十药品的微生物学质量控制王重振

1、第二十章-药品的微生物学质量控制王重振 副教授基础医学院微生物学教研室学习要求n掌握一般灭菌制剂的无菌检查方法、非灭菌药物的微生物总数测定方法n熟悉药品的控制菌检查方法、药品生产中防止微生物污染的主要措施n了解药品中微生物的来源和微生物引起的药物变质第一节第一节 药品生产中的微生物污染药品生产中的微生物污染1.药品中微生物的来源空气中的微生物（生产场所）水中的微生物（液体制剂）人体中的微生物（操作人员）土壤中的微生物（植物药材）原料和包装物厂房建筑和制药设备2. 微生物引起的药物变质 存在于药物中的微生物如遇到适宜的条件就能生长繁殖，使药物发生变化，造成药物变质失效（1）外在表现（味道、气味、

2、色素、沉淀、产气等）（2）判断（外在表现、微生物及其代谢产物检查）（3）药物变质的结果引起感染药物失效微生物有毒代谢产物致病第二节第二节 药品生产中防止微生物污染的措施药品生产中防止微生物污染的措施1.加强药品生产管理l国家实施GMP管理规范，对厂房与设施、设备、物料与产品等有严格要求2.药品生产的GMP验证l灭菌工艺的验证3.使用合格的防腐剂4.进行微生物学检验5.药物非临床研究质量管理规范l药物非临床安全性评价研究机构l动物、植物、微生物以及器官、组织、细胞、基因等 第三节第三节 药品的微生物学检查药品的微生物学检查一、无菌制剂的无菌检查l各种注射剂、输液、手术眼科制剂都必须保证无菌，符合

3、药典相关规定l无菌检查必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染1.薄膜过滤法（首选）直径：50mm孔径：小于0.45ml薄膜过滤法的验证供试品过滤冲洗液过滤100cfu试验菌试验菌过滤滤膜接种于培养基培养基l验证滤膜可截留试验菌，并且试验菌生长不受供试品被截留物的抑制对照1：试验菌直接接种培养基l若供试品有抑菌作用l增加冲洗量l使用中和剂或灭活剂如-内酰胺酶、对氨基苯甲酸（影响磺胺类抗生素）l更换滤膜品种l供试品的无菌检查（薄膜过滤法）供试品过滤冲洗液过滤滤膜接种于培养基若出现隐约浑浊可染色镜检，或转种新鲜培养基，或接种斜面培养基斜面培养基阳性对照：阳性对照菌阳性对照菌与滤膜共同接种培养基阴性对照

4、：溶剂和稀释液代替供试品2.直接接种法l验证试验菌试验菌培养基培养基加入供试品l验证试验菌生长不受供试品抑制对照：不添加供试品l若供试品有抑菌作用l增加培养基的用量l使用中和剂或灭活剂如-内酰胺酶、对氨基苯甲酸（影响磺胺类抗生素）l供试品的无菌检查（直接接种法）供试品培养基若出现隐约浑浊可染色镜检，或转种新鲜培养基，或接种斜面培养基斜面培养基阳性对照：阳性对照菌阳性对照菌与供试品共同接种培养基阴性对照：溶剂和稀释液代替供试品二、非灭菌制剂的微生物限度检查（一）细菌、霉菌及酵母菌计数1.平皿法l平皿法的验证l分组试验组：最低稀释级最低稀释级供试品+100cfu试验菌试验菌菌液组：100cfu试验

5、菌供试品对照组：最低稀释级供试品稀释剂对照组：稀释剂+100cfu试验菌l培养基培养基l结果判断l稀释剂对照组菌液组100%70%l（试验组供试品对照组）菌液组100%70%l若供试品有抑菌作用l供试品溶液性状允许的情况下，尽量选用薄膜过滤法l中和法中和法l培养基稀释法：每1ml的供试品可等量分注多个平皿l离心沉淀法：500转/分钟，离心3分钟，取上清检查l供试品的微生物总数测定（平皿法）不同稀释级供试品培养基阴性对照：溶剂和稀释液代替供试品2.薄膜过滤法l薄膜过滤法的验证l分组试验组：最低稀释级最低稀释级供试品+100cfu试验菌试验菌菌液组：100cfu试验菌供试品对照组：最低稀释级供试品

6、稀释剂对照组：稀释剂+100cfu试验菌l流程l供试品过滤，冲洗，试验菌过滤，接种培养基培养基l结果判断l稀释剂对照组菌液组100%70%l（试验组供试品对照组）菌液组100%70%l若供试品有抑菌作用l中和法中和法l离心沉淀法：500转/分钟，离心3分钟，取上清检查l供试品的微生物总数测定（薄膜过滤法）不同稀释级供试品过滤冲洗液过滤滤膜接种于培养基阴性对照：溶剂和稀释液代替供试品（二）控制菌检查（非灭菌制剂）（1）大肠埃希菌l分组验证组：供试液+100cfu试验菌株阳性对照：100cfu试验菌株阴性对照：稀释液检查组：供试液l增菌培养基：胆盐乳糖培养基l鉴定MUGMUG试验试验（+）和靛基质

7、试验靛基质试验（+）单阳性则接种曙红亚甲蓝琼脂曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂麦康凯琼脂，观察菌落分离、纯化、镜检、其他鉴定试验l若供试品有抑菌作用l薄膜过滤法l中和法l培养基稀释法l离心沉淀法（2）大肠菌群（埃希菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属）l分组验证组：供试液+100cfu试验菌株阳性对照：100cfu试验菌株阴性对照：稀释液检查组：供试液（0.1ml、0.01ml、0.001ml）l接种乳糖胆盐发酵管乳糖胆盐发酵管（产酸产气）l接种曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂l菌落特征相符且为革兰阴性无芽孢杆菌，接种乳糖发酵管（产酸产气）可能的大肠菌群数表可能的大肠菌群数表各供试品量的检出结果各供试

8、品量的检出结果可能的大肠菌群数可能的大肠菌群数N N（个（个/g/g或或mlml）0.1g0.1g或或0.1ml0.1ml0.01g0.01g或或0.01ml0.01ml0.001g0.001g或或0.001ml0.001ml10103 310102 2N N10103 31010N N10102 21010（3）沙门菌（4）铜绿假单胞菌（5）金黄色葡萄球菌（6）梭菌（7）白假丝酵母菌增菌培养基、鉴别方法各异（三）活螨的检查l一旦检出即判供试品不合格（四）微生物限度标准（总数、控制菌）l无菌制剂l口服制剂：不得检出大肠埃希菌l含动物脏器：不得检出沙门菌l局部给药制剂：均不得检出金黄色葡萄球菌和

9、铜绿假单胞菌l鼻及呼吸道给药制剂：不得检出大肠埃希菌l阴道、尿道给药制剂：不得检出梭菌和白念珠菌谢谢！谢谢！无菌检查试验菌株无菌检查试验菌株大肠埃希菌-CMCC（B）44102金黄色葡萄球菌-CMCC（B）26003枯草芽孢杆菌-CMCC（B）63501生孢梭菌-CMCC（B）64941白念珠菌-CMCC（F）98001黑曲霉-CMCC（F）98003无菌检查培养基无菌检查培养基硫乙醇酸盐流体培养基：培养需氧菌、厌氧菌改良马丁培养基：培养真菌对于非水溶性供试品，可在培养基中加入表面活性剂如聚山梨酯80斜面培养基斜面培养基无菌检查阳性对照菌无菌检查阳性对照菌l无抗菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品

10、：金黄色葡萄球菌l抗革兰阴性菌为主的供试品：大肠埃希菌l抗厌氧菌的供试品：生孢梭菌l抗真菌的供试品：白念珠菌微生物总数测定试验菌株微生物总数测定试验菌株大肠埃希菌-CMCC（B）44102金黄色葡萄球菌-CMCC（B）26003枯草芽孢杆菌-CMCC（B）63501白念珠菌-CMCC（F）98001黑曲霉-CMCC（F）98003微生物总数测定培养基微生物总数测定培养基营养琼脂培养基：细菌玫瑰红钠琼脂培养基：霉菌及酵母菌酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基：酵母菌稀释铺板稀释铺板常见干扰物的中和剂或灭活方法常见干扰物的中和剂或灭活方法 干扰物 可选用的中和剂或灭活方法 戊二醛 亚硫酸氢钠 酚类、乙醇、吸附物 稀释法 醛类 稀释法、甘氨酸、硫代硫酸盐 季铵类化合物（QACs）、对羟基苯甲酸酯 卵磷脂、聚山梨酯 汞类制剂 亚硫酸氢钠、巯基乙酸盐、硫代硫酸盐 双胍类化合物 卵磷脂 碘酒、洗必泰类 聚山梨酯 卤化物 硫代硫酸盐 乙二胺四乙酸（EDTA ) 镁或钙离子 磺胺类 对氨基苯甲酸 -内酰胺类抗生素 -内酰胺酶 MUGMUG试验试验l大肠埃希菌能合成-