药品微生物限度检验方法标准操作规程

1、标准操作规程标 题：药品微生物限度检睑方法标准操作规程生效日期年 月 日页次:1/12编号：SOPQC-028-01颁发部门：质量管理部新i修i原文件号：编制：部门审核：Q/W核：批准：分发部门：QC目的：建立一个药品微傥限度检验标准操H规程。范围：适用于本企业生产的所有品种，本企业所有洁净生产区域，QC散生物限度检查室 洁净工件 等。责任者：QCE任、陆员。规程：本规程引至中国药典2000年版。1 .概述：微生物限度检查系指非规定潮制剂及其原辅料受到微生物污染艘的T中检查方法， 包括染菌量及控制菌的检查或公司QCS无菌操作室，用于微生物限度检查。无菌操作室的管理城 用制度见本文附录一。2 .

2、抽样：供试品应安批号随即抽样，一般揄羊量为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍。 抽样时，凡发现有异常可疑的棉，应缺陷选用疑问的样品，他机构损伤明显破裂的包装不得作为 样品，凡已能从药品、瓶口（然内侧及瓶口周围）外观看出长蛾、长霉、虫蛀及变质的药品，可直 接判为不合格，无需要再抽样檐。3 .供试品的保存：似品在检验之前，应保存在阴凉干燥处以防供试品中的污染菌因假条 件所引起致死、损伤或繁殖。迎品在检验之前，应该保持原有包燃态，严禁开启，包装已开启的 样品不得作为供试品。4 .检查：4.1. 使用设备：电热恒温培养箱电热&水温箱、试管、刻度吸管、量筒、三角瓶、培养皿、 试管架、注射器、针头、注

3、射陶、研钵、75%酒精棉球、紫外灯665n碘长）。4.2. 检查的全过程应严格遵守无脚作，严防再污染。使用设备、仪器、及及无菌操作室常 用的消毒、灭菌方法见本文附录：。除另有规定外，供试品制备成他液后，均在均匀状态取样。制 成供试液后，应该佃0分钟内注皿操作完毕。标准操作规程标 题药品微生物限度检验方法标准操作规程颁发部门质量管理部编号SOPQC- 028- 01页次：2/124.3. 培养：除另有规定外本检查法中细菌培养温度为30-35C,霉菌、酵母菌堤养温度为25 28C,控制菌培养温则36 1C,检验结果的报告以e 1ml或lOcrfe；单位。4.4. 复检4.4.1. 菌数测定不合格者

4、应复检,控制菌检查以一次检出为准，不再复试，但应 保留检出菌株一个月备查。4.4.2. 以复试项下不合格项目为准，作单项复试。复试需另取同批号样品，测定 2次。4.4.3. 复试报告，以3次测定结果的算术平均值报告。4.5. 检验报告4.5.1. 检验报告以1g 1ml或10crm单位。4.5.2. 测定菌数报告，以每次测定结果全部平均值报告。4.5.3. 控制菌按检验结果报告，如未检出控制菌时，报告为“按规定抽样检验结 果未检出XXK”，如抽样中任意一样品要检出控制菌时报告为“按规定抽样，检出 XXM,不符合药品微生物限度标准：4.6. 培养基、试药及稀稀用勺相关内容见本文件附录三。4.7.

5、 供试液的制备：按侦S液的理化特性与生物学特性可采取湎的方法制成供试液。4.7.1. 供试品的取样及滋事项供试品取样应有一定数量以使检验结果具有代表性，正常的供试品一般每批应卿抽取两厢戈 两盒以上的包装单位，检验时欲应分取两瓶(盒)以上的样品共10g或10ml供试品在检验前，应严格保持包装的原有状态，不得启开，并放在阴凉干燥处，防止微生物再繁 殖，以免影响检验结果，凡已搬包装启开，则无代表性应另取样。供试品稀释后须在1-2小时内操作完毕，防止微生物繁殖或死:。供试品稀释戒供试淞后，应在均匀状态下取样 凡因抑菌或不溶于水的剂型，其阿品应作特殊 处理后进行检验。4.7.2. 液体供试品：取供试品1

6、0m|力口入稀释剂90ml中，混匀，作为供试液。油剂可加适！聚山梨酯80,混匀，吸取相10g或10ml供试品，标准操作规程标 题药品微生物限度检验方法标准操作规程颁发部门质量管理部编号SOPQC- 028- 01页次：3/12再稀释成100m作为供试液；合剂(莉旨含王桨或蜂蜜者，下同)可用供调作为供试液。4.7.3. 固体、半固体或黏稠液供谛X称取供试品10g,置0.9%6菌氯化钠溶液100ml中，用匀 浆仪或其他适宜的方法洒后作为供试液。在制备过程中，必要时可加适量聚山梨酯80,并适当加温, 但不应超过45c。(1)非水溶性供试品取供试品5g (5ml)加入含溶化的无菌司盘80 5gA单硬脂

7、酸甘油酯34 聚山梨酯80 10g混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢恸口入45c左右的0.9%菌氯化钠液约80ml,边加边搅半，使供试品充分乳化，作为供试液（1 ：20）（2）肠溶胶囊（片）供试品：称取供13c品10g,置含无菌磷酸盐缓中液（pH6. 100ml的锥形瓶 内，于45c水浴中，保温、振摇，使溶解，作为供试液。（3）含抑菌成分的供试品照中国药典200珀三版附录“微生物限度检测法”制就试液。4.8. 对照用菌液4.8.1. 控制菌检查均立作相应已知菌的对照试验，才肠杆菌的对照菌株为CMCC（B）44 102其 余对照菌株见中国药典2003版附录。取相应菌株的营养H斗面新鲜培养物

8、1白金耳，接种至营将J汤培养基内，培养18-20小时后, 稀释至1 ： 1C6。对照菌的加入量为50-100个。4.8.2. 菌种短期保右法：凡使用菌种，一般接种在顺琼脂斜面上，经37c培养18 20小时， 取出在5c的冰箱内保存备用时T,每月接种传代一次，数周内不致E亡。4.9. 检查法4.9.1. 检查前的准备：A.用具的洗涤与灭菌。试管：使用过的试管经消毒后，将培养基倒出，用清洁液洗刷，用纯化水冲洗 5次，倒立，晾干备用。灭菌前，用棉塞塞上管口，牛皮纸包紧，扎紧。标准操作规程标 题药品微生物限度检验方法标准操作规程颁发部门质量管理部编号SOPQC- 028- 01页次：4/12B.吸管：

9、使用过的吸管用清洁液浸泡数分钟后，用纯化水冲流一5次，晾干， 备用。灭菌前，在吸管上端距0.5cm处塞入约2cm左右的适当疏松棉花，用牛皮纸裹 紧。C.研钵：使用过的研钵用清洁液洗刷后，用纯化水冲洗数次，晾干备用。灭菌前， 用牛皮纸将钵体和锤包裹。D.培养皿：使用过的培养皿经消毒后，将培养基倒出，用清洁液洗涮，用水冲洗 4-5次，倒立、晾干各用。灭菌前，根据消毒器内经大小用牛皮纸包数个培养皿孔 紧。将上述包好的用具，放在121c的高压蒸汽消毒器中，灭菌30min后，放入微生 物限度检查室定点位置，备用。将所有已灭菌的培养皿、三角瓶、吸管（1ml、l0ml）、稀释剂及供试品等移至 无菌室内。每次

10、试验所用物品必须事先计划,准备足够用量，避免操作中人出操作间。 将全开启无菌室紫外线杀菌灯和空气过滤装置并使其工俏0min操作人员用肥皂洗 手，关闭紫外线杀菌灯，进入缓冲间，换工作鞋，再用0.1%新洁尔灭或用75%乙醇棉 球擦手，并擦拭供试品瓶、盒、袋等的开口周围，待干后将供试品瓶、盒、袋启封,启封后先检查瓶盖内侧及瓶口周围有无生霉、长螭的迹象，对肉眼可见疑似者，若经 证实为生霉、长螭即可判定为不合格，无须继续检验。4.9.2. 细菌、霉菌、酵书菌计数。4.9.2.1. 检查程序（如图1）。.操作步骤a.?供试液制备：经阴性硼联样后，按各类制剂备供试液的虺（见10供试液的制备）制备。b.稀释及

11、取样稀释：取1ml吸管1支，吸取混匀的1 ： 10供试液（或原液，1: 20供试液）1ml,在离稀释齐液 面上约1cm#,测管壁注入装有9ml的稀释剂的试管中，混匀成：100（或1 ： 10, 1 ： 20。的稀释 液。吸样：用上述吸管分另吸1 ： 10供试液（或原液,1 ： 20供试液）1ml,注入23个平皿中，以另 一支1ml吸管，按上述操乍下一级的稀释与吸取。c.注皿与干燥标准操作规程标 题药品微生物限度检验方法标准操作规程颁发部门质量管理部编号SOPQC- 028- 01页次：5/12（图1）供1闿培养融他和450水件,1当1007匿名,稀稀便匀1匀1入平皿后,以上述培养与顷注入平皿,

12、每平皿约15 nff（端每平皿，使样泗格基混匀后, 也岬d凝。培凝固后，在净化条件下开盖倒置燥时间一般在3h左右丁燥，减少平板表瞰分，防止菌落蔓延生长，干，1干树寸间计入培养时1川0100d.培养：将上述恸豳H于适宜温度（戈嫌勖，培养。细菌T300352；S#482小时，霉菌于 2528：培养 72 2e.菌落计数：小口寸。用肉眼直接计数，布记或在菌落计数隹上空带 然后用于51帅放大镜检查，是否贵漏若平板上有2个或者2个以上的菌初叠，仃分辨时分骅,仍以1个或2个以上菌落计数标 题药品微生物限度检验方法标准操十规程颁发部门质量管理部编号S嘴悬疑8-01页次：6/12平板上有片状菌落或花斑样菌落蔓

13、延生长以F平板受到污染的情况，该平板计数无效。当同一稀释级使用2个平板时，应采,2个1恪菌卡数的均值为平i平板年落数,若2个平板菌 落数相差仅只倍以上时，该稀骏不宜采，也括2个平板菌类均在15个以下的情况（15个以 卜两平板菌落数允许幅囿4 25 29, 412. 514 613 714。f.菌数报告规则细菌一般宜选取平埒2板菌落数30300可的稀释级，作为菌数方算的依据，霉菌宜选取平均菌数 在3010心间的稀释级他菌数计算的依据。若在1个稀释级的平均平板菌檄处于30300（30100之间时，将该稀释级摘落数乘以稀释 倍数，为报告菌数。若有2个稀释级的平均平板菌檄处在30300（20100之间

14、时，按下式计算两级比值。当比值2时，以两级阐落数均值为报告底数；当比值2时，以低稀释级平均平板菌落乘琳释倍数为报告菌数。若有3个稀数级的平均平板菌燃在3030030100之间时，采用后2个稀释级廿算级间比值。当比值2时，以两级阐落数均值为报告底数；当比值2时，以低稀招平均平板菌落数乘琳释倍数为报告菌数若各稀释级平均平榜菌数均在300以上，按最高的稀释级的平均平糊落数第六以稀释倍数为艮 告菌数，或适当增中稀释数，曲测定后报告结果。若各稀释那平均阡板菌落数均不在30300句，其中稀释级的平均平糊落数大于300,相邻稀 释的平均平板菌数又小90时,以最接近30或300的稀释级平均平板菌檄乘以稀释倍数

15、为报告菌 数。若各稀释邛均平板菌客数均小于30小时,按最彳研释级的平均平板菌微（乘以糕释倍数为报告菌 数，但若用京液为供试液，当1 ： 10稀释级与原液的平均平板菌客数相等或大R寸，应以培养厮释 法测定。标准操作规程标 题药品微生物限度检验方法标准操作规程颁发部门质量管理部编号SOPQC- 028- 01页次：7/12g.培养基稀释法取供试液 原液或1 ： 10, 1 ： 100供试液）3份，每份各1 ml,分别注入5个平皿内（每皿为2 ml）,每个平皿倾注营养琼脂培养基J15 ml,混的菌落数，典！3组数据，府释级平均菌落数J、于1时，则报告菌数为汗10个。h.报告数书写（细菌数怖规则举例）

16、原液供试品稀释倍数10-110 -2 10 -31级间比值菌落数报告数书写一1365164 20一1640016X 1。或 16000一2760295 461.63775038X 1。或 38000一2890271 602.2P 2710027X 16或 27000一239202 351.72760028X 1。或 28000一236196 42一1960020X 16或 20000一/、可计 4650 513 一:5130051X16或 51000一/、可计 305 12一3050030X 1。或 30000一241912一240124X 10 或 24022.3277-一P 27027X

17、1d或 270一0600一6 10注：(1)菌落数在100个以内时，博测数书写报告。(2)菌落数大于100时，取二位有嫩字，第三位数按有效数字处理规格处理，为简便计，也可 用不着0的指数报告。(3)不得按计数规则艮告的情况：空白对照邛板有菌生长，表明培养基已被花染；各稀释级平板上生产的菌落绯任何10倍递增稀释规律，菌数显示海L ；同一稀释级的两个平板上生长的菌落数均在15个以上，但菌数才朕一隹以上；菌落蔓延4覆盖整个平板无法计数；出现以上情况，该淑验数据不得计数报告。4.9.3. 大肠杆菌检查法；标准操作规程标 题药品微生物限度检验方法标准操作规程颁发部门质量管理部编号SOPQC- 028-

18、01页次：8/12检验程序(见附页)供试品1MUG +1 MUJ .1 -判检出大肠杆菌赧告判未检出 大题杆菌判检出大肠杆菌报告普逋倒汤喇招斜面FTUG者紫外砂l察，显灵光为阳性， 表尚为阳性，NIUG-MUJ背靛基质显色.NIUG管向j液 面是城理虹为阳性,I+；液面呈试剂本 身色为阴性，L革三民融邑喧险靛落国脸甲舂试验V-P试抽报告操作步骤标准操作规程标 题药品微生物限度检验方法标准操作规程颁发部门质量管理部编号SOPQC- 028- 01页次：9/12取胆盐乳桃培养基3份，每份100ml, 2份分别加入规定量的俄液，其中1份加入对!I菌50100 个作阳性对照第3份加入与供试液等量的稀释

19、液作阴性对照培养1824、时（必要可延至48小时）。 阴性对照应无菌生长。取上述份的培养物各0.2ml,分别接种5 ml MU鼾养基管内培养，加U于5 小时与24小时，取未接种的MUG1养基管作本底对照,将各管置365nm?外光下现黑阳性对照例 现荧光，MUG3性。供试液的MUGF呈现荧光，MUG3性；无荧光，MUGm生。然后加数滴靛基质试液 于MUGF内，液面呈玫者为阳性，呈试剂本色为阴性。当阴性对照呈阴性，阳性对照正常生长，供试皮胆盐乳糖培养基培养液澄明，并训无菌生长， 判未检出大肠杆菌。供试湎UGB性，靛基质阳性，判断检出b杆菌；MUG!性，靛基质阴性，判 未检出大肠杆菌。如MUGB性、

20、靛基质阴性，或MUGI性、靛基质阳性，均应取供试液胆盐乳糖培 养基培养物划线于曙红亚甲蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板，培养8244时，如上述 供试液培养物的分离平板无菌落生长判未检出大肠杆菌。若有菌落生长,应挑选23 可疑菌落作靛基质度验4）、甲基红试验M、乙酰甲基甲醇生成试MP、枸椽酸 盐利用试验。及革兰染色、镜检，按下表规定判断结果。MU G1曙红亚甲蓝城旨IMVic结果+ +检出大肠杆菌一 一未检出大肠杆菌+ 一无长未检出大肠杆菌+ 一后菌生长-+检出大肠杆茴一 十后菌生长+ +检出大肠杆有注：、如出现+ 或出现+ ，均应重新分离菌株，再作 MUG1和IMVic试验；为革兰氏阴性杆菌。宝靛基

21、质试验（I）:取可疑菌落或斜面培养物，接种于蛋白月东水培养基中，培养 24小时，沿管壁加入靛基质试液数滴，液面呈玫瑰红色为阳性，于试剂本色为阴性。甲基红试验（M：取可颖菌数或斜面培养物，接种于磷酸盐葡萄月东水培基中，培 养48小时2小时，于管内加入甲基红指示液数滴，立即观察，呈鲜红色或橘红色为 阳性，呈黄色为阴性。标准操作规程标 题药品微生物限度检验方法标准操作规程颁发部门质量管理部编号SOPQC- 028- 01页次：10/12乙酰甲基甲醇生成试验（VP :取可疑菌落或斜面培养物,接种于磷酸盐葡萄糖 水培养基中，培养小时2小时，于每2 ml培养液中加入a-蔡酚乙醇试液1 ml,混 匀，再加4

22、0崛氧化钾溶液0.4 ml,充分振摇，在4小时内出现红色为阳性，无红色 反应为阴性。枸椽酸盐得用试验（。：取可疑菌落或斜面培养物，接种于枸椽酸盐培养基的斜 面上，一般培养，48724时，培养基斜面有菌落生长，培养基由绿色变为蓝色时为 阳性，培养基颜色无改变为阴性。革兰氏染色法、镜检：试剂；结晶紫染液：取结晶紫1.0g溶于95无醇20mL与1獐酸镂溶液80 ml 混匀静置48h备用。革兰氏碘液，先用35ml蒸储水溶解2.0g碘化钾，再加入磺片 1.0g,待全溶后，加蒸储水稀释至300ml备用。沙黄（蕃红）染液：将沙黄.25g 溶于95%醇10ml中，待全溶解后再加蒸储水至 100m|即可。染色法

23、：用接种环沾 取无菌水，置于洁净载玻片上，再挑取少许菌苔，轻轻研开，使均匀。涂片自然风干 或微热烤干，而后通过火焰23次以固定涂片。滴加结晶紫梁液,染色数分钟，水洗， 滴加磺液媒染1分钟，水洗，甩干余水，滴力95温醇脱色，约203瓶，水洗，吸 干，滴加沙黄复染液，染1分钟，水洗，待干，镜检。染色结果：革兰氏阳性菌呈蓝 紫色，阴性菌呈红色。活螭检查法：a.设备和材料：显微镜、双筒实体显微镜、放大镜、解剖针、发丝针、小毛笔、 载玻片、盖玻片、酒精灯、培养皿或小搪瓷盘（内衬黑色30嘀油水。b.蛾的形态特征：蛾的体表微小，多在1mmz下，一般呈卵圆形或才粒表、无头胸、腹界限。 幼蛾足三对，若蛾足四对，

24、成蛾足多数为四对。足通常由六节组成。口器向前突出，螯肢常呈螯钳状， 由23节组成。须肢节数因种类而异，由不得2至U5节组成，一般呈爪或钳状，偶尔为长形。有些种 类在躯全前端或两侧有 1-2对眼，躯体两侧对称，表面有被有坚硬的几丁质的板，保护其内部器布口 支持肌肉固定。体表有刚毛，瞰形状、数目及彼此长短比例和排纳置因种类而异。蛾类与蜘蛛 昆虫（书虱），外形比较帧似，因此，必须注意它们之间的主要区别见下表：标准操作规程标 题药品微生物限度检验方法标准操作规程颁发部门质量管理部 编号SOPQC- 028- 01页次：11/12特征成蛾（如腐食醋蛾）蜘蛛昆虫（如书虱）分类蝴形纲、婢螭目蛛形纲、蜘蛛目昆

25、虫纲、啮虫目足4对4对3对触角无无1对体段头、胸、腹无界限头、胸、腹无界限头、胸、政界限c.检查方法:直检法：取供试品3用肉眼观察，有无疑似活荫的白点或其它颜色的点状物，再牌一10倍放大 间或双筒实全显微镜检视，有嵋，用解剖针或发丝针或小毛笔挑花蛾放在滴一滴甘油水的载玻片 上，置显微镜下观察。漂浮法：招供试品放在盛大有饱和食盐水的扁S称量瓶或适宜的容器内，加饱和谕水至容器的 三分之二处,搅拌均匀，置10倍放大镜或双筒实伸微镜下检查，或继续加饱和食盐水领口处（为 防止盐水和样口溢出污染桌面区将上述容器放在装有适量甘油水的培养皿中）用洁净的载玻片盖生 瓶口上，使玻片与液面接触，淞液面上的漂浮物，置

26、显微镜下检查分离法：也称烤蛾法。将供试品放在物质特制的夕离器或附有孔径大小适宜的筛网的憎玻王解1 斗里，利用活蛾避镀、怕热的牲，在漏斗的广口上面放一个60100灯泡，距离药品约6cm#, 照射1-2小时。活蛾可沿头漏那J的底部细颈内壁向下爬,用小烧杯装半M油水,放在漏壮举的F 口处，收集爬出来的活蛾。活蛾卵的检验方法：蝴卵极小，一般在0.1mmz正是，呈乳白色，椭圆表或卵圆形。须用1020音入大镜或显微锹f 可查见。蛾卵常见于活蛾的周围但在未检出活蛾的样品中，亦有榔蛾卵者。一般在供试品中已经 检出活蛾的，不再进行蛾卵的检。对可疑供试品，未检出活蛾时，可注意检查活蛾卵。检验方法：可采用检验活蛾项

27、下的直检法或漂浮更检法。凡M上述两种方法检查，如觑可疑瞒 卵时，用发丝针小心挑取。取地形载玻片，在窝中央滴滴甘油水，将取物放入甘油水中，置 显微镜下检查为确证挑取物是的活蝴卵，可将上述载玻片置培养叫，力麻，于223B培养38 天,每天上、下午定时用低倍微镜观察，如在甘油水液中孵出幼畸则判断为检出活蛾卵。标准操作规程标 题药品微生物限度检验方法标准操作规程颁发部门质量管理部编号SOPQC- 028- 01页次：12/12供试品检验报告凡供试品按上述有知I型项规定检验，发现活荫者，应作检雷舌蛾报告。在供试品中未检出活瞒，但检出活蝴卵时，可按检出活蛾处理为保留阴性结果备查可将检出的蛾按下法处里保存；

28、半活蛾挑放在载玻片t,预先滴有1滴75% 乳酸溶液中，加上盖玻片。手持载玻片，在酒精灯小火焰上来由动，缓缓加热片刻，使其适当透化、 即可镜检。鉴定后的蛾体，可睐放入70醐精中保存，或适当处理。发线针的制作：取长约1.5cm的头发丝一根和长约10cm勺小金属棒一根，以头发 丝长度的一半紧贴在金属棒的一端川细棉线将其缠紧，然后粘上加拿大树脂或油漆， 晾干，即得。5.内包装材料中不易溶解的（如PVC铝箔等），取100cm剪碎，加入100ml无 菌生理盐水，浸泡后振摇，制得供试品溶液，照上述方法检验，结果以0cm报告， 细菌数不得过100个/10cm,霉菌数不得过10个/10cm,并不得检出大肠杆菌及

29、活螭。注：本文含有的附件有：无菌操作室的管理及使用制度、设备、仪器、人员及无菌操 作室常用的消毒、灭菌方法、培养基、试药及稀释剂、药品卫生检验记录、附录一：无菌操作室的管理及使用制度1. 无菌操作 室内应设有缓冲间，缓 冲间 内设有紫外灯 ， 并 备有无菌操作衣、 帽、 口罩、 拖鞋和 消毒用的洗手盆和毛巾等，入室前应严格 洗手 消毒，穿戴无菌衣帽、口罩、拖 鞋。2. 无菌室内应备有超净工作台 ， 专用 的接种棒等，以及盛有5%石碳酸水溶液 的消毒吸管筒、酒精和碘酒棉球等。无菌操作衣 帽应经常热压灭菌。3. 每次进 无菌室之 前， 须用0.1%新洁尔灭 擦拭工作台面等，用3 5%来苏尔溶液拖地

30、面，并须定期用电炉烘烤无菌室内，防止霉菌 ， 定期 做杂菌的抽验检查，要求在室内 各个角落打开琼脂平板培养基，放置30分 钟，经37培养 48小时 , 生 长的杂 菌菌 落 数平 均应在3个以下。4. 在无菌 操作前后 ，室 内应打开紫外灯照射15 20分钟，操作完 毕后应及时清洁操作室。5. 在进行 活菌，毒菌和 药品检验操作时，一切器具 和用品都 应保持无菌，不得用手直 接接触 或污染他物，防止污染，接种环 在使用前后都必须通 过火 焰 ，严 格施行烧灼灭菌，冷却后，方可 使用或收还，吸取菌液时，严禁直接用口吸 。附录二：设备、仪器、人员及无菌操 作 室常 用的消毒、灭菌方法1. 常用消

31、毒液的配制1.1.0.1%新洁尔灭溶液：称取第尔灭1g加水使成1000m即得， 用于擦拭工作台面和手消毒。1.2. 3 5%B苏尔溶液：取来苏尔30-50ml加水使成1000m即得，用于手或地面的消毒。1.3. 75%：醇棉球K 取95%勺乙醇原液78ml加水22ml混匀即得,而后将脱月制花球泡在应 用于手的消毒。1.4. 2%碘酒棉球的配制：每100ml95%酒精内先&口 1.5g碘化钾，微温肩g摇使溶解，冉力Rg 碘片， 振摇完全 溶解 后即 为 2%的碘酒液， 将脱脂 棉 球浸 泡于中即得。 用于 手、 皮肤和器械的消毒 ， 注意此液要保存于棕色瓶中。2. 玻璃器皿的洗涤2.2. 新的玻

32、 璃器皿应先用清水冲去灰 尘 杂物 ，沥干水后，浸泡的重铬酸 钾硫酸洗 液中 12小时左右，滤尽酸液，用清水冲洗干净，备 用 。2.3. 吸过细菌培养基的吸管，用后应立即浸泡在装有5%的石碳酸溶液的吸管筒内，整根吸管要全部浸泡在消毒液内12小 时以 上， 方可取出 ， 立即 用清 水 去污 物， 沥尽水 份， 放在铬 酸液中过夜，取出清水冲净，烘干备用。2.4. 装有 细菌培养物的试管、双碟及吸过 含芽 孢的强毒菌的吸管，须先经 高压灭菌，取出倾出废物，用洗洁精水刷洗，清水冲净， 烘 干备 用。2.5. 用过 的载玻片，应随即泡在3 5%的 来苏尔水溶液中，每隔数周集 中取出，用洗衣粉水煮沸，

33、洗净，清水冲洗，蒸馏水冲洗 1 2遍后 ，晾 干备用。3. 灭菌器具 的准备3.2. 棉花塞：供细菌检验用的各种试管 、三角 瓶棉 塞等均应是普通棉花包一层纱布制成，松紧应适度， 长度一般要求是塞进管中约3/5， 留 在管 外约 2/5， 使用完后随即烘干， 防霉 防尘， 变硬 无 弹性时应重新更换。3.3. 凡洗净烘干或晾干备用的检验用具、 器皿 ，均 须装入铝盒或用牛皮纸包 扎好，经121 30分钟热压灭菌后, 取出置60干燥烘 干保存备 用。4. 常规消毒 灭菌 法4.2. 将待灭菌器具置干燥箱内 ， 逐步 加热至140 160保持2小时后 再逐步 自行降至常温，方可取出，即可达到完全灭

34、菌的目的。4.3. 湿热 灭菌法高压蒸 汽灭菌是采用高压 灭菌 器 ， 根据 灭菌物品的不同，灭菌 时温度和时间也有所不同。 常用的温度和时间：a. 115 20分钟；b. 121 20 30分钟。附录三：培养基、试药及稀释剂养基、 试药及稀释剂1. 培养基1.1. 培养基制备注意事项a. 制备培养基时所用的各种玻璃器皿和分装容器、棉塞等 ，都必须经过妥善洗刷 ，洁 净无 污、干燥者，不得用 铜、 铁制容 器，可用玻璃，搪瓷器皿。b. 高压灭菌时，应将灭菌锅内的冷空气全部排除后，锅内 培养基达到100时方可关闭蒸汽阀，否则温度不足，则灭菌不彻底。c.培养所常覆的pH值，是以灭菌后所测的pH值为

35、准，因此，调节pH应让培养基冷却后再调， 用NaO调节的弱碱性培养基，高压灭怖pH可比最终要求的约高0.2左右，灭俣后基本合适。d. 制成 后的 培养基应 置冷 暗处 或冰箱内 保存 ， 一般培养基保存期 不超过两周，特殊 培养基 不超 过3 天。1.2. 营养琼脂培养基：取营养琼脂培养334g,加1000ml蒸储水，加热溶解，分装，116高压灭菌20分钟。（用于细菌记数）1.3. 玫瑰红钠琼脂培养基（虎红琼脂培养基取玫瑰红钠琼脂培养基30g,加 1000m蒸储水，加热溶解，分装，116c高压灭菌20分钟。（用于霉菌及酵母菌记数）1.4. 胆盐乳糖培养基（ BL） ： 取麦康凯琼脂培养基（ M

36、acC） 、 磷酸盐葡萄胨水培养116高压灭菌20分钟。 （用于大肠基15.8g,加1000ml蒸储水，加热溶解，分装, 杆菌检查）1.5. 蛋白月东水培养基：取蛋白月东水培养智5g,加1000ml蒸储水，加热溶解,分装，116高压灭菌20分钟。 （用于大肠杆菌检查）1.6. 4 甲基伞形酮葡萄 酸培养基（MUG）取4甲基伞形酮葡萄培养g ,加1000m蒸储水，分装,115高压灭菌20分钟。 （用于大肠杆菌检查）1.7. 曙红亚甲蓝琼脂培养基（EMB：取营养琼脂培养基100ml加热溶化后，冷至60C,按无菌操作加入灭菌的曙红钠指示液ml、20%勺乳糖溶液5ml及亚甲蓝指示液1.3 1.6ml,摇匀，倾注平皿即得。（用于大肠杆菌检查1.8. 蛋白月东水培养基：取胰蛋白月东10g氯化钠5g、水1000m混合，加热溶化， 调节pH值使灭菌后为7.3 0.1 ,分装于小试管，灭菌即得。（用于大肠杆菌检查方1.9. 磷酸盐葡萄糖胨水培养基：取胨7g、 磷酸氢二钾3.8g、 葡萄糖5g、 水 1000ml混合，微温使溶解，调节pH 值使灭菌后为7.3 0.1 ，分装于小试管，121，灭菌15 分钟即得。1.10. 枸橼酸盐培养基：取氯化钠5g、 枸橼酸钠 （无水）2g、 硫酸镁0.2g、 磷酸氢二钾1.0g、磷酸二氢镂1&水