无菌药品检查要点-On-Line-QA

1、无菌药品无菌药品GMP认证检查要点认证检查要点无菌药品的概念及分类无菌药品的概念及分类无菌药品的概念无菌药品的概念l无菌药品是要求没有活体微生物存在的药品，无菌药品是要求没有活体微生物存在的药品，也就是法定药品标准中有无菌检查项目的药品。也就是法定药品标准中有无菌检查项目的药品。l为了达到产品中没有活体微生物，在生产过程为了达到产品中没有活体微生物，在生产过程中，需要采取各种方法来去除制品中原有的微中，需要采取各种方法来去除制品中原有的微生物和防止制品受到微生物的污染。生物和防止制品受到微生物的污染。无菌药品的概念及分类无菌药品的概念及分类无菌药品的分类无菌药品的分类 l最终灭菌的无菌药品最终

2、灭菌的无菌药品耐热的产品，能通过热处理的方式来去除制品耐热的产品，能通过热处理的方式来去除制品中可能存在的微生物，通常采用湿热灭菌法。中可能存在的微生物，通常采用湿热灭菌法。如，大容量注射剂、小容量注射剂如，大容量注射剂、小容量注射剂l非最终灭菌的无菌药品非最终灭菌的无菌药品在工艺过程中，完成内包装后没有一个单独的在工艺过程中，完成内包装后没有一个单独的灭菌过程，其无菌性主要依赖整个过程中保持灭菌过程，其无菌性主要依赖整个过程中保持对各个工序的无菌控制，避免生产过程中的微对各个工序的无菌控制，避免生产过程中的微生物污染。生物污染。如，粉针剂、冻干粉针剂、部分小容量注射剂、如，粉针剂、冻干粉针剂

3、、部分小容量注射剂、滴眼剂、无菌原料药等滴眼剂、无菌原料药等无菌药品的概念及分类无菌药品的概念及分类无菌药品的生产方法的选择无菌药品的生产方法的选择 l首选最终灭菌以保证产品的无菌特性；首选最终灭菌以保证产品的无菌特性；l当灭菌可能会造成副产物等问题时，尽可当灭菌可能会造成副产物等问题时，尽可能从工艺上创造条件，使灭菌成为可行；能从工艺上创造条件，使灭菌成为可行；l由于热不稳定性，应使用一种替代方法：由于热不稳定性，应使用一种替代方法：除菌过滤和除菌过滤和/无菌生产。无菌生产。非最终灭菌无菌药品的基本特征非最终灭菌无菌药品的基本特征低安全低安全高成本高成本灭菌工艺的选择灭菌工艺的选择 产品能否

4、产品能否121121湿热灭菌湿热灭菌1515分钟分钟 产品能否湿热灭菌产品能否湿热灭菌F F0 088分钟，分钟，达到达到SAL10SAL106 6产品药液能否除菌过滤产品药液能否除菌过滤无菌原料、无菌配制、无菌原料、无菌配制、无菌灌封无菌灌封选用湿热灭菌选用湿热灭菌1211512115分钟分钟药液除菌过滤和药液除菌过滤和无菌灌封无菌灌封否否 是是 否否 是是 否否 是是 使用湿热灭菌使用湿热灭菌F F0 088分钟分钟无菌药品生产中的污染来源无菌药品生产中的污染来源人员人员 人是无菌药品生产中的主要污染源，在管理比较人是无菌药品生产中的主要污染源，在管理比较到位，生产设备自动化程度较好，操作

5、人员素质到位，生产设备自动化程度较好，操作人员素质较高的企业，人员操作所致的污染率超过较高的企业，人员操作所致的污染率超过70%水源性微生物水源性微生物 绝大多数为革兰氏阴性菌，不会形成芽孢，不耐绝大多数为革兰氏阴性菌，不会形成芽孢，不耐热。其代谢产物及细胞的尸体及碎片均属细胞内热。其代谢产物及细胞的尸体及碎片均属细胞内毒素的污染源毒素的污染源空气中的微生物空气中的微生物 基本为革兰氏阳性菌，有可能会形成芽孢使其耐基本为革兰氏阳性菌，有可能会形成芽孢使其耐热性增大热性增大无菌药品生产的特殊要求无菌药品生产的特殊要求关键区域和关键表面：关键区域指无菌产关键区域和关键表面：关键区域指无菌产品或容器

6、品或容器/密封件所暴露的环境区域；关密封件所暴露的环境区域；关键表面是与无菌产品或容器键表面是与无菌产品或容器/密封件相接密封件相接触的表面。触的表面。生产环境：通常应在生产环境：通常应在100级洁净区或万级级洁净区或万级背景下的局部背景下的局部100级洁净区。级洁净区。操作人员：根据工艺规定的环境要求，穿操作人员：根据工艺规定的环境要求，穿着洁净工作服或无菌工作服着洁净工作服或无菌工作服无菌工作服式样及穿戴方式无菌工作服式样及穿戴方式 无菌药品生产的特殊要求无菌药品生产的特殊要求原料及内包装材料：进入无菌区前，应根原料及内包装材料：进入无菌区前，应根据材料的性质对其采取除菌、灭菌和去热据材料

7、的性质对其采取除菌、灭菌和去热原处理。原处理。惰性气体、压缩空气等介质：直接接触药惰性气体、压缩空气等介质：直接接触药品的均应经除菌过滤达到无菌状态。品的均应经除菌过滤达到无菌状态。生产设备与工器具：应能有效地进行在线生产设备与工器具：应能有效地进行在线或离线的清洗和灭菌。或离线的清洗和灭菌。无菌药品生产的特殊要求无菌药品生产的特殊要求清洁工具：无菌药品生产环境中的各种表清洁工具：无菌药品生产环境中的各种表面清洁中使用的器具工具，应能够根据工面清洁中使用的器具工具，应能够根据工艺要求有效地清洁灭菌或消毒处理。艺要求有效地清洁灭菌或消毒处理。消毒剂：应有相应的除菌或其他处理措施。消毒剂：应有相应

8、的除菌或其他处理措施。 如：无菌室内使用的如：无菌室内使用的75%酒精应经除酒精应经除菌过滤后使用。菌过滤后使用。厂房的检查要点厂房的检查要点无菌药品厂房检查的基本内容无菌药品厂房检查的基本内容无菌药品生产厂房与设施是实施药品无菌药品生产厂房与设施是实施药品GMP、保证无菌药品质量的先决条件，其布局、设保证无菌药品质量的先决条件，其布局、设计和建造应有利于避免交叉污染、便于清洁计和建造应有利于避免交叉污染、便于清洁及日常维护及日常维护结合具体生产工艺，分清无菌操作区域与洁结合具体生产工艺，分清无菌操作区域与洁净区域的联系与区别净区域的联系与区别 不同洁净级别区应设相应的洁具间，清洁用不同洁净级

9、别区应设相应的洁具间，清洁用具不得跨区使用具不得跨区使用厂房设计、建造的原则厂房设计、建造的原则无菌生产设计就是为了减少在生产中对暴无菌生产设计就是为了减少在生产中对暴露的物料的潜在污染露的物料的潜在污染 l人、物流一定要合理，以减少不必要的活动对人、物流一定要合理，以减少不必要的活动对暴露产品、容器、包装材料和环境所造成的潜暴露产品、容器、包装材料和环境所造成的潜在污染。设备的设计安装安排应合理，使得操在污染。设备的设计安装安排应合理，使得操作简单易行。作简单易行。l无菌室的人员数量应最少，人流的设计应能够无菌室的人员数量应最少，人流的设计应能够减少人员在无菌室的穿越。减少人员在无菌室的穿越

10、。 l设备的设计应尽能减少人员数量以及人员操作设备的设计应尽能减少人员数量以及人员操作时的活动量对环境的污染时的活动量对环境的污染 厂房设计、建造的原则厂房设计、建造的原则l产品应在合理的洁净区条件下进行运输产品应在合理的洁净区条件下进行运输 l无菌生产中各个相互联系的房间要维护无菌生产中各个相互联系的房间要维护好各个房间的独立性，减少动态条件下好各个房间的独立性，减少动态条件下的相互干扰的相互干扰工艺设备和系统要装配有清洁用配件和阀工艺设备和系统要装配有清洁用配件和阀门门在在100100级级无菌生产区域内设置地漏是不合无菌生产区域内设置地漏是不合适的适的 关键区域与关键表面的要求关键区域与关

11、键表面的要求洁净区的建筑材料应易于清洗和消毒，房洁净区的建筑材料应易于清洗和消毒，房间内表面应无裂缝，墙与地面的连接处应间内表面应无裂缝，墙与地面的连接处应采用圆弧角。地面、墙壁、顶棚材质应坚采用圆弧角。地面、墙壁、顶棚材质应坚硬、光滑、易于清洗。顶棚与硬、光滑、易于清洗。顶棚与HEPA过滤过滤器边框之间的缝隙应能够保证严密，满足器边框之间的缝隙应能够保证严密，满足无菌条件，防止污染无菌条件，防止污染 不应该存放不必要的物料和设备不应该存放不必要的物料和设备 设备的水平面以及支架上应不易积聚灰尘，设备的水平面以及支架上应不易积聚灰尘，在关键区域内的设备不应影响气流的方向，在关键区域内的设备不应

12、影响气流的方向，应能确保气流的单向流应能确保气流的单向流 洁净度级别比较洁净度级别比较WHO（GMP）美国美国（209E）美国美国（习惯分类）（习惯分类）ISO/TC（209）EEC（GMP）AM3.5100ISO 5ABM3.5100ISO 5BCM4.510 000ISO 7CDM6.5100 000ISO 8DWHO GMP 2002 标准标准级别级别静态静态动态动态最大允许粒子数最大允许粒子数/立方米立方米最大允许粒子数最大允许粒子数/立方米立方米0.5-5.0m5.0m0.5-5.0m5.0mA3 500035000B3 5000350 0002 000C350 0002 0003

13、500 00020 000D3 500 00020 000不作规定不作规定不作规定不作规定注：新标准分为动态及静态，差一个级别；注：新标准分为动态及静态，差一个级别；A A级没有要求连续微粒测试级没有要求连续微粒测试引自引自WHOWHO技术报告技术报告902902，20022002WHO GMP 2002 微生物指标微生物指标级别级别空气样空气样CFU/m3沉降碟沉降碟( 90mm)CFU/4小时小时接触碟接触碟( 55mm)CFU/碟碟5指手套指手套CFU/手套手套A3333B10555C1005025D20010050注：沉降碟的暴露时间，一般注：沉降碟的暴露时间，一般4 4小时，我国为小

14、时，我国为0.50.5小时小时 引自引自WHOWHO技术报告技术报告902902，20022002FDA对洁净区划分的标准对洁净区划分的标准2004洁净区级别洁净区级别(0.5(0.5m m尘粒数尘粒数/立立方英尺方英尺) )ISOISO名称名称0.5 0.5 m m尘粒数尘粒数/立方米立方米浮游菌浮游菌纠偏限度纠偏限度 (cfu/m(cfu/m3 3 ) )沉降菌沉降菌纠偏限度纠偏限度 ( (90mm; 90mm; cfu/4h)cfu/4h)1001005 53,5203,5201 11 1100010006 635,20035,2007 73 310,00010,0007 7352,00

15、0352,00010105 5100,000100,0008 83,520,0003,520,0001001005050 所有级别均依据生产活动时在邻近暴露物料所有级别均依据生产活动时在邻近暴露物料/ /物品处测试的数据物品处测试的数据 浮游菌、沉降菌纠偏限度表示建议的环境质量水平。企业也可根据作业或浮游菌、沉降菌纠偏限度表示建议的环境质量水平。企业也可根据作业或分析方法的类型确定微生物纠偏措施标准分析方法的类型确定微生物纠偏措施标准 引自引自Guidance for Industry Sterile Drug Products Produced by Guidance for Industr

16、y Sterile Drug Products Produced by Aseptic Processing Aseptic Processing Current Good Manufacturing Practice, FDA Current Good Manufacturing Practice, FDA中国中国 GMP（1998 修订）修订）洁洁 净净 级级 别别尘粒数尘粒数 / 立方米立方米微生物最大允许数微生物最大允许数 0.5m 5m浮游菌浮游菌CFU /立方米立方米沉降菌沉降菌CFU/皿皿 ( 90 mm 半半 小小 时时 )100 3 50005110 000 350 0002

17、 0001003100 000 3 500 00020 00050010300 000 10 500 00060 000100015我国百级标准采用了国际标准中我国百级标准采用了国际标准中B B级（乱流百级）的限度标准级（乱流百级）的限度标准标准没有阐明对气流组织的要求标准没有阐明对气流组织的要求关键操作区空气流向控制要求比较关键操作区空气流向控制要求比较洁净度洁净度级别级别WHO美国美国欧盟欧盟中国中国A100A100空气流向空气流向单向流单向流单向流单向流单向流单向流无要求无要求风速风速0.45m/s20%0.45m/s20%产粉尘的操产粉尘的操作区风速应作区风速应更高更高 0.36-0.

18、54m/s 无要求无要求洁净区压差控制要求比较洁净区压差控制要求比较WHO美国美国欧盟欧盟中国中国不同级别不同级别相邻房间相邻房间的压差的压差10-15Pa10-15Pa10-15Pa10-15Pa10-15Pa10-15Pa 5 5PaPa其它压差其它压差洁净区过滤洁净区过滤空气的送风空气的送风应能确保在应能确保在任何运行状任何运行状态下对周围态下对周围低级别区保低级别区保持正压及气持正压及气流方向，并流方向，并有足够的自有足够的自净能力净能力 无菌操作间无菌操作间对相邻非洁对相邻非洁净区操作间净区操作间应始终保持应始终保持正压（如至正压（如至少少12.5Pa12.5Pa）洁净区过滤洁净区过

19、滤空气的送风空气的送风应能确保在应能确保在任何运行状任何运行状态下对周围态下对周围低级别区保低级别区保持正压及气持正压及气流方向，并流方向，并有足够的自有足够的自净能力净能力 洁净区与室洁净区与室外大气的静外大气的静压差压差 10 10PaPa洁净区环境监控要求比较洁净区环境监控要求比较WHO美国美国欧盟欧盟中国中国关键操作关键操作区的尘粒区的尘粒为控制各级别的洁净为控制各级别的洁净区操作时的尘粒数，区操作时的尘粒数，应对尘粒进行监测应对尘粒进行监测每一生产班次应定期每一生产班次应定期进行监控；进行监控；粒子计数探头的安放粒子计数探头的安放位置应能取到有代表位置应能取到有代表性的样品性的样品

20、应对应对A级区的空气粒子级区的空气粒子进行连续测定，并建议进行连续测定，并建议对对B级区也连续进行测级区也连续进行测定定 洁净室洁净室(区区)内空内空气的微生物数和气的微生物数和尘粒数应定期监尘粒数应定期监测，监测结果应测，监测结果应记录存档。记录存档。洁净室洁净室(区区)在静在静态条件下检测的态条件下检测的尘埃粒子数、浮尘埃粒子数、浮游菌数或沉降菌游菌数或沉降菌数必须符合规定，数必须符合规定，应定期监控动态应定期监控动态条件下的洁净状条件下的洁净状况。况。关键操作关键操作区的微生区的微生物物无菌操作时，应频繁无菌操作时，应频繁对微生物进行动态监对微生物进行动态监测；测；关键操作结束后，应关键

21、操作结束后，应对表面和人员的微生对表面和人员的微生物进行监测；物进行监测；应制定微生物监控的应制定微生物监控的警戒和纠偏标准，以警戒和纠偏标准，以监控空气质量的趋势监控空气质量的趋势关键区出现微生物污关键区出现微生物污染时，要进行必要的染时，要进行必要的调查调查无菌操作时，应频繁对无菌操作时，应频繁对微生物进行动态监测；微生物进行动态监测；除在生产过程中需进行除在生产过程中需进行微生物监控外，系统验微生物监控外，系统验证、清洁和消毒等操作证、清洁和消毒等操作后，也应进行微生物监后，也应进行微生物监控；控；应对尘粒和微生物监控应对尘粒和微生物监控制定适当的警戒和纠偏制定适当的警戒和纠偏标准标准关

22、键操作关键操作区的压差区的压差应设送风故障报警系应设送风故障报警系统；统；压差十分重要的毗邻压差十分重要的毗邻级别区之间应安装压级别区之间应安装压差表并定期记录压差差表并定期记录压差每一班操作过程中，每一班操作过程中，房间的压差应连续监房间的压差应连续监控并经常记录。所有控并经常记录。所有报警应有记录，超过报警应有记录，超过设定限度的各种偏差设定限度的各种偏差应进行调查。可列入应进行调查。可列入批记录中批记录中应设送风故障报警系应设送风故障报警系统；统；压差十分重要的毗邻压差十分重要的毗邻级别区之间应安装压级别区之间应安装压差表；差表；压差数据应定期记录压差数据应定期记录或者归入有关文档中或者

23、归入有关文档中无要求无要求洁净生产区域的卫生设施洁净生产区域的卫生设施无菌操作区内不应设置清洗间和带水池的无菌操作区内不应设置清洗间和带水池的洁具间。洁具间。清洁用具应定期清洗或消毒清洁用具应定期清洗或消毒无菌操作百级区不得设置地漏，无菌操作无菌操作百级区不得设置地漏，无菌操作万级区应避免设置水池和地漏。万级区应避免设置水池和地漏。洁净厂房卫生要求洁净厂房卫生要求无菌洁净室的送、回风过滤器的框架不得无菌洁净室的送、回风过滤器的框架不得采用脱屑、产尘、长菌的材质。无菌操作采用脱屑、产尘、长菌的材质。无菌操作区不得设置可开启式窗户。区不得设置可开启式窗户。无菌检查室应按无菌操作区管理，应在万无菌检

24、查室应按无菌操作区管理，应在万级环境下的局部百级超净工作台上进行，级环境下的局部百级超净工作台上进行，不得与生物检定、微生物限度检查、污染不得与生物检定、微生物限度检查、污染菌鉴别和阳性对照试验使用同一实验室。菌鉴别和阳性对照试验使用同一实验室。工艺用辅助用房的要求工艺用辅助用房的要求无菌原料药内包装材料的最终处理环境应无菌原料药内包装材料的最终处理环境应为万级为万级非最终灭菌的无菌原料药内包装材料的最非最终灭菌的无菌原料药内包装材料的最终处理后的暴露环境应为百级或无菌万级终处理后的暴露环境应为百级或无菌万级背景下的局部百级。背景下的局部百级。无菌操作区墙面与地面之间宜成弧形，便无菌操作区墙面

25、与地面之间宜成弧形，便于清洁。于清洁。万级无菌操作间不应设清洁间和清洁用具万级无菌操作间不应设清洁间和清洁用具间间最终灭菌药品厂房检查要点最终灭菌药品厂房检查要点 物料处理应在万级洁净度条件下进行，目物料处理应在万级洁净度条件下进行，目的是使微生物和尘埃微粒数较低。的是使微生物和尘埃微粒数较低。配料可在配料可在1010万级洁净度条件下进行，前提万级洁净度条件下进行，前提条件是在工艺过程的其他步骤中有降低污条件是在工艺过程的其他步骤中有降低污染可能的手段。染可能的手段。灌装可在灌装可在1 1万级洁净度条件下进行。万级洁净度条件下进行。非最终灭菌药品厂房检查要点非最终灭菌药品厂房检查要点严格体现出

26、未经消毒灭菌处理的物料不可严格体现出未经消毒灭菌处理的物料不可能进入无菌室内能进入无菌室内 经过消毒灭菌处理后的物料应直接出现在经过消毒灭菌处理后的物料应直接出现在无菌操作区域内，不应该再经过非无菌操无菌操作区域内，不应该再经过非无菌操作区而受到再污染作区而受到再污染设备的检查要点设备的检查要点工艺设备的基本要求工艺设备的基本要求无菌药品工艺设备与药品直接接触部分的材无菌药品工艺设备与药品直接接触部分的材质，表面应光洁、平整、易清洗或消毒、耐质，表面应光洁、平整、易清洗或消毒、耐腐蚀、不应脱屑、生锈、发霉、长虫，不与腐蚀、不应脱屑、生锈、发霉、长虫，不与药品发生化学变化，不得吸附和污染药品，药

27、品发生化学变化，不得吸附和污染药品，耐于热灭菌、湿热灭菌或化学灭菌耐于热灭菌、湿热灭菌或化学灭菌 压缩空气、氮气或真空设备应配备不得释放压缩空气、氮气或真空设备应配备不得释放纤维物质的过滤器或除尘器纤维物质的过滤器或除尘器设备、容器和工艺管道应有恰当的清洗、灭设备、容器和工艺管道应有恰当的清洗、灭菌方法，不能移动的设备应有在线清洗和灭菌方法，不能移动的设备应有在线清洗和灭菌的设施菌的设施工艺设备的基本要求工艺设备的基本要求安装位置应便于设备生产操作、清洗、消毒、安装位置应便于设备生产操作、清洗、消毒、灭菌、维护、保养，需要清洗和灭菌的零部灭菌、维护、保养，需要清洗和灭菌的零部件应易于拆装；件应

28、易于拆装； 塑料容器和胶塞在处理和贮存过程中应控制塑料容器和胶塞在处理和贮存过程中应控制可能产生的热源污染，因此应作去热源处理。可能产生的热源污染，因此应作去热源处理。尽可能缩短清洗塑料容器和胶塞到灭菌之间尽可能缩短清洗塑料容器和胶塞到灭菌之间的时间间隔。的时间间隔。 设备的检查要点设备的检查要点适用于产品的生产、清洁、消毒或灭菌适用于产品的生产、清洁、消毒或灭菌尽可能采用密闭系统尽可能采用密闭系统合理布置和安装合理布置和安装关键参数控制和记录仪表的校准关键参数控制和记录仪表的校准设备的确认、维护和维修设备的确认、维护和维修设备的清洁、消毒或灭菌设备的清洁、消毒或灭菌l共用设备应有防止交叉污染

29、的措施共用设备应有防止交叉污染的措施密闭系统示例密闭系统示例工艺用水的检查要点工艺用水的检查要点水处理设施及其分配系统的设计、安装和水处理设施及其分配系统的设计、安装和维护应能确保供水达到适当的质量标准。维护应能确保供水达到适当的质量标准。水系统的运行不应超越其设计能力。水系统的运行不应超越其设计能力。注射用水的生产、贮存和分配方式应能防注射用水的生产、贮存和分配方式应能防止微生物生长，例如，在止微生物生长，例如，在7070以上保持循以上保持循环环水源、水处理设施及水的化学和生物学污水源、水处理设施及水的化学和生物学污染状况应定期监测，必要时还应监测细菌染状况应定期监测，必要时还应监测细菌内毒

30、素。监测结果以及所采取纠偏措施的内毒素。监测结果以及所采取纠偏措施的记录应予归档记录应予归档生产工艺生产工艺生产工艺生产工艺配制配制过滤过滤无菌灌装无菌灌装冻干冻干灭菌工艺灭菌工艺配制工序的检查要点配制工序的检查要点操作区的设置和洁净度级别操作区的设置和洁净度级别配料处方配料处方称量操作称量操作称量记录称量记录防止污染和交叉污染的措施防止污染和交叉污染的措施配制区域的洁净度级别配制区域的洁净度级别应单独设置，注意称量区的空气流向，防应单独设置，注意称量区的空气流向，防止粉尘扩散止粉尘扩散应根据产品的特性设定相应的洁净度级别应根据产品的特性设定相应的洁净度级别欧盟无菌药品的欧盟无菌药品的GMP附

31、录规定：附录规定：l原辅料和大多数产品的准备原辅料和大多数产品的准备/配制应至少在配制应至少在D级区进行，以降低尘粒和微生物污染的风险，级区进行，以降低尘粒和微生物污染的风险，适于过滤及灭菌操作适于过滤及灭菌操作l微生物污染风险比较高时，如容易长菌的产品、微生物污染风险比较高时，如容易长菌的产品、配制后要等相当长时间方可灭菌的产品或因故配制后要等相当长时间方可灭菌的产品或因故主要不在密闭容器内进行配制操作的产品，配主要不在密闭容器内进行配制操作的产品，配制必须在制必须在C级环境中进行级环境中进行称量称量必须按照注册批准的处方配料必须按照注册批准的处方配料称量中应特别注意防止交叉污染称量中应特别

32、注意防止交叉污染l一次称量一种物料一次称量一种物料l通常先称量辅料，后称量原料药通常先称量辅料，后称量原料药l活性炭应在单独区域中称量，称量后放在水溶活性炭应在单独区域中称量，称量后放在水溶液中液中衡器衡器l使用前应检查校准使用前应检查校准称量记录称量记录l最好采用客观的记录最好采用客观的记录l如实记录衡器的读数如实记录衡器的读数l复核复核过滤工序的检查要点过滤工序的检查要点过滤器的安装位置过滤器的安装位置过滤器的相关信息过滤器的相关信息过滤器完整性试验的方法过滤器完整性试验的方法过滤前后的完整性试验和记录过滤前后的完整性试验和记录过滤器的更换、消毒或灭菌过滤器的更换、消毒或灭菌发现过滤器出问

33、题后的处理发现过滤器出问题后的处理过滤器的安装过滤器的安装除菌过滤用过滤器通常使用除菌过滤用过滤器通常使用2 2只串联方式，只串联方式，确保过滤的可靠性确保过滤的可靠性可能情况下，应在紧挨灌装点的位置，用可能情况下，应在紧挨灌装点的位置，用除菌过滤器将所有药液，特别是大容量注除菌过滤器将所有药液，特别是大容量注射剂进行除菌过滤射剂进行除菌过滤采用无菌制造工艺时，除菌过滤操作区域采用无菌制造工艺时，除菌过滤操作区域不得设在无菌操作区内，可通过管道传送不得设在无菌操作区内，可通过管道传送滤液滤液过滤器的完整性试验过滤器的完整性试验过滤器的相关信息应具有可追溯性过滤器的相关信息应具有可追溯性完整性试

34、验的合格标准应参照供应商的说完整性试验的合格标准应参照供应商的说明书设定明书设定应在过滤前、过滤后分别测试应在过滤前、过滤后分别测试测试方法测试方法l起泡点试验起泡点试验l前进流试验前进流试验微生物挑战性试验由供应商做，以避免污微生物挑战性试验由供应商做，以避免污染产品染产品无菌灌装检查要点无菌灌装检查要点关键操作区和生产设备关键操作区和生产设备l清洁、消毒或灭菌清洁、消毒或灭菌无菌灌装用各类物料、器具的准备或灭菌无菌灌装用各类物料、器具的准备或灭菌处理处理生产用气体生产用气体人员的无菌操作人员的无菌操作装量控制装量控制培养基模拟灌装验证培养基模拟灌装验证无菌检验样品的取样无菌检验样品的取样检

35、查时应不能影响正常的生产检查时应不能影响正常的生产培养基模拟灌装验证培养基模拟灌装验证目的目的l确定实际生产中（如开机前的调试、加入无菌确定实际生产中（如开机前的调试、加入无菌原辅材料、无菌连接、灌装和密封）产品污染原辅材料、无菌连接、灌装和密封）产品污染的概率的概率基本思路基本思路l应综合考虑生产线可能造成污染的各种因素，应综合考虑生产线可能造成污染的各种因素，并能对工艺受控的状态做出准确的评估并能对工艺受控的状态做出准确的评估l应尽可能模拟实际生产的无菌操作，可能时，应尽可能模拟实际生产的无菌操作，可能时，应包括最差条件的相关活动，以挑战无菌操作应包括最差条件的相关活动，以挑战无菌操作培养

36、基模拟灌装验证培养基模拟灌装验证常规的工艺验证试验包括培养基模拟灌装验证试验，最少常规的工艺验证试验包括培养基模拟灌装验证试验，最少在线灌装三批，每批的批量见下表，每瓶产品均应进行无在线灌装三批，每批的批量见下表，每瓶产品均应进行无菌检查，判断该试验是否合格的标准见下表菌检查，判断该试验是否合格的标准见下表: 培 养 基 灌 装 试 验 的 批 量 与 判 断 合 格 的 标 准培 养 基 灌 装 试 验 的 批 量 与 判 断 合 格 的 标 准批量（瓶）批量（瓶）3 0 0 0 4 7 5 0 6 3 0 0 7 7 6 0允许染菌允许染菌 0 1 2 3 的数量（瓶）的数量（瓶）灭菌工艺

37、的选择灭菌工艺的选择湿热灭菌法湿热灭菌法干热灭菌法干热灭菌法除菌过滤法除菌过滤法环氧乙烷灭菌法环氧乙烷灭菌法辐射灭菌法辐射灭菌法无菌药品常用灭菌工艺的比较无菌药品常用灭菌工艺的比较类别类别Fo值值微生物存活概率微生物存活概率要点说明要点说明过度过度杀灭法杀灭法Fo1210-6热稳定性产品热稳定性产品以杀灭微生物作为实现无菌的手段以杀灭微生物作为实现无菌的手段残存残存概率法概率法8Fo710-3不能加热的产品不能加热的产品不能除去病毒、支原体等微生物不能除去病毒、支原体等微生物LRV=log reduction value 过滤对数下降值一过滤对数下降值一般上游为般上游为107下游为下游为1，则

38、，则LRV=7由于操作较多，最终产品达到的无菌保证水由于操作较多，最终产品达到的无菌保证水平远低于除菌过滤的水平平远低于除菌过滤的水平影响湿热灭菌效果的因素影响湿热灭菌效果的因素待灭菌产品中含有微生物的种类和数量待灭菌产品中含有微生物的种类和数量待灭菌产品的包装形式待灭菌产品的包装形式待灭菌产品的装载方式和装载数量待灭菌产品的装载方式和装载数量湿热灭菌工艺条件湿热灭菌工艺条件湿热灭菌设备湿热灭菌设备无菌保证水平无菌保证水平SAL无菌保证水平无菌保证水平（Sterility Assurance Sterility Assurance LevelLevel）l表示物品被灭菌后的无菌状态表示物品被灭

39、菌后的无菌状态l按国际标准，湿热灭菌法的无菌保证值不得低按国际标准，湿热灭菌法的无菌保证值不得低于于10-6，即灭菌后微生物存活的概率不得大于，即灭菌后微生物存活的概率不得大于百万分之一。百万分之一。灭菌工艺验证的必要性灭菌工艺验证的必要性灭菌产品的无菌保证不能依赖于最终产品灭菌产品的无菌保证不能依赖于最终产品的无菌检验，而是取决于生产过程中采用的无菌检验，而是取决于生产过程中采用合格的灭菌工艺、严格的合格的灭菌工艺、严格的GMPGMP管理和良好管理和良好的无菌保证体系的无菌保证体系灭菌工艺的验证是无菌保证的必要条件灭菌工艺的验证是无菌保证的必要条件灭菌工艺经过验证后，方可正式用于生产灭菌工艺

40、经过验证后，方可正式用于生产国内企业灭菌工艺验证常见缺陷国内企业灭菌工艺验证常见缺陷无包装规格无包装规格无装载方式无装载方式未对每一种产品每一种包装规格的每一种装载方未对每一种产品每一种包装规格的每一种装载方式进行验证式进行验证采用留点温度计监测温度采用留点温度计监测温度无温度探头校准记录无温度探头校准记录验证的灭菌工艺与实际工艺不一致验证的灭菌工艺与实际工艺不一致未验证最差灭菌条件未验证最差灭菌条件设定的验证合格标准达不到无菌保证水平（设定的验证合格标准达不到无菌保证水平（SAL）10-6生物指示剂使用不规范生物指示剂使用不规范灭菌工艺检查要点灭菌工艺检查要点生产环境和待灭菌产品中含有微生物

41、的种类和数生产环境和待灭菌产品中含有微生物的种类和数量研究和监控量研究和监控待灭菌产品的包装形式、装载方式和装载数量待灭菌产品的包装形式、装载方式和装载数量灭菌工艺条件灭菌工艺条件灭菌设备灭菌设备l关键控制参数的控制和记录仪表的校准关键控制参数的控制和记录仪表的校准l设备维护和维修设备维护和维修灭菌的记录灭菌的记录灭菌工艺的验证灭菌工艺的验证l选用的生物指示剂选用的生物指示剂l热分布试验，找出最冷点位置热分布试验，找出最冷点位置无菌检验样品的取样无菌检验样品的取样无菌检查无菌检查无菌检查的局限性无菌检查的局限性无菌的定义无菌的定义l理论上：无菌没有任何活的微生物理论上：无菌没有任何活的微生物l

42、实际上：我们无法证明产品中没有活微生物存在实际上：我们无法证明产品中没有活微生物存在无法对整批产品进行无法对整批产品进行100%100%检验检验l无菌检验的结果只是一个基于无菌检验的结果只是一个基于“可能性可能性”的判断的判断无菌检验用培养基有其局限性无菌检验用培养基有其局限性l只进行细菌和真菌的检验只进行细菌和真菌的检验l对实验结果的判定是基于对实验结果的判定是基于“是否在培养基中生长是否在培养基中生长”l培养条件（如温度和时间）是有限的培养条件（如温度和时间）是有限的我们的工作环境及操作是在相对无菌的状态我们的工作环境及操作是在相对无菌的状态美国非肠道药物学会注射剂无菌测试结果美国非肠道药

43、物学会注射剂无菌测试结果试验目的：不合格的可能性试验目的：不合格的可能性(%)试验批量：试验批量：60,000支支试验方法：按美国药典无菌测试方法试验方法：按美国药典无菌测试方法真实的不合格率真实的不合格率测试测试20支样品支样品不合格的可能性不合格的可能性测试测试40支样品支样品不合格的可能性不合格的可能性118.2%33.1%564.2%87.2%1596.1%99.8%3099.9%100.0%上述无菌测试结果的启示上述无菌测试结果的启示含有少量微生物污染产含有少量微生物污染产品的批次也有可能品的批次也有可能“通通过过”无菌检验无菌检验一批产品的染菌率越低，一批产品的染菌率越低，根据无菌

44、检验的结果来根据无菌检验的结果来判定整批产品的无菌，判定整批产品的无菌，其风险就越大其风险就越大如何用无菌检验来证明整批产品无菌如何用无菌检验来证明整批产品无菌要求有一个取样计要求有一个取样计划来涵盖整个批号划来涵盖整个批号有足够的取样量和有足够的取样量和检验量检验量选择适用的培养基选择适用的培养基采用经验证的无菌采用经验证的无菌检验方法检验方法良好的环境监控良好的环境监控无菌检验的取样计划无菌检验的取样计划何时取何时取? ? 如何取如何取? ?何处取？何处取？l无菌灌装产品无菌灌装产品批开始、结束及重大故障和调整后批开始、结束及重大故障和调整后最多最多2424小时为一批小时为一批 USP U

45、SP 每天灌装的产品应分别做无菌检验每天灌装的产品应分别做无菌检验l最终灭菌产品最终灭菌产品从灭菌柜中最冷点取样从灭菌柜中最冷点取样对经不同灭菌柜灭菌的产品应分别进行无菌检验对经不同灭菌柜灭菌的产品应分别进行无菌检验l连续工艺连续工艺产品被连续地单个灭菌，如：用电子束灭菌，一批产品被连续地单个灭菌，如：用电子束灭菌，一批不大于不大于2424小时小时无菌检验的取样计划无菌检验的取样计划取多少样品（检验数量）？取多少样品（检验数量）？l取决于产品的批量取决于产品的批量 CP2005CP2005年版大于500500：取2%2%或2020支支（取少），用于每个培养基检验小于等于100100：取10%1

46、0%或4 4个（取多），用于每个培养基检验l取决于产品的数量取决于产品的数量CP2005CP2005年版剂量小于1毫升，就要取4040支l同时要考虑检验耗损和复试的需要同时要考虑检验耗损和复试的需要无菌检验的取样计划无菌检验的取样计划每个样品测试多少数量（检验量）？每个样品测试多少数量（检验量）？l药典上规定了每次检验的供试品总量药典上规定了每次检验的供试品总量装量小于装量小于 1ml1mlCP2005CP2005年版年版 每支样接入每个培养基为全量每支样接入每个培养基为全量装量大于等于装量大于等于 1ml1mlPh.EurPh.Eur 半量，但不超过半量，但不超过 20ml 20ml CP2

47、005CP2005年版年版 半量，半量， 2 - 500ml2 - 500ml无菌检验用培养基无菌检验用培养基培养基的种类培养基的种类l用于真菌培养的改良马丁培养基，培养温度用于真菌培养的改良马丁培养基，培养温度23-2823-28l用于厌氧和需氧细菌培养的硫乙醇酸盐流体培用于厌氧和需氧细菌培养的硫乙醇酸盐流体培养基，培养温度养基，培养温度30-3530-35培养基的适用性检查培养基的适用性检查l要有足够的灵敏度要有足够的灵敏度l能够支持代表性菌种的生长能够支持代表性菌种的生长培养基的储存和控制培养基的储存和控制l储存条件和有效期储存条件和有效期USP29无菌检验阳性对照菌的选择无菌检验阳性对

48、照菌的选择名称英名备注白色念珠菌Candida albicans ATCC10231真菌/酵母 黑曲霉菌Aspergillus niger ATCC16404真菌/霉菌 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis ATCC6633需氧，条件致病菌，除炭疽热类芽孢杆菌会引起大部分动物生病以外，本属内其它种都不会引起动物生病，但是Bacillus subtilis 却会引起眼睛伤害，G+.铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa ATCC9027需氧，G-,致病菌 又叫绿脓杆菌金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus ATCC6538需氧，G+,是致病菌 梭状芽

49、孢杆菌Clostridium sporogenesATCC7955厌氧，G+,非致病菌产品中常见污染菌从日常监控污染菌中分离企业自己分离无菌检验方法无菌检验方法主要有两种方法主要有两种方法l直接接种法直接接种法l薄膜过滤法薄膜过滤法注意事项注意事项l采用直接接种法时采用直接接种法时应考虑产品是否有应考虑产品是否有抑菌性抑菌性无菌检验的方法学验证无菌检验的方法学验证验证目的：验证所采用的方法和条件是否验证目的：验证所采用的方法和条件是否适合于供试品的无菌检查。即确认供试品适合于供试品的无菌检查。即确认供试品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性以被充分

50、消除到可以忽略不计。其抑菌活性以被充分消除到可以忽略不计。 选用的培养基能够促进各种微生物的选用的培养基能够促进各种微生物的生长。生长。消除供试品中抑菌的方法不能损害微消除供试品中抑菌的方法不能损害微生物，如生物，如冲洗、中和、酶处理等方法。冲洗、中和、酶处理等方法。无菌检验的环境控制无菌检验的环境控制应在无菌环境下进行应在无菌环境下进行洁净度（尘粒和微生物）应与无菌生洁净度（尘粒和微生物）应与无菌生产厂房一致产厂房一致控制要求与生产区域一致，如：空调、控制要求与生产区域一致，如：空调、更衣、清洁、缓冲、定期验证更衣、清洁、缓冲、定期验证应有环境监控程序并根据实际情况设应有环境监控程序并根据实际情况设定纠偏限度定纠偏限度隔离器隔离器样品表面的消毒处理样品表面的消毒处理在样品进入无菌区前应进行消毒处理在样品进入无菌区前应进行消毒处理在进行样品外表面消毒时，应确保样品的在进行样品外表面消毒时，应确保样品的完整性完整性 考虑所用消毒液渗透过样品容器的可能性，考虑所用消毒液渗透过样品容器的可能性，如：透过塑料容器如：透过塑料容器消毒液应无菌消毒液应无菌阳性检验结果的调查和处理阳性检验结果的调查和处理无菌检验所用的设备及环境的微生物监控无菌检验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查法要求结果不符合无菌检查法要求回顾无菌