生化检验中的定标

1、.定标的意义：定标就是要找出一个参考点，就是一个K 值（或 F 值）。它是由仪器与试剂共同确定下来。当我们测定一个标本时，无论是手工或全自动生化分析仪，测出来的值只是一个吸光度 ，这个吸光度对我们没有什么意义，我们要把这个吸光度转化成一个浓度或是酶的活性，那就要乘上一个 K 值，计算出来的结果对我们就有意义了。K 值就是我们通过定标找出来的。一般来说测定K 值的最低要求是用标准品和试剂空白来测定，经过仪器测定出这两个吸光度，即标准品的吸光度和试剂空白的吸光度。K= 标准浓度 /(A标准 A 试剂空白 )PS ：A 表示吸光度标准液的浓度我们是知道的，这两个吸光度可以由仪器测出，这样就得出一个K

2、 值。任何标本，用其吸光度乘以K 值就得到了其浓度值。因此，K 值具有非常决定性的意义，可以决定标本的准确性。K 值的决定因素：我们看看 K 值会受到什么影响呢？第一，标准液的浓度一定要准确（标准液最好与标本一样是以血清为基质的）。第二， 标准液的吸光度与试剂空白的吸光度一定要准确。吸光度受仪器、试剂的影响，如果仪器稳定，试剂也稳定，那K 值就稳定。仪器和试剂是影响K 值的主要因素。如何确定 K 值是准确的？一般我们用质控血清来检查，最好是两种水平的质控来检查，如果质控结果很好，可以说 K值是准确的，用这个K 值计算出来病人的结果也是准确的，所以K 值非常关键。K 值的真面目：K 值实际上代表

3、了斜率，截距代表试剂空白，试剂空白每天都在变化，所以K 值的稳定性由仪器与试剂决定，如果仪器与试剂都十分稳定，那K 值也很稳定。多长时间定一次标合适？这要看您试剂的稳定性， 质控结果不好， 有些项目做试剂空白可以解决， 有些项目要做两点定标。酶的项目如何确定K 值：一是计算出来的理论K 值；K = (TV× 1000)/(SV× L×)二是用有酶项目的定标液得出K 值（ K= 标准浓度 /(A标准 A 试剂空白 ) ）：目前各公司可以提供多项目的定标液，不仅有底物类的项目，也有酶类的项目。.生化检验中的各种空白概念时间 :2009-5-8 9:54:09,点击 :

4、61对所谓 " 试剂空白 "" 样本空白 "" 水空白 "" 杯空白 " 等 " 空白 " 名词 , 有些同行可能感到困惑 . 特此汇集了一下各种言论 ( 包括本论 坛高手们发表的一些意见 ) 并结合自己的理解 , 总结如下 , 希望大家指正和补充 :空白概念区别要点 :* 空白 =只含 * 的空白（只含 * 的吸光度 ）1、试剂空白：由于生化测试测量的吸光度为相对吸光度，所以从理论上说，所有终点法的测试都需要把试剂本身的吸光度扣除， 试剂本身的吸光度就是试剂空白。 测量方法是按照正常测试的试剂

5、和样本量，把样本换成蒸馏水来测量。在传统手工方法中 , 每次测定都要做至少三个管 : 测定管、标准管、空白管。其中空白管是试剂加蒸馏水，测出来也就是试剂空白。因为操作环境、仪器状态、试剂稳定性等变异，所以要求每次都要测定试剂空白，称为实时试剂空白。在全自动分析仪上，大体上是模拟手工操作。但许多全自动分析仪为追求速度，在设计上采用一些折中方法来测定试剂空白。以日立全系列生化仪为例。该系列分析仪是做不了实时试剂空白，因为它们全是先加入样本后加试剂，为了折中， 只好在定标时做一个试剂空白，保存起来，需要扣除试剂空白时再减这个预先保存的值。 这种做法，对于比较稳定的试剂来讲，对结果影响不大。通俗的讲，

6、日立的仪器工作流程中首先是将标本加入到比色杯中，然后依次加入R1试剂、 R2 试剂，所以试剂空白在每个测定项目曲线中是无法看到的。但是7170 从 CALIBRATION中是可以看到的， S1ABS就是代表试剂空白吸光度， 在 CALIBRATION 画面里的下方找到 Reaction Monitor （反应监察），其中 STD(1) 就是代表试剂空白反应曲线 . 为了减小误差，日立仪器会连续做两次测定，所以你看到 FIRST 和 SECOND两条，计算时是取他们的平均值。做试剂空白目的之一就是观察试剂是否稳定， 积极采取措施纠正。 对于日立的这种试剂空白测定很多仪器都采用这种方法，也叫做试剂

7、空白校准。总的说来，自动生化仪上的试剂空白一般表现为零点吸光度，该吸光度是通过校准确立的。2、样本空白：由于溶血、脂血、黄疸等情况，会导致样本本身的吸光度对测试结果造成影响。所以对样本本身吸光度的测量，即样本空白，可以去除这方面的影响。测量方法是按照正常测试的试.剂和样本量， 把试剂换成蒸馏水或生理盐水来进行测量。自动生化仪上， 很难界定样本空白。消除样本空白有关的大约有如下几点:a).在双试剂测定时，加入试剂1 和样品后的吸光度可一定程度上扣除样本空白，所以有单试剂不能扣除样本空白的说法。b).现在优质的试剂的抗干扰能力都比较强，比如有些双试剂，R1 加入后先和样本孵育一段时间，将血红蛋白、脂肪、胆红素等反应掉，再加入R2 开始测定反应。在一定范围内都可以消除样本空白。c).现代全自动生化仪大多采用双波长测定. 双波长测定的原则是根据干扰组分和待测物质吸收光谱的峰形特征，选择两个波长和，使干扰组分在这两个波长处的吸光系数相等，而使待测物质在两波长处的吸光系数有显著差别。以两波长分别测定分析溶液的吸光度，以两个吸光度值之差 ( A)计算。这也可以扣除一部分样本空白.d).有些仪器 , 例如日立系列, 有专门的“血清信息”功能的设置。做法都是单独占用一个空白