CpG-ODN的免疫刺激作用

1、CPG概念为非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸重复序列，即CpG CpG 基序。一种免疫佐剂作用靶点TLR9TLR9细胞免疫，体液免疫Th1免疫应答 慢性乙型肝炎患者细胞免疫低下 HBVHBV免疫耐受，持续感染 肿瘤微小残留病的清除CPG提高PBMC中Th1细胞Th1Th1占淋巴细胞百分比CPG提高PBMC中Th1 、Tc1细胞百分率*：与对照组比较，P0.05 CPG刺激BPMC分泌细胞因子*：与对照组比较，P0.05 CPG诱导PBMC杀伤靶细胞1. 收集CPG活化的PBMC2. 细胞毒性实验：效应细胞为CPG活化的PBMC；靶细胞为CFSE预染的K562细胞。对照组效应细胞为未经CPG活化的

2、PBMC。3. 效：靶20：1，混合培养2h。流式细胞术检测靶细胞死亡率。CPG诱导PBMC杀伤靶细胞CFSE染色靶细胞1.浓度为5mol/ L 的CFSE （2羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯）工作液2.取对数生长期的靶细胞浓度108/ L3.细胞悬液与等体积CFSE 工作液混合4.37 孵育10 min。5.离心洗涤两次后6.悬浮细胞备用CFSE染色靶细胞实验结果 CpG活化PBMCPBMC对K562细胞的杀伤作用(N=5)(N=5)CPG活化PBMC 16.855.14 %对照组8.622.83 %*：与对照组比较，P0.05 CIK细胞杀伤靶细胞CIK细胞杀伤靶细胞研究背景 通过主动免疫

3、、过继特异性免疫、过继非特异性免疫等方式，清除慢性乙肝患者体内残存的HBV，达到治疗效果。研究背景 B B淋巴细胞具有抗原递呈细胞的性质，同时具有CpG-ODNCpG-ODN受体：TLR-9TLR-9。本研究探讨CpG-ODNCpG-ODN诱导B淋巴细胞成为高效APC，使之具有类似于树突状细胞功能的可行性。TOLL受体TOLL受体在血细胞中的表达活化B细胞负载核心抗原1.磁珠分选B淋巴细胞2.CPG活化B淋巴细胞3.核心抗原肽:FLPSDFFPSV-FITC4.流式细胞仪、荧光显微镜检测抗原负载状况磁珠分选B细胞分选前B B细胞 7.89%7.89% 分选后B B细胞 89.6%89.6% 活

4、化B细胞负载抗原肽Marker% GatedAll100.00M141.34M1活化B细胞负载核心抗原荧光显微镜观察B细胞负载HBcAg18-27肽 APC与T细胞作用机制CPG对B细胞抗原递呈相关分子的作用研究1.CpG2006、2216由上海生物工程技术服务有限公司合成，全硫代化修饰2.对照组为含10%FCS的RPMI1640外周血PBMC，细胞量107/孔，37、5%CO2、48小时3.实验组加入CpG2006或CpG2216，终浓度均为1umol/mL，余同上CpG提高淋巴细胞CD69表达 T T淋巴细胞 B B淋巴细胞 CD69表达率（%）*：与对照组比较，P0.05 B细胞CD80

5、、CD86表达对照组加CPG-ODN组加CPG-ODN组CpG提高B细胞表面CD80、CD86的表达 CD80 CD80 CD86CD86CD80、CD86表达率（%）*：与对照组比较，P0.05 B细胞MHC-、MHC-表达对照组加CPG-ODN组CpG提高B细胞表面MHC-、MHC-的表达 MHC-MHC-MHC表达量（MFI）*：与对照组比较，P0.05 活化B细胞诱导CTL1. 负载了抗原的活化B细胞与淋巴细胞混合培养(含IL-2的RPMI1640培养液).2. 收集细胞,以五聚体技术检测HBV特异性CTL.3. 实验组特异性CTL为0.500.19%，对照组为0.200.10%。 特

6、异性CTL诱导Pro5TM MHC Pentamers检测对照组和实验组HBcAg18-27抗原特异性CTL（Q2-1区）。前者为对照组（未加APC），后者为实验组（加APC）。结论1.CpG能够活化B细胞，对T细胞无明显的作用2.CpG能够提高B细胞表面抗原递呈相关分子的表达3.CPG诱导PBMC产生高水平的IFN-4.CPG诱导淋巴细胞向Th1、Tc1分化5.CPG增强PBMC对K562细胞的杀伤作用6.通过B细胞介导, CPG可诱导特异性CTLCFSE染色靶细胞1.浓度为5mol/ L 的CFSE （2羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯）工作液2.取对数生长期的靶细胞浓度108/ L3.细胞悬液与等体积CFSE 工作液混合4.37 孵育10 min。5.离心洗涤两次后6.悬浮细胞备用CIK细胞杀伤靶细胞研究背景 B B淋巴细胞具有抗原递呈细胞的性质，同时具有CpG-ODNCpG-ODN受体：TLR-9TLR-9。本研究探讨CpG-ODNCpG-ODN诱导B淋巴细胞成为高效APC，使之具有类似于树突状细胞功能的可行性。TOLL受体CpG提高B细胞表面MHC-、MHC-的表达 MHC-MHC-MHC表达量（MFI）*：与对照组比较，P0.05 活化B细胞诱导CT