH7.4，7.6，8.0)100 ml500 mM EDTA(pH8.0)20 ml 2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。 3.将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。 4.室温保存。4、3 M醋酸钠(pH5.2) 组份浓度 3 M醋酸钠 配制量 100 ml 配制方法 1.称量40.8 g NaOAc·3H2O置于100200 ml烧杯中，加入约40 ml的去离子水搅拌溶解。 2.加入冰醋酸调节pH值至5.2。 3.加去离子水将溶液定容至100 ml。 4.高温高压灭菌后，室温保存。5、PBS Buffer 组份浓度 137 mM

4、NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 配制量 1 L 配制方法 1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。NaCl 8 gKCl 0.2 gNa2HPO41.42 gKH2PO40.27 g 2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.滴加浓HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。 4.高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。6、10 M醋酸铵 组份浓度 10 M醋酸铵配制量 100 ml配制方法 1.称量77.

5、1 g醋酸铵置于100200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至100 ml。 3.使用0.22 µm滤膜过滤除菌。4.密封瓶，室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7、Tris-HCl平衡苯酚 配制方法 1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须，160对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐

6、使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。 2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。 3.苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： 液化苯酚应贮存于-20，此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68水浴中使苯酚充分融解。 加入羟基喹啉(8-Qulnollnol)至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时

7、因其呈黄色，有助于方便识别有机相。 加入等体积的1 M Tris-HCl(pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌l5min，静置使其充分分层后，除去上层水相。 重复操作步骤。 加入等体积的0.1 M Tris-HCl(pH8.0)。使用磁力搅拌器搅拌l5min，静置使其充分分层后，除去上层水相。 重复操作步骤，稍微残留部分上层水相。 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4避光保存。8、苯酚/氯仿/异戊醇 配制方法 l.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚，氯仿/异戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出

8、现的气泡。 2.配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1)混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4保存。9、10%(W/V)SDS 组份浓度 10%(W/V)SDS配制量 100 ml配制方法 1.称量10 g高纯度的SDS置于100200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水，68加热溶解。 2.滴加浓HCl调节pH值至7.2。 3.将溶液定容至100 ml后，室温保存。10、2 N NaOH 组份浓度 2 N NaOH配制量 100 ml配制方法 1.量取80 ml去离子水置于100200 ml塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。 2.称取8

9、 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。 3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液定容至100 ml。 4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。11、2.5 N HCl 组份浓度 2.5 N HCl配制量 100 ml配制方法 1.在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓HCl(11.6 N)，均匀混合。 2.室温保存。12、5 M NaCl 组份浓度 5 M NaCl配制量 1 L配制方法 1.称量292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。 2加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。 3.高温高压灭菌后，4保存。13、20%

10、(W/V)Glucose(葡萄糖)组份浓度 20%(W/V)Glucose配制量 100 ml 配制方法 1.称取20 g Glucose置于100200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后。搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至l 00 ml。 3.高温高压灭菌后，4保存。14、Solution l (质粒提取用) 组份浓度 25 mM Tris-HCl(pH8.0)，10 mM EDTA，50 mM Glucose配制量 1 L配制方法 1.量取下列溶液，置于l L烧杯中。1 M Tris-HCl(pH8.0)25 m0.5 M EDTA(pH8.0)20 m20% Glucose(

11、1.11 M)45 mdH2O910 m 2.高温高压灭菌后，4保存。 3.使用前每50 ml的Solution l中加入2 ml的RNase A(20 mg/ml)。15、Solution (质粒提取用)组份浓度 200 mM NaOH，1%(W/V)SDS配制量 500 ml配制方法 1.量取下列溶液，置于500 ml烧杯中。10%SDS50 ml2NNa0H50 ml 2.加灭菌水定容至500 ml，充分混匀。 3.室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。16、Sol ution (质粒提取用)组份浓度 3 M KOAc，5 M Ethanoic

12、 acid (乙酸)配制量 500 ml配制方法 1.称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。KOAc147gEthanoic acid57.5ml 2.加入300 ml去离子水后搅拌溶解。 3.加去离子水将溶液定容至500 ml。 4.高温高压灭菌后，4保存。17、0.5 M EDTA (pH8.0) 组份浓度 0.5 M EDTA配制量 1 L配制方法 1.称取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L烧杯中。 2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。 3.用NaOH调节pH值至8.0(约20gNaOH)。 注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。 4加去离子水

13、将溶液定容至1 L。 5.适量分成小份后，高温高压灭菌。 6.室温保存。18、1 M DTT 组份浓度 1 M DTT配制量 20 ml配制方法 1.称取3.09 g DTT，加入到50 ml料离心管内。 2.加20 ml的0.01 M NaOAc(pH5.2)，溶解后使用0 22 µm滤膜过滤除菌。 3.适量分成小份后，-20保存。19、10 mM ATP 组份浓度 10 mM ATP配制量 20 mL配制方法 1.称取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。 2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl(pH8.0)，搅拌溶解。 3.适量

14、分成小份后，-20保存。二、蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法1、30%(W/V)Acrylamide(丙烯酰胺)组份浓度 30%(W/V)Acrylamide配制量 1 L配制方法 1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。Acrylamide290 gBIS(双丙烯酰胺)10 g 2.向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.加去离子水将溶液定容至l L，用0.45 µm滤膜滤去杂质。 4.于棕色瓶中4保存。注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。2、40%

15、(W/V)Acrylamide(丙烯酰胺) 组份浓度 40%(W/V)Acrylamide配制量 1 L配制方法 1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。Acrylamide380 gBIS20 g 2.向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.加去离子水将溶液定容至l L，用0.45 µm滤膜滤去杂质。 4.于棕色瓶中4保存。注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。3、10%(W/V) AP (过硫酸铵)组份浓度 10%(W/V)AP配制量 10 ml配制方法

16、 1.称取0.1 g AP，置于1.5 ml EP管。 2.加入1 ml的去离子水后搅拌溶解。 3.贮存于4。注意：1 0%过硫酸铵溶液在4保存时可使用2周左右，超过期限会失去催化作用。4、5×Tris-Glyclne Buffer (SDS-PAGE电泳缓冲液)组份浓度 0.125 M Tris，1.25 M Glyclne(甘氨酸)，0.5%(W/V)SDS配制量 1 L配制方法 1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。Tris15.1 gGlyclne94 gSDS5.0 g 2.加入约800 ml的去离子水，搅拌溶解。 3.加去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。5、2

17、5;SDS -PAGE Loading Buffer组份浓度100 mMTris-HCl(pH6.8)100 mM-巯基乙醇(2-ME)4%(W/V)SDS0.2%(W/V)溴酚兰(BPB)20%(V/V)甘油配制量 5 ml配制方法 1.量取下列试剂，置于10 ml塑料离心管中。0.25 M Tris-HCl(pH6.8)0.25 ml-巯基乙醇0.5 mlSDS0.2 g甘油1 ml1%溴酚兰0.1 ml，2.加去离子水溶解后定容至5 ml。 3.小份(500 µl/份)分装后，于室温保存。 4.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右6、5×

18、SDS-PAGE Loading Buffer250 mMTris-HCl(pH6.8)10%(W/V)SDS0.5%(W/V)BPB50%(V/V)甘油5%(W/V)2-ME组份浓度配制量 5 ml配制方法 1.量取下列试剂，置于10 ml塑料离心管中。1 M Tris-HCl(pH6.8)1.25 mlSDS0.5 gBPB25 mg甘油2.5 ml 2.加去离子水溶解后定容至5 ml。 3.小份(500 µl/份)分装后，于室温保存。 4.使用前将25 µl的2-ME加到每小份中。 5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右。7、考马斯亮蓝

19、R-250染色液组份浓度 0.1%(W/V)考马斯亮蓝R-250，25%(V/V)异丙醇，10%(V/V)冰醋酸配制量 1 L配制方法 1.称取1 g考马斯亮蓝R-250，置于1 L烧杯中。 2.量取250 ml的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。 3.加入100 ml的冰醋酸，搅拌均匀。 4.加入650 ml的去离子水，搅拌均匀。 5.用滤纸除去颗粒物质后，室温保存。8、考马斯亮蓝染色脱色液 组份浓度 10%(V/V) Ethanoic acid，30%(V/V)乙醇 配制量 1 L 配制方法 1.量取下列溶液，置于l L烧杯中。Ethanoic acid100 ml乙醇300 mldH2O6

20、00 ml 2.充分混合后使用。9、凝胶固定液(SDS-PAGE银氨染色用) 组份浓度 50%(V/V)甲醇，10%(V/V) Ethanoic acid 配制量 100 ml配制方法 1.量取下列试剂，加入100200 ml的试剂瓶中。甲醇500 mlEthanoic acid100 mldH2O400 ml 2.均匀混合后室温保存。10、凝胶处理液(SDS-PAGE银氨染色用) 组份浓度 50%(V/V)甲醇，10%(V/V)戊二醛配制量 100 ml配制方法 1.量取下列试剂，加入100200 ml的试剂瓶中。甲醇50 ml戊二醛10 mldH2O40 ml 2.均匀混合后室温保存。11

21、、显影液 (SDS-PAGE银氨染色用)组份浓度 0.005%(W/V)柠檬酸，0.02%(V/V)甲醛配制量 1 L配制方法 1.称量下列试剂，置于l L试剂瓶中。柠檬酸50 mg甲醛0.2 ml 2.加入1 L去离子水后，摇动混合溶解。 3.室温保存。三、核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法1、50×TAE Buffer (pH8.5)组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA配制量 1 L配制方法 1.称量下列试剂，置于1 L烧杯中。Tris242 gNa2EDTA·2H2O37.2 g 2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.加入5

22、7.1 ml的乙酸，充分搅拌。 4.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。2、10×TBE Buffer (pH8.3) 组份浓度 890 mM Tris-硼酸，20 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 l.称量下列试剂，置于l L烧杯中。Tris108 gNa2EDTA·2H2O7.44 g硼酸55 g 2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。3、10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer 组份浓度 200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA配制量 1 L配

23、制方法 1.称41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。 2.加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。 3.使用2 N NaOH调节pH值至7.0。 4.再向溶液中加入下列试剂。1 M NaOAc(DEPC处理)20 ml0.5 M EDTA(pH8.0)(DEPC处理)20 ml 5.用DEPC处理水将溶液定容至1 L。 6.用0.45 m滤膜过滤除去杂质。 7.室温避光保存。注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用，但变黑时不要使用。4、溴乙锭 (10 mg/ml)组份浓度 10 mg/ml溴乙锭配制量 100 ml配制方法 1.称量1 g溴乙锭，加入到100 ml容器中。 2.

24、加入去离子水100 ml，充分搅拌数h完全溶解溴乙锭。 3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。 4.溴乙锭的工作浓度为0.5 g/ml。注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。5、Agarose凝胶 配制方法 1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5×TBE或1×TAE)。 2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。 3.加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。 注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。 4.在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂糖。加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上

25、防热手套。小心摇动锥形瓶。使琼脂糖充分均匀熔化。此操作重复数次，直至琼脂糖完全熔化。必须注意，在微波炉中加热时间不宜过长，每次当溶液起泡沸腾时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造成琼脂糖凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。熔化琼脂糖时，必须保证琼脂糖充分完全熔化，否则，会造成电泳图像模糊不清。 5.使溶液冷却至60左右，如需要可在此时加入溴乙锭溶液(终浓度0.5 µg/ml)。并充分混匀。 注：溴乙锭是一种致癌物质。使用含有溴乙锭的溶液时，请戴好手套。 6.将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度 一般在35 min之间。 7.在室温下使胶凝固(大约30 min1 h)

26、，然后放置于电泳槽中进行电泳。 注：凝胶不立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在4下保存，一 般可保存25天。6、 琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围琼脂糖浓度最佳线形DNA分辨范围(bp) 0.5% 0.7% 1.0% 1.2% 1.5% 2.0% 1,00030,000 80012,000 50010,000 4007,000 2003,000 502,0007、 6 × Loading Buffer(DNA电泳用) 组份浓度30 mMEDTA36%(V/V)Glycerol0.05%(W/V)Xylene Cyanol FF0.05%(W/V)Bromophenol Blu

27、e 配制量 500 ml 配制方法 1.称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。EDTA4.4gBromophenol Blue250 mgXylene Cyanol FF250 mg 2.向烧杯中加入约200 ml的去离子水后，加热搅拌充分溶解。 3.加入180 ml的甘油(Glycerol)后，使用2 N NaOH调节pH值至7.0。 4.用去离子水定容至500 ml后，室温保存。8、10 × Loadlng Buffer (RNA电泳用)组份浓度10 mMEDTA50%(V/V)Glycerol0.25%(W/V)Xylene Cyanol FF0.25%(W/V)Bromoph

28、enol Blue配制置 10 ml配制方法 1.称量下列试剂，置于10 ml离心管中。0.5 M EDTA(pH8.0)200 µlBromophenol Blue25 mgXylene Cyanol FF25 mg 2.向离心管中加入约4 ml的DEPC处理水后，充分搅拌溶解。 3.加入5 ml的甘油(Glycerol)后，充分混匀。 4.用DEPC处理水定容至10 ml后，室温保存。四、核酸、蛋白质杂交用相关试剂、缓冲液的配制方法1、20×SSC 组份浓度 3.0 M NaCl，0.3 M Na3citrate·2H2O(柠檬酸钠)配制量 1 L配制方法 1

29、.称量下列试剂，置于l L烧杯中。NaCl175.3 gNa3citrate·2H2O88.2 g 2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3滴加14 N HCl，调节pH值至7.0后，加去离子水将溶液定容至1 L。 4.高温高压灭菌后，室温保存。2、20×SSPE Buffer 组份浓度 3.0 M NaCl，0.2 M NaH2PO4，0.02 M EDTA配制量 1.L配制方法 1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。NaCl175.3 gNaH2PO4·H2O27.6 gNa2EDTA·2H2O7.4 g 2.向烧杯中加入约800

30、ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.加NaOH调节pH值至7.4(约6.5 ml的10 N NaOH)。 4.加去离子水将溶液定容至l L。 5.高温高压灭菌后，室温保存。3、50 X DenhardtS溶液 1%(W/V)Ficoll 400(菲可400/水溶性聚蔗糖400)1%(W/V)Polyvinylpyrrolidone(聚维酮/聚乙烯吡咯烷酮)1%(W/V)BSA组份浓度配制量 500 ml配制方法 1.称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。Flcoll 4005 gPoLyvlnylpyrrolldone5 gBSA5 g 2.加去离子水约400 ml，充分搅拌溶解 3.加去离子

31、水将溶液定容至500 ml。 4.用0.45µm滤膜过滤后，分装成每份25 ml。 5.-20保存。4、0.5 M磷酸盐Buffer 组份浓度 0.5 M Na2HPO4。 配制量 l L 配制方法 1.称量134 g Na2HPO4·7H2O置于l L烧杯中。 2.加入约800 ml的去离子水充分搅拌溶解。 3.加入85%的H3PO4(浓磷酸)调节溶液pH值至7.2。 4.加去离子水定容至1 L。 5.高温高压灭菌后，室温保存。5、Salmon DNA (鲑鱼精DNA) 组份浓度 10 mg/ml Salmon DNA配制量 约100 ml配制方法 1.称取鲑鱼精DNA

32、2 g置于500 ml烧杯中，加入约200 ml的TE Buffer。 2用磁力搅拌器室温搅拌24 h，溶解后加入4 ml的5 M NaCl，使其终浓度为0.1 M。 3.用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次。 4.回收水相溶液后，使用17号皮下注射针头快速吸打溶液约20次，以切断DNA。 5.加入2倍体积的预冷乙醇进行乙醇沉淀。 6.离心回收DNA，溶解于100 ml去离子水中。测定溶液的OD260值。 7.计算溶液的DNA浓度后，稀释DNA溶液至10 mg/ml。 8.煮沸10min后，分装成小份(1 ml/份)。-20保存。 9.使用前在沸水浴中加热5min后，迅速冰浴冷却。6、DNA变性缓冲液

33、 组份浓度 1.5 M NaCl，0.5 M NaOH 配制量 1 L 配制方法 1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。NaCl87.7 gNaOH20 g 2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。7、预杂交液/杂交液 (DNA杂交用) 组份浓度6×SSC(或SSPE)5×Denhardts0.5%(W/V)SDS100 µg/mlSalmon DNA 配制置 100 ml配制方法 1.称量下列试剂，置于200 ml烧杯中。20×SSC(或SSPE)30 ml50×Denhardts

34、10 ml10% SDS 5 ml10 mg/ml Salmon DNA1 mldH2O54 ml2.充分混匀后，使用0.45 µm滤膜滤去杂质后使用。8、膜转移缓冲液(Western杂交用) 组份浓度 39 mM Glycine，48 mM Tris，0.037%(W/V)SDS，20%(V/V)甲醇配制量 1 L配制方法 1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。Glycine2.9 gTris5.8 gSDS0.37 g 2.向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.加去离子水将溶液定溶至800 ml后，加入200 ml的甲醇。 4.室温保存。9、TBST Buffe

35、r(Western杂交膜清洗液) 组份浓度 20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，0.05%(V/V)Tween 20配制量 1 L配制方法 1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。NaCl8.8 g1 M Tris-HCl(pH8.0)20 ml 2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.加入0.5 ml Tween 20后充分混匀。 4.加去离子水将溶液定容至l L后，4保存。10、封闭缓冲液(Western杂交用)组份浓度 5%(W/V)脱脂奶粉/TBST Buffer配制量 100 ml配制方法 1.称5 g脱脂奶粉加入到100 ml TBST Buff

36、er中，充分搅拌溶解。 2.4保存待用(本封闭液应该现配现用)。11、预杂交液/杂交液(RNA杂交用)6×SSC(或SSPE)5×Denhardts0.5%(W/V)SDS100 g/mlSalmon DNA50%(V/V)Formamlde组份浓度配制量 100 mL配制方法 1.称量下列试剂，置于200 ml烧杯中。20×SSC(或SSPE)30 ml50×Denhardts10 ml10% SDS5 ml10 mg/ml Salmon DNA1 mlFormamide(甲酰胺)50 mldH2O4 ml2.充分混匀后，使用0.45µm滤膜

37、滤去杂质后使用。五、分子生物学实验常用培养基的配制方法1、Ampicillin（100mg/ml） 组份浓度 100mg/ml Ampicillin 配制量 50mL 配置方法 1. 称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。 2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 用0.22m滤膜过滤除菌。 4. 小份分装（1mL/份）后，-20保存。 2、IPTG （24mg/mL） 组份浓度 24mg/mL IPTG 配制量 50mL 配置方法 1. 称量1.2g IPTG置于50mL离心管中。 2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 用0.

38、22m滤膜过滤除菌。 4. 小份分装（1mL/份）后，-20保存。 3、X- Gal （20mg/mL） 组份浓度 20mg/mL X- Gal 配制量 50mL 配置方法 1. 称取1g X-Gal置于50mL离心管中。 2. 加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 小份分装（1mL/份）后，-20保存。 4、LB培养基 组份浓度 1（W/V）Tryptone，0.5（W/V）Yeast Extract，1（W/V）NaCl 配制量 1L 配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中 Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl

39、10g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。 4. 高温高压灭菌后，4保存。 5、LB/Amp培养基 组份浓度1（W/V）Tryptone；0.5（W/V）Yeast Extract；1（W/V）NaCl；0.1mg/mL Ampi 配制量 1L 配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中 Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl 10g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1L。

40、5. 高温高压灭菌后，冷却至室温。 6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）后均匀混合。 7. 4保存。 6、TB培养基 组份浓度 1.2（W/V）Tryptone；2.4（W/V）Yeast Extract；0.4（V/V）Glycerol； 17mM KH2PO4；72mM K2HPO4 配制量 1L 配置方法 1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。 2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。 Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL 3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

41、4. 加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。 5. 待溶液冷却至60以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。 6. 4保存。 7、TB/Apm培养基 组份浓度 1.2（W/V）Tryptone；2.4（W/V）Yeast Extract； 0.4（V/V）Glycerol； 17mM KH2PO4； 72mM K2HPO4；0.1mg/mL Ampicillin 配制量 1L 配置方法 1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。溶解2.31g KH2PO4和2.54g K2HPO4于90mL的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至1

42、00mL，高温高压灭菌。 2. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。 Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL 3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 4. 加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。 5. 待溶液冷却至60以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1mL Ampicillin（100mg/mL）。 6. 均匀混合后4保存。 8、SOB培养基 组份浓度 2（W/V）Tryptone； 0.5（W/V）Yeast Extract； 0.05（W /V） NaCl；2.5mM KCl； 10mM MgCl2 配制量 1L 配

43、置方法 1. 配制250mM KCl溶液。 在90mL的去离子水中溶解1.86g KCl后，定容至100mL。 2. 配制2M MgCl2溶液。在90mL的去离子水中溶解19g MgCl2后，定容至100mL，高温高压灭菌。 3. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。 Tryptone 20g Yeast Extract 5g NaCl 0.5g 4. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 5 量取10mL 250 mM KCl溶液，加入到烧杯中。 6. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。 7. 加入去离子水将培养基定容至1L。 8. 高温高压灭菌后，4保存。 9.

44、使用前加入5mL灭菌的2M MgCl2溶液。 9、SOC培养基 组份浓度 2（W/V）Tryptone；0.5（W/VYeast Extract； 0.05（W /V）NaCl ；2.5mM KCl；10mM MgCl2； 20mM葡萄糖 配制量 100mL 配置方法1. 配制1M葡萄糖溶液。将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中，充分溶解后定容至100mL，用0.22m滤膜过滤除菌。 2. 向100mL SOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL，均匀混合。 3. 4保存。 10、2×YT培养基 组份浓度 1.6（W/V）Tryptone， 1（W/V）Yeast Extract，

45、0.5（W/V）NaCl 配制量 1L 配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。 Tryptone 16g Yeast Extract 10g NaCl 5g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加1N KOH，调节pH值至7.0。 4. .加水离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压后，4保存。 11、b×broth培养基 组份浓度 2（W/V）Tryptone， 0.5（W/V）Yeast Extract，0.5（W/V）MgSO47H2O 配制量 1L 配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。 Tryptone 20g Yeast Extract 5g MgSO47H2O 5g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加1N KOH，调节pH值至7.5。 4. .加水离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压后，4保存。 12、NZCYM培养基 组份浓度 0.5（W/