测序实验室操作手册

1、测序实验室操作手册文件编号：版次:编制:审核:批准:日期:文件更改记录版次号修改页码修改后页数更改内容提要日期A0/第一次发行2014-03-22测序实验室标准操作手册、健康中心实验室介绍 2二、实验室管理 22.1 实验室行为管理 32.2 实验室出入管理 42.3 实验室清洁卫生管理 62.4 仪器试剂使用管理 102.5 实验室安全管理 112.6 实验室紧急事故处理 142.7 实验室物料管理 15三、实验室保密制度管理 17四、测序实验室仪器操作规程 17超净台操作规程 18 微量台式离心机使用规程 20 移液枪使用维护规程 21 冰箱使用维护规程 26PCR 仪使用规程 29五、高

2、通量测序标准操作规程 325.1 模板制备标准操作规程 325.2 上机测序标准操作规程 41六、测序人员考核标准 47七、实验室管理考核标准 48八、测序实验室工作时间表 50九、附录 50、健康中心实验室介绍健康中心实验室主要分为6个部分：血浆分离室、核酸提取室、文库构 建 室、测序室、QC检测区、仓库。1. 样品处理室：用于血液样品的接收和分离，内部配备台式冷冻离心机、台式 微量离心机、超净工作台、防护设施等。2. 核酸提取室：用于样品中核酸的提取和纯化，内部配备h超净工作台、垂直混匀仪等。3. 文库构建室：用于测序文库的制备与纯化，内部配备台式微量离心机、超净 工作台、台式小离心机、冰

3、箱等。4. 测序室：用于高通量测序过程中样品的制备，芯片的处理以及上机操作等，内部配备台式微量离心机、超净工作台 、高通量测序仪、涡旋混匀仪、冰箱 等5. QC检测区：用于核酸样品、文库样品的浓度及质量检测，配备了 PCR仪、 台式小离心机、Qubit荧光计、2100生物分析仪。6. 仓库：用于所有物料及耗材的存储。、实验室管理1. 按要求做好防护工作，进不同实验室穿不同的实验服，戴好胸卡。2. 各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等不可 混用。3. 严格按技术员等级使用相应仪器。4. 实验室出现任何意外状况，见者都需上报。5. 非本实验室工作人员，未经许可不得入内；外

4、来人员如参观、维修人员要通 过经理同意并在专人陪同下完成。6. 做好实验的各项清洁整理工作。2.1 实验室行为管理2.1.1 严格遵守实验室的上下班作息表： 8:30 上班， 17:30 下班， 11:40-12:40 午休时间。上下班按规定打卡。2.1.2 早上 8:40 之前做好实验室的清洁杀菌工作， 9:10 之前一定要进入实验室 工作。2.1.3 上班时间要坚守岗位，尽职尽责，不准擅离职守，外出办私事。2.1.4 不戴操作过的手套做其它与实验无关的事如挠痒、开门把手等可能污染 手套的动作；2.1.5 最后一个离开实验室要自觉检查实验的水、电、空调、仪器是否按要求 关闭。2.1.6 实验

5、室严禁行为：A. 在实验室内工作时，动作要轻，严格执行操作规程；B. 严禁在实验室跑跳、串岗、闲聊、嬉笑打闹；C. 在实验室内不做不必要的动作，不做易发尘和大幅度的动作；D. 严禁在实验室内吸烟、饮食和进行非生产性活动；E. 严禁上班时间玩电脑，不得打游戏，浏览与工作无关的网站；F. 严禁将各种个人物品如手表、手机、化妆品、手纸、钱包、钥匙等带入实验 室；G. 严禁在实验室内座椅或实验桌上睡觉；H. 严禁实验操作时无精打采、哈气连天；I. 严禁在实验室内披头散发；J. 不得穿前露脚趾、后露脚跟的鞋子；2.1.7 实验室良好行为：A. 头发一律盘起或包入防护帽中，不得有头发裸露在外；B. 勤清洗

6、实验服，保持实验服整洁，不在实验服上乱涂乱写；C. 勤修剪指甲，不留长指甲，不涂指甲油；D. 工作期间坐姿要端正，双腿交叠时腿要保持平稳；E. 站姿要挺直，不可无精打采；F. 实验操作期间尽量不正对着实验样本交流，除了工作上必须的交流，尽量少 说话；2.2 实验室出入管理2.2.1 进出实验室的防护顺序白色实验服更衣区：A. 实验人员进入健康实验室， 首先在白色实验服更衣区， 换上白色实验服， 戴 一次性口罩、一次性帽子、穿上鞋套；B. 要将所有的头发包入帽子中，禁止脸部周围有碎发露出帽子；C. 佩戴实验室胸牌；D. 按七步洗手法洗手并擦干或吹干，然后进行实验操作；E. 操作完毕，脱下手套、帽

7、子、口罩和实验服，实验服整齐叠好放到对应的实 验柜中；F. 在普通清洁区按七步洗手法洗手，擦干或吹干；G. 离开实验室，关上实验门。蓝色实验服更衣区A. 进入岗位实验室（如 DNA 提取室、测序室），需要换上蓝色防护服，先脱下 白色实验服，将实验服整齐叠好放入更衣柜，再换上蓝色防护服。B. 蓝色防护服的穿衣顺序为：鞋套 -（裤子）-衣服一口罩一帽子；C. 按七步洗手法洗手并擦干或吹干；D. 处理血液样本时要进行特殊防护，如戴双层口罩和防护目眼镜；E. 操作完毕，脱下手套， 按从上到下的顺序脱下实验服；F. 在普通清洁区按七步洗手法洗手并擦干或吹干；G. 离开实验室，关上实验门。 正确的洗手方法

8、：用流动的水冲洗手部，使手 掌、手背、手指、指缝和手腕部充分浸泡，打上洗手液等，在手掌、手背、手指、指缝和手腕部皮肤 处反复揉搓 30 秒钟，用流水冲洗干净。2.2.2 进出实验室的注意事项：A. 穿衣时，不要使衣服触及地板、桌子、椅子等物品，不要沾污袖子和裤腿下摆，姿势要保持直立，按从下至上顺序穿衣。B. 口罩应完全遮盖鼻子及口，上缘不能低于鼻孔，下缘不能高于口唇。C. 为了防止再次进入和往返作业对实验室造成交叉污染， 人员在作业中途和作 业完毕均应按规定的顺序退出实验室。D. 先在实验室脱下手套，进入更衣室后先关门，然后按先上后下的顺序脱下一 次性帽子、口罩、防护服放入指定盛具内，再换鞋后

9、离开。E. 最后离开实验室人员应仔细检查每间房所有该关的电器是否已关闭，并在进 入实验室的门边安全登记表进行登记。2.2.3 严格控制进入实验室人员： 禁止外来人员随意进入实验室，因工作需 要需进入实验室的维护、检测人员和其他人员，如参观者等必须严格按以下步骤执行：A. 经过实验室管理人员同意；B. 必须严格按要求着装进入；C. 进入应由专人陪同并按要求登记实验室来访人员进出情况登记表 ；D. 维修人员的工具、仪器等需经消毒处理后才能进入实验室。 下列人员 不准进入实验室：A. 皮肤有晒焦、剥离、外伤和炎症、瘙痒症者。B. 鼻子排出物过多者。C. 冻伤、湿疹等疾病患者。D. 过多掉头皮、头发者

10、，长指甲者，有搓皮肤、挖鼻孔、搔头等不良习惯者。E. 没有按规定洗去化妆品、指甲油和未穿洁净工作服者；没有及时刮须、剪指 甲者。2.2.4 物品进出的管理A. 大的物件搬进岗位实验室时， 先在公共实验室内用实验室真空吸尘器或自来 水将灰尘擦净，然后用中性消毒剂对物件内外表面按要求进行消毒处理，再 用纯水将消毒剂清洗干净；B. 测序室内净化系统运行期间，不许搬进大的物件；C. 小物件在进岗位实验室前，应先在公共实验室内擦拭清洁消毒，通过传递窗 紫外消毒再带进去；2.3 实验室清洁卫生管理2.3.1 整理A. 将实验区内不需要的物品整理好： 可以回收利用的（如枪头盒） ：暂存实验台下面的空柜子中，

11、柜子做好标记 并通知相关人员；或直接扔到垃圾房中。 不可回收利用的：废弃物可直接 倒掉。B. 废液缸的垃圾达到废液缸的一半就要清理掉，冰盒用完后敞开盖子，整齐的 摆放在冰盒晾晒区。C. 工作时要保持台面有序不乱；任何物品使用完毕后立即按要求放回原位；记 录单等文件填写完毕，要按要求放回原处或上交存档。D. 实验台面、实验架和柜子里的物品按物品标记要求分类放置。E. 移液器使用后按要求放置：调回最大量程；清洁移液器表面；放回规定枪架 位置。F. 枪头盒：实验人员离开实验桌或长时间不使用 （10 分钟以上） 时枪头盒要盖 好，放置在规定区域。2.3.2 及时补充抽屉内的防护用品如口罩、手套、鞋套等

12、。A. 所有的仪器设备放在相应的黄色警示区内，仪器底部边缘不得超出警示区， 禁止随意搬动仪器，如意外情况需搬动仪器一定要经过相应实验区负责人的 同意，用完后要及时归还，仪器归还后实验区负责人要检查仪器是否使用正 常。B. 各实验区的实验物品都要做好各实验区相应的标记， 公用的物品只需标记部 门名称；通用物品也要做好标记如铝饭盒，按用途分类做好标 记。C. 实验物品的放置与标签对应。D. 实验试剂开启后要在瓶身和盖子上标注开启日期， 新配置的试剂要标注试剂 名称、配制人、配制时间，试剂的放置要安全、整齐、便于拿取。E. 根据实验服的编号将实验服整齐的放到相应标记柜子中，禁止将实验服放到 实验桌上

13、或凳子上，实验鞋也放到标记好的柜子中摆放整齐。F. 实验室的通道要畅通无阻，特别是蓝色实验服通道不仅要畅通无阻，还禁止 随意走动，只有换上干净的鞋套才可进入。G. 实验室的自来水水龙头已做好标记，按标记要求使用。1）普通清洁区：? 洗手专用：可用来穿白色实验服或便服时洗手专用水龙头， 为了不引起污染， 戴操作手套时尽量不使用该水龙头；? 清洁专用：可用打扫卫生时，或清洁废液缸专用，尽量戴手套使用该水龙头2）蓝色实验服清洁区：? 洗手专用：穿蓝色实验服时洗手专用水龙头，为了不引起污染，戴操作手套 时尽量不使用该水龙头；? 清洁专用：穿蓝色实验服清洁，或清洁废液缸专用，尽量戴手套使用该水龙 头H.

14、 凳子（椅子）的摆放要求：无人使用时，凳子（椅子）推入桌下，椅背摆正； 做完实验后也应该立即回位。I. 工作中所用到的相关文件、记录等应分类摆放整齐、填写清楚无误。纸质记 录单等要远离水源，必须避免受到污染和损坏。2.3.3 实验前清洁整理工作：A. 将窗台上的灰尘用干布擦净；B. 实验台用 75%酒精擦拭干净；C. 超净台台面用75%酒精由内向外擦拭干净，开紫外照射30min,再吹风10min；D. 实验需要的耗材（如双面板）按要求先 75%酒精擦拭，再紫外照射 30min；E. 移液枪用先 75%酒精擦拭，再紫外照射 30min；F. 仪器外表面用 75%酒精擦拭，屏幕可以触屏的仪器屏幕用

15、洁净的干布擦拭；G. 废液缸用 75%酒精擦拭外表面，再紫外照射 30minH. 注：没有超净台的实验区，也按以上步骤清洁，但不需紫外照射30min。超净台开紫外和吹风期间，人尽量不要留在实验室，实验室门关闭并在门上 挂上紫外消毒牌，消毒完毕要及时取下消毒牌。2.3.4 实验工作结束后的清洁整理工作：A. 实验台用 75%酒精擦拭干净。B. 超净台台面用 75%酒精由内向外擦拭干净。C. 实验用过的耗材（如双面板）按要求用 75%酒精擦拭干净。D. 移液枪用先调到最大量程，再用 75%酒精擦拭。E. 仪器外表面用 75%酒精擦拭，可以触屏的仪器屏幕用洁净的干布擦拭，仪器 内表面用干布擦拭异物、

16、冷凝水等；F. 废液缸先倒掉垃圾，用75%酒精喷洒内外表面，静置10mi n,装有血液样本 的废液缸倒掉垃圾后要用 84 消毒液喷洒废液缸内外， 并将 84 消毒液没过废 液缸底部，静置 30min ，然后先用自来水冲洗，再用纯水润洗三遍，然后放 到废液缸晾晒区；G. 各实验区的垃圾清理干净，分类放到清洁房；H. 每天实验结束后，各实验区地面用清水拖一遍。2.3.5 实验室每周清洁整理：A. 每周五清洁超净台：先将超净工作台台面上的物品取出，用1%的苯扎溴铵溶液清洁超净台的台面、内壁和外壁，再用纯水清洁一遍，超净台挡风玻璃 内外侧要纯水擦拭，最后填写超净台每周清洁表。B. 实验室内部清洁：每周

17、五用 1%的苯扎溴铵溶液擦拭实验台面、地板和门把 手，再用纯水清洁一遍。C. 实验仪器清洁：实验仪器按要求用 75%酒精擦拭外表面。D. 实验室消毒：实验室整理清洁后开实验室紫外灯或臭氧，并在消毒的实验室门口挂上消毒牌。E. 实验服的清洁：白色实验服和蓝色实验服分开洗，每周一完成白色实验服的清洗工作，白色实验服用洗衣机清洗干净，用衣称挂起晾干；蓝色实验服每 周一、周三清洗，先用洗衣机清洗干净，用灭菌锅灭菌再烘干，然后放到实 验室的相应柜子中；蓝色实验鞋套每天清洗烘干。2.3.6 每月清洁整理：A. 墙壁清洁：每个月用 1%的苯扎溴铵溶液清洁实验的墙壁、天花板、 灯，并用 纯水清洁一遍，玻璃直接

18、用纯水擦拭。B. 实验容器清洁： 将反复使用的容器如废液缸、 双面板、试管架等用 84 消毒剂 浸泡 30 分钟，先用自来水冲洗干净、 再用纯水润洗两遍， 晾干放到各实验室。C. 更换记录表：更换实验室各种记录表，对于记录潦草的表格进行重新抄录, 换下来的表格分类入档。表1清扫和火菌方法清洁范围/物品具体方法整个房间一周1次，用臭氧处理1个半小时， 再打开通风系统2个小时地板每天用清水清洁一次，每周使用消毒 液擦洗一次墙面每月使用消毒液擦洗一次顶棚每月使用消毒液擦洗一次设备、器具和杂物水洗和擦拭后，灭菌或消毒；或直接用 消毒液擦拭蓝色防护服每周一、二清洗火菌一次白色实验服每周一清洗一次实验鞋套

19、每天清洗一次注意事项：A. 实验室的一切清洁工作必须湿式打扫，在实验室净化系统工作状态下进行。B. 准备专用的实验室清扫材料和工具，清洁用品不得采用易掉纤维的织物，一 般可用长纤维材料或聚氨酯海棉。实验垃圾分类放置：普通垃圾放在黑色垃圾袋中，与血液、血浆有关的垃圾放在黄色医疗垃圾袋中，每天处理完样品后及时将垃圾处理掉，垃圾袋扔在清洗间指定垃圾 桶中。消毒剂的使用与配制1) 84消毒液的使用：84消毒被血液污染的物品，稀释比例为 1： 20，约2000mg/L,相当于1 份84消毒液+ 20份清水。实验室用法为10ml消毒液+200ml清水，作用时 间为大于30min。使用注意事项：A. 稀释后

20、的 84 消毒液极易分解，使杀菌力降低，因此必须现配现用，使用时 间不超过 1 天。B. 配制时应先加水再倒入药液。C. 84 消毒液有强烈腐蚀性，因此，稀释前请尽量戴上手套。D. 在完成稀释后，不要脱下手套，若沾到皮肤上立即用清水冲洗。E. 未经配置的 84 消毒液在阳光下会产生毒气，因此请放置在阴凉的地方。F. 使用后的 84 消毒液直接倒入实验室的下水道。2) 苯扎溴铵的使用 用途用法 实验室墙面、地面、天花板、台面等定期消毒 时，将一瓶苯扎溴铵溶液倒入 淡蓝色垃圾桶内，再注入纯水至垃圾桶桶线 处。3) 乙醇的使用 用途用法A. 95%乙醇：从仓库领用的乙醇即为 95%乙醇，只用于酒精灯

21、。B. 75%乙醇：以 1000：267 稀释 95%乙醇即为 75%乙醇，用于实验物品、实验 台面的日常清洁灭菌，酒精棉的浸泡，进出超净台物品的灭菌消毒。4) 碘伏的使用 用途用法： 直接使用碘伏原液擦拭物品表面，擦拭 2 遍，作用时间 2 分钟，稍干以后用 75%乙醇脱碘，用于不适合浸泡消毒的物品，例如未分离血浆的采血管等。2.4 仪器试剂使用管理2.4.1 严格遵守各种仪器的操作规程和登记制度，按仪器的使用权限使用仪器，未 经过相关仪器使用培训，禁止随意使用仪器。2.4.2 实验前要先检查仪器是否损坏，接通电源后，检查是否运转正常及表面是否 清洁卫生。发现问题及时报告实验室管理人员， 并

22、找上一次使用者说明情况。 知情不报者追查当次使用者的责任。2.4.3 任何使用者必须在掌握仪器设备的性能与操作程序后方可操作， 操作仪器前要熟读仪器旁边张贴的仪器使用注意事项，确保已熟悉这些再使用，凡对使 用的仪器的操作无把握者，务必请教仪器负责人或其他人员。2.4.4 仪器使用中发现异常及时上报并填写意外事故记录单 。2.4.5 仪器使用过后按要求对仪器进行清洁、整理并按要求填写仪器使用记录表。2.4.6 需要过夜运行的仪器一定要做好标记。2.4.7 本实验室成员不得随便带外来人员到实验室， 如室外人员需要用本实验室仪 器设备和试剂，则需由实验室负责人同意，并让其做好登记。2.4.8 各种财

23、产包括仪器、设备工具、试剂等严禁带出实验室，如有特殊需要，经实验室管理人员同意后方可带出，并负责带回。2.4.9 试剂使用过程中要熟悉试剂的保存条件，使用完毕后按要求放回原处。2.4.10 刚开封的试剂要在试剂瓶身及瓶盖上标上开封日期， 配制试剂要标明试剂的 浓度、名称、配制日期、配制人。2.4.11 对于有害试剂，使用过程中要严格执行操作规程，注意安全，防止意外事故 的发生。2.4.12 对处理有潜在危害的样本时， 要严格执行相关操作规程并熟悉发生意外时的 处理方法。2.4.13 仪器试剂在使用过程中发生意外状况一定要及时上报实验室管理人员并做 简单的应急处理 。2.5实验室安全管理2.5.

24、 1 实验室财产安全防护：A. 非本实验室工作人员不得随意进入本实验室， 如有外来人员需进入实验室必 须通过领导同意并在实验人员的陪同下完成，陪同的实验人员有责任监督和 协助外来人员的相关工作。B. 实验室的仓库应上锁，只准仓管人员进入，其它实验员禁止随意进入。C. 实验员办公室不存放私人贵重物品。一旦实验室发生盗窃案件，实验员应保 护好现场，并及时向上级领导汇报。D. 实验室各仪器试剂都有固定的安放位置，实验人员有责任监督本实验的仪器 试剂动向，一旦发现其离开固定位置要了解仪器试剂的去向，确保其回归原 位。E. 实验人员禁止随意将实验室财产带出实验室、丢弃或馈赠他人。实验物品如 需借出必须经

25、过实验室负责人同意并做好记录， 借出后要在归还日期到达后 负责将借出物品追回。2.5. 2 防中毒、防感染：A. 实验室中存有有毒试剂时，要说明使用有毒试剂的时安全防护方法，遇到意 外要注明紧急处理方法，实验人员要严格按要求执行。B. 在制取有毒气体时应在通风橱内进行，实验室要有良好的通风设备保持室内 通风，实验员要按要求及时开启通风设备。C. 人员未离开实验室时不要开各种紫外灯，开紫外灯或臭氧消毒器时实验人员 要快速离开实验室并做好消毒标志。D. 实验操作台上都要有废液缸，实验台旁边都要有翻盖垃圾桶，废液缸中的垃 圾达到废液缸三分之二左右就要清理掉，不同类别的垃圾放在不同类型的垃 圾桶中，黄

26、色医疗垃圾每次做完实验就要及时清理掉。E. 处理血液样本时一定要做好安全防护措施以防感染，戴双层口罩，穿防服， 戴防护目眼镜，如遇到血液紧急事故时要穿专门的防护装备。2.5. 3 防火灾：A. 实验室应配备急救箱。各实验室、仓库必须必备灭火器，并对实验人员进行 培训确保每位实验人员都会使用灭火器材。B. 在实验室使用酒精灯时，一定要注意防火，特别要注意不要在点燃的酒精灯 旁边使用易燃物品，如酒精，酒精棉等。易燃试剂的保存也要注意防火。 注：在超净台内，戴手套点酒精灯时，不要在酒精灯的下风口点火，要在其 侧边和上风口，否则很容易使手套点燃。C. 使用完加热设备确保其电源关闭，如需过夜运行的加热设

27、备，一定要检查其 控温装置是否正常，不正常的话要停用并及时上报，如需强制运行则禁止过 夜运行或长时间无人监督运行，下班放假之前一定要确保加热设备关闭。2.5. 4 防冻伤：A. 在普通冰箱和冷柜中快速拿取物品时一定要戴乳胶手套或一次性手套， 长时 间拿物品或冰箱除冰时可在劳工手套外戴一次性手套进行操作。B. 接触冰冻的冰袋时一定要戴劳工手套，从-80 °C冰箱中拿放物品时一定要戴劳工手套，冰箱除冰时可在劳工手套外戴一次性手套。C. 干冰温度极低，为-78。5C,当干冰与人的皮肤接触时就会升华，而在升华的过程中会吸收大量的热，就会引起人体皮肤组织冻伤，拿取干冰时一定不 要用手直接接触，

28、否则，瞬间可冻伤皮肤。短时间接触干冰可带劳工手套， 但是如果碰触的时间过长，如十几二十分钟，要戴厚的棉手套或用夹子、盒 子等工具协助干冰的转运。D. 被干冰冻伤后的正确处理方法，应该是到22-25 C左右的室内，或浸入38-42C的温水中，迅速提高体温，而不能用火烤、冷水浸泡或者用雪搓。尽 量将伤处抬高、保暖，冻伤严重要报告上级并及时就医，要填写意外事故 记录单。2.5. 5 防水灾：A. 实验室水池的地漏必须保持畅通，要及时清理水池内的垃圾防止堵塞水池，用容器接水时一定要有人现场监督，等关闭水阀方可离开。B. 停水期间禁止随意打开水龙头阀门，如需打开要及时关上，停水后要检查实验室各水龙头阀门

29、是否关闭，并做好禁止开水龙头阀门的标志。C. 实验完成后泡沫冰盒里的冰要及时清理掉， 禁止将试剂或样品长时间放在泡沫冰盒中，试剂用完后要及时放好，防止泡沫冰盒中冰融化将试剂或样品淹 没。D. 秋冬季定期检测水管是否漏水；下大雨天检测实验室天花板是否漏水；每天检查实验空调是否漏水，出现漏水情况要及时上报实验室管理人员，并填写 意外事故记录单 。2.5. 6 防触电：A. 实验员必须掌握安全用电常识和发生触电事故的救助方法，组织实验员进行 “安全用电”常识的教育。B. 实验室的仪器使用完后按要求关闭电源或拔下插头C. 实验室内的电路及用电设备要定期检查，确保用电安全。如有电器着火，应 立即切断电源

30、，用灭火器扑灭，电源未切断前，切忌用水或化学泡沫灭火器 灭火。D. 一旦发生人身触电事故，应立即切断电源，及时进行人工呼吸，急送医院救 治。2.6 实验室紧急事故处理2.6.1 血液、血浆溅落： 实验过程中，由于血液、血浆溢出溅落造成实验物品、 操作台或地面等的污染，应立即喷洒消毒液并覆盖浸透消毒液的无纺布，等消毒液彻底浸泡30 分钟后，用无纺布擦拭掉， 若是实验室物品则传出实验室再用纯水冲洗晾 干。若血液、血浆溅落于防护服上，应立即脱下防护服，在溅落部位用消毒 剂浸泡 30 分钟，再单独清洁防护服。2.6.2 采血管破碎：A. 若在冰盒中发现破碎的采血管，应立即穿上防护服，戴好手套、口罩、防

31、护 眼镜，用镊子将破碎采血管取出丢弃于黄色医疗垃圾袋中，将冰盒内剩余的 采血管全部用碘伏擦拭 2 遍，作用 2 分钟，稍干后用 75%乙醇脱碘，再放到 新的采血管架上传入实验室进行血浆分离。冰盒内剩余物品放在冰盒中，将 消毒剂倒满整个冰盒， 盖上冰盒盖子， 30 分钟后倒掉消毒剂， 用浸泡过消毒 剂的抹布擦拭剩余物品和整个冰盒，最后用纯水冲洗干净晾干再使用。B. 若不小心将采血管摔碎，应立即用无纺布覆盖，然后倾倒适量消毒剂，放置30 分钟后再清理。采血管摔碎片应用镊子清理， 污染区域应当用消毒剂清洗。2.6.3 血液、血浆污染皮肤A. 血液或体液污染皮肤和眼睛：在实验过程中，如手或其它部位的皮

32、肤沾上血 液或体液标本以及试剂，应立即用洗手液和流动水清洗污染的皮肤，消毒液 如 75% 乙醇或 0.5% 碘伏进行消毒。血液、血浆或试剂不慎溅入眼内应立即 用清水洗，均需填写意外事故记录单。B. 如有伤口，应在伤口旁端轻轻挤压，尽可能挤出损伤处的血液，再用洗手液和流动水进行冲洗。禁止进行伤口的局部挤压。受伤部位的伤口冲洗后，用 消毒液如 75%乙醇或 0.5%碘伏进行消毒，并包扎伤口，必要时进行预防补 救措施并填写意外事故记录表。2.6.4 注意事项A. 清理过血液、血浆的无纺布应丢入黄色医疗垃圾袋中，不可循环使用，上述 步骤均应佩戴手套。B. 消毒剂为稀释过的 84 消毒液，使用方法可参考

33、 “实验室清洁卫生管理 ”。2.7实验室物料管理2.7.1 领料管理8.1.1 分子实验室每个岗位各选一名领料负责人，负责岗位物料的统计、领取 与 申购。8.1.2 物料预算：领料负责人每月 25 号统计本月试剂耗材用量并做出下个月试 剂耗材预算， 向仓管人员提交下月的预算单。 仓管人员统计预算， 查看库存， 及时补充物料。8.1.3 领料：领料负责人每周五负责统计各岗位剩余的物料，估计下个星期物 料 需求量，如剩余量不够一周使用，及时填写物料领取单，向仓库管理人员 领取，物料领取单必须在周五下班前交给仓库管理人员， 周五早上 8:40-9:00 时间段完成领料。8.1.4 应实验需求需要使用

34、新品种的耗材，各领料人员可向采购人员申购，采 购 单要填写物料的具体信息。因采购物料有一定的周期，紧急物料的申购一 定要提前半个月。8.1.5 实验室操作人员禁止随意进入仓库，如意外情况需单独进入仓库，要做 好 仓库钥匙借用记录。2.7.2 仓管人员须知A. 职责：仓库管理人员负责仓库物料的统计、发放和申购。仓库管理人员要明 白各种试剂耗材的储存条件。B. 每周领料结束后，仓库管理人员要及时统计仓库物料的剩余情况，不够的物 料要及时补充，物料补充路径有两种，一：向采购人员申购，二：向仓库领取。补充的物料到货后，要在下次领料之前将新到物料统计到 库存单中C. 仓库人员要负责将仓库中物品分类摆放整

35、齐，储存架位做好标记，易于查找 拿取。D. 仓库管理人员禁止随意将仓库钥匙外借，如意外情况需外借要做好借用记 录。2.7.3 物料灭菌1）蓝色防护服的清洁消毒：A. 清洁：将蓝色实验服从实验服袋子中取出，实验服和实验服袋子同时放到洗 衣机中清洗，清洗完后及时取出。B. 装袋：将同一编号的实验服按从下到上，上衣、裤子、帽子叠整齐放到相应 编号的实验服袋子中，鞋子单独放到实验服袋子外面的小口袋中。C. 消毒：将叠好的实验服用灭菌锅固体灭菌 30 分钟。D. 烘干：实验服灭菌完成后及时取出，放到清洗间的烘箱中烘干，烘干后及时 取出放到相应编号的实验柜中。2）实验耗材灭菌：A. 整装：口戴一次性口罩、

36、双手戴一次性 PE 手套，将枪头插满相应的枪头盒， 盖上枪头盒， EP 管装满铝饭盒盖上铝饭盒盖子，红色枪头盒中装洗干净的 无纺布。B. 标记：在装有灭菌耗材的容器（枪头盒、铝饭盒等）的右上方贴上约长1。5cm 的灭菌指示带，在灭菌指示带上写上灭菌日期（如2013 年8 月 7 日写成： 8/7/2013，年份一般省去，直接写 8/7）。C. 包扎：将1ml枪头盒两个一包、200M枪头盒两个一包、10d枪头盒四个一 包，用包布按要求包起，包好后在包布上贴上约 3cm 的灭菌指示带，在灭 菌指示带上写上部门名称、所灭物品的名称、灭菌日期， 然后将准备好的灭 菌物品放到待灭菌区。D. 灭菌：将待灭

37、菌区的耗材放到灭菌锅中固体灭菌 30 分钟。E. 烘干：灭菌完成，将灭菌物品取出放到清洗间的烘箱中烘干，烘干后及时取 出放到已灭菌区分类摆放整齐。3）注意事项：A. 灭菌好的耗材在使用过程中不要撕掉容器右上方的灭菌指示带。B. 在容器和包布上重新贴灭菌指示带时一定要撕去原有的灭菌指示带C. 禁止在使用过（有黑色斜线）的灭菌指示带上修改日期。D. 在装枪头和EP管盒时尽量少说话。E. 在装枪头和EP管时，掉落的枪头和EP管禁止使用。F. 灭菌指示带上的日期一定要写灭菌当天的日期。G. 灭菌后一定要及时填写灭菌登记表。三、实验室保密制度管理3.1不得与部门以外人员讨论实验相关的数据、进程。3.2不

38、得将部门任何资料传输到网络或传输给他人。3.3不得将部门的会议内容随意泄露。3.4没有权限看的文件绝不偷看。3.5实验室所有有用的文件、资料、数据归档处理，借阅必须做好登记。3.6实验室所有与工作有关的文件资料的报废处理，必须使用碎纸机，不准未 经切碎作收购处理。3.7员工本人工作所持有的各种文件、资料、电脑复印软件，当本人离开实验室 或办公室外出时，须存放入文件柜或抽屉，不准随意乱放，更不能未经批准, 携带外出进入公共场所。3.8禁止在部门以外的打印机上打印资料，打印的资料必须及时取回，禁止将废 弃的打印资料随意丢弃，要用碎纸机销毁。3.9未经公司领导批准，不得向外界提供公司的任何资料。四、

39、测序实验室仪器操作规程仪器操作规程1超净台操作规程2微量台式离心机操作规程3移液枪使用维护规程4冰箱使用维护规程5.PCR仪使用规程超净台操作规程1. 目的 规范净化工作台操作与维护工作，确保仪器正常 运作。2. 适用范围 适用于洁净室、微生物实验室中洁净工作台的操作与 维护管理。3. 人员职责操作人员负责此仪器操作和维护管理4. 操作规程4.1准备工作：先用75%的酒精喷洒台面，用洁净的无纺布由内向外擦超净台台 面，将实验需要的耗材用75%的酒精喷洒，无纺布擦拭后放入超净台中，尽 量将物品放在超净台两侧，不要将物品堆积在一起，以防紫外照射不均。4.2紫外杀菌：使用工作台时，应提前40分钟开机

40、，按下超净台台面下方右侧的绿色电源安，同时开启紫外杀菌灯，处理操作区内表面积累的微生物。4.3启动风机：紫外杀菌30分钟后，关闭紫外，打开风机，风速为 2,将挡风玻 璃向上提一段距离，吹10分钟（不需开照明灯）。4.4吹风结束：拉下挡风玻璃，风速为 0，关闭风机（不需开照明灯）。4.5实验结束：实验结束，将实验物品拿出超净台，超净台内物品摆放整齐，用 75%的酒精喷洒台面，用洁净的无纺布由内向外擦超净台台面，关闭挡风玻 璃，紫外杀菌30分钟，30分钟后关闭电源。5. 注意事项：5.1紫外灭菌期间不要开实验室内的白炽灯以免影响灭菌效果。5.2利用紫外灭菌时，尽量将物品放在超净台两侧，不要将物品堆

41、积在一起，以 防紫外照射不均。5.3 由于紫外灭菌时会产生臭氧对人身体有害， 紫外灭菌和吹风期间人员尽量不 要待在实验室。5.4 对新安装的或长期未使用的工作台， 使用前必需对工作台和周围环镜先用超 净真空吸尘器或用不产生纤维的工具进行清洁工作， 再采用药物灭菌法或紫 外线灭菌法进行灭菌处理。5.5 带移门的工作台操作时，移门开启高度虽无明确规定，但一般不宜开启过高 （拉至顶端）或关至过低（落至台面），以免影响风速和和洁净度。5.6 操作区内不允许存放不必要的物品，保持工作区的洁净气流流型不受干扰。5.7 操作区内尽量避免作用明显扰乱气流流型的动作。5.8 禁止在预过滤器进风口部位放置物品，以

42、免挡住进风口造成进风量减少，降 低净化能力。5.9 本产品在受到外界电磁干扰时，可能会有影响。请远离此类干扰源或采取其 他必要措施。5.10 操作区的使用温度不可以超过 60C。6. 维护规程及维护方法6.1根据环境的洁净程度，定期（一般 36个月）将预过滤器中的粗效滤料拆 下清洁，清洁方法：用吸尘器吸除滤料上的灰尘，清洁 2-3 次后需换新的粗 效滤料。（粗效滤料水洗后只能用一次）。6.2 定期（一般为一周）用 1%的洁尔灭对超净台的台面清洁，用清水对挡风玻 璃进行清洁，并填写清洁记录表，同时经常用纱布沾酒精或丙酮等有机溶剂 将紫外线杀菌灯表面擦干净，保持表面清洁，否则会影响杀菌效果。6.3

43、当加大风机电压已不能使风速达到0。32m/s时必须更换高效空气过滤器。6.4 定期（一般每两个月一次）用热球式电风速计测量工作区风速，如发现不符 合技术参数的要求，则应调节风速设置为 “高速”档。6.5当 风速”已调至 高速”档时，工作区风速仍达不到0。3m/s，则必须更换高效 空气过滤器。更换高效过滤器后，应用尘埃粒子计数器四周边框密封是否良 好，若有泄露需采取封堵措施。6.6 更换高效空气过滤器及预过滤器时均应停机进行。6.7 更换高效空气过滤器时需注意一下事项：6.8更换新的高效空气过滤器时应特别注意其拆箱、搬运及安装取用的过程应保 护滤纸完整无损，禁止用手触及滤纸造成破损。6.9安装前

44、，将新的高效空气过滤器对着亮处，以肉眼查看高效空气过滤器是否 因运输等原因而出现漏洞。如有漏洞则不能使用。6.10 更换过滤器时，可打开顶盖，更换时应注意过滤器上的箭头标志，箭头 指向即为层流气流向。6.11 在拧紧压块螺栓时，用力要均匀、适当，既要确保高效空气过滤器的固 定及密封稳定可靠，又要避免高效空气过滤器变形而导致泄露。6.12 更换后，应用尘埃粒子计数器检漏，尤其要在高效空气过滤器四周进行 扫描检查。6.13 为防止环境污染，对换下的废旧高效空气过滤器作烧毁处理微量台式离心机使用规程1. 目的保证微量台式离心机的正常使用。2. 适用范围 适用于本实验室室使用的微量台式离心机。3责任：

45、分子技术员应严格按照此规程操作4 操作步骤：4.1离心机应放置在水平坚固的台面上， 并力求使仪器处于水平位置以免离心时 造成仪器振荡。4.2插上电源插头，打开机身电源开关，按open键后听到开盖声后，用手扶住打开机盖，将预先平衡好的样品对称放置于转头的样品架上，双手扶住盖子 关闭机盖，听到关盖声后表明盖子已关好。4.3选择离心单位、设定离心速度、温度、时间，按 start开始离心，待速度稳定 上升后方可离开进行其他操作。4.4待离心机完全停止转动时按 open键打开机盖，小心取出离心样品。4.5离心完毕后，离心机盖子保持敞开，以便操作过程中产生的水汽等充分挥发，等实验结束后盖上盖子关闭电源开关

46、，拔下电源插头。5. 仪器维护5.1离心机应始终处于水平位置，外接电源系统的电压要匹配，并要求有良好的 接地线，机器不使用，要拔掉电源插头。5.2开机前应检查转头安装是否牢固，机腔中有无异物掉入。5.3 样品应预先平衡，使用离心筒离心时离心筒与样品应同时平衡。5.4挥发性或腐蚀性液体离心时，应使用带盖的离心管，并确保液体不外漏以免 腐蚀机腔或造成事故。5.5除工作温度、运转速度、转速单位和运转时间外，不要随意更改机器的工作 参数，以免影响机器性能。转速设定不得超过最高转速，以确保机器安全运 转。5.6 使用中如出现0.00或其它数字，机器不运转，应关机断电，10秒钟后重新 开机，待所设转速显示

47、后，再按运转键，机器将照常运转。5.7不得在机器运转过程中或转子未停稳的情况下打开盖门，以免发生事故。5.8分离结束后，先关闭离心机，在离心机停止转动后，方可打开离心机盖，取 出样品，不可用外力强制其停止运动。5.9 离心机运转过程出现异常，应先按“ stop离心机停止转动后，再进行处理。6. 注意事项6.1离心室的清洁：为了避免样本等残留物的污染，应经常对离心机外壳和离心 室进行清洁处理。对离心室清洁，应先打开离心机盖，拨掉电源线，用专用 设备将离心机转子旋下，再用中性去污剂（70%的异丙醇/水混合物或乙醇去污染）清洁离心室；离心室内的橡胶密封圈经去污剂处理后，用水冲洗，再 用甘油润滑。6.

48、2转子的清洁：转子会被样本残留物污染，也可能会被某些化学试剂腐蚀，因 此应对转子每月进行清洁维护。每月用中性的清洁剂清洁转子一次，并在仪 器维护记录本上作好记录，以延长转子的寿命。移液枪使用维护规程1. 目的确保移液的精确性，正确使用移液器。2. 适用范围 本实验室使用的可调 式移液器。3. 责任分子技术员应严格按照此规 程操作4使用方法：4.1样品提前从冰箱拿出室温放置，使温度与室温平衡。 液体温度吸头的移取的液体体积会偏大 液体温度v吸头的移取的液体体积会 偏小4.2 若溶剂瓶中液体太少，将液体倒入 EP管（微量离心管）中，方便吸取。4.3 设定体积 设体积时左手托枪身，右手调节，速度不宜

49、太快。 大体积-小体积逆时针，调准即可。小体积-大体积顺时针超过设定刻度三分之一圈后，再回调。这因为计数器里面有一定的空隙，需要弥补，保证最佳的精确度。在该过程中，千万不要将按钮旋出量程，否则会卡住内部机械装置而损坏了移液枪。从大到小的调节从小到大的调节4.4 装枪头将移液枪端垂直插入吸头，左右微微转动，上紧即可，禁止装枪头时上下摔 打移液枪。4.5 吸液垂直吸液，枪头尖端需浸入液面一定距离以下，下图是移液枪型号和对应吸 嘴侵入深度。移液枪型号吸嘴浸入深度2pL 和 10 Z1 mm20此和100 Z2-3 mm200 此和 1000 Z3-6 mm5000 此和 10ML Z6-10 mm枪

50、头预润湿（3次）（血浆分离时不需润湿）吸头内壁会吸附一层液体，使表面吸附达到饱和，然后再吸入样液，最后打 出液体的体积会很精确。一般液体，正向吸液（一档 -二档）。粘稠液体和易挥发液体，反相吸液（二档 一档）正向吸液反向吸液注：吸取有机溶剂或高挥发溶液时需润洗4-6次慢吸慢放，控制好弹簧的伸缩速度。1）过快的洗液速度，会导致：A. 产生反冲和气泡，造成吸液体积不准确B. 样品液进入套柄：对活塞和密封圈造成损伤C. 带入气雾：造成样品交叉污染2）吸取液体时一定要缓慢平稳地松开拇指，绝不允许突然松开，以防将溶液吸 入过快而冲入取液器内腐蚀柱塞而造成漏气。3）对吸取大容量样品或者高粘度样品时，吸液后

51、保持吸头浸入液面最少1秒,然4）后将吸头平缓移开液面。将移液枪提离液面，停约一秒钟。观察是否有液滴缓慢 的流出，若有流出，说明有漏气现象。原因：枪头未上紧；移液枪内部气密性不好。外壁残留：用滤纸蘸檫移液嘴外面附著的液滴4.6 排液排液方式的选择1）沿内壁排液（常规），具体步骤如下：A. 将吸嘴口贴到容器内壁并保持10-40°倾斜。B. 平稳地把按钮压到一档，停约一秒钟后压到二档，排出剩余液体。C. 排放致密或粘稠液体时，压到一档后，多等一两秒钟，再压到二档。D. 压住按钮，同时提起移液枪，使吸嘴贴容器壁擦过。E. 松开按钮。F. 按弹射器除去移液嘴。（只有改用不同液体时才需更换吸嘴）

52、。2）直接排入液面下：当所排液体量较少时，可将吸头尖端液面下1-2mm排除液体。3）在液面上方排液：所排液体量较大并且排相同的液体时，可选择在液体上方 排液。5. 注意事项5.1移液器不得移取有腐蚀性的溶液，如强酸、强碱等。5.2 如有液体进入枪体，应及时擦干。5.3不得用移液枪搅拌液体。5.4准确洗液时如有气泡可将液体打回原容器再缓慢吸（吸取有沉淀和分层的液 体除外）。5.5 移液枪远离高温和潮湿环境，不要将移液枪放在造作台的边缘。5.6将移液枪竖直挂在枪架哈桑，要确定移液枪挂好才可离开。5.7移液器应轻拿轻放，在桌面上的摆放方向应为：吸头一端朝向前方，另一端 朝向自己。5.8定期对移液器进

53、行校准。5.9 平时取用移液器保持吸头一端向下。吸有液体的移液枪不应平放，枪头内的 液体很容易污染枪内部而可能导致枪的弹簧生锈。6. 移液器的清洁6.1夕卜部清洁：1）移液器使用完毕后，调至最大量程，用喷洒75%酒精的无纺布（不能太湿润） 擦净枪身，将移液枪竖直挂在枪架上。每周 1次对移液器咀进行75%酒精浸 泡15分钟左右，若使用过程中发生污染应随时浸泡处理。2）移液器外壳清洁，可先用日常清洁剂（肥皂液，洗洁精等）擦洗，然后用双 蒸水擦净晾干即可。6.2内部清洁：移液器内部清洁，先将移液器下半部分拆卸下来，其中塑料部件（套柄等）采用与外部清洁一致的方式即可；活塞清洁可用双蒸水（或先用异丙醇冲

54、洗再用双蒸水洗净），晾干即可（需要涂密封油脂的移液器还需要 涂上密封油脂）。注意：移液枪拆开清洁后要校准后才可以使用。移液器枪体密封部分，大多是免维护的，不能轻易拆卸。7_移液器封闭性的检查7.1绝大部分移液器不准是由于移液器漏气造成，造成移液器漏气的原因：吸头是否匹配？吸头的质量是否合格？装吸头是否上紧？移液器自身气密性是否良好？1）移液器气密性检测方法：A. 简单目视法检测，具体方法如下：取一个透明的容器，装上水，将需要测试的移液器装上吸头，吸上水。如果是200ul以下的移液器，请将吸头浸入液面1-2cm,静待20秒，观察吸头 内部液面是否下降，如果下降了，就说明您手中的移液器出现了漏气的

55、情况； 如果是1000ul以上的移液器，请将吸头朝下悬垂 20秒，观察是否有液体下 滴，如果有，说明您手中的移液器也出现了漏气的情况B. 专业压力泵检测如移液器本身密封性不好，需更换活塞或密封圈。冰箱使用维护规程1目的 对冰箱进行适当的维护，以确保冰箱的正常使用。2 适用范围本实验室使用的各种品牌、型号的冰箱（冷柜）。3 职责： 冰箱（冷柜）负责人严格按照此规程操作。4 .性能参数：见说明书。5.程序：5.1冰箱（冷柜）搬运与放置搬运冰箱（冷柜）时要切断电源，取出箱内所有物品，最大倾斜角度不超过45° （与垂直方向夹角），以防损坏冰箱制冷系统。5.旋钮，（冰柜应选平稳、坚固、不可燃的垫块）。冰箱（冷柜）应放置于水平地面并留有一定的散热空间，离墙壁有10 cm以上的空间。不可放置在太冷（低于5C）的环境中，远离热源避免阳直射。5.2冰箱（冷柜）的开机清洁：先对冰箱（冷柜）内部并进行清洁，用蘸有清水或含中性清洁试剂的 湿布对冰箱内部进行清洁，冰箱内部的抽屉可以拆出来单独清洗。静置30分钟：然后将冰箱（冷柜）放平，不要接通电源，静止 30分钟以 上。运行：调节