苏教微生物培养基一学习教案

1、会计学1苏教微生物培养基一苏教微生物培养基一第一页，共40页。第2页/共40页第二页，共40页。病毒病毒(bngd)第3页/共40页第三页，共40页。SARS病毒病毒(bngd) 禽流禽流感病毒感病毒(bngd)第4页/共40页第四页，共40页。第5页/共40页第五页，共40页。真菌真菌(zhnjn)第6页/共40页第六页，共40页。如图是酵母菌电子显微如图是酵母菌电子显微镜下的形态镜下的形态(xngti)结结构构酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌(mjn)青霉青霉第7页/共40页第七页，共40页。 了解有关了解有关(yugun)培养基的基础知识，培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养进

2、行无菌技术的操作，进行微生物的培养。 一、课题一、课题(kt)目标：目标： 掌握培养基的制备掌握培养基的制备(zhbi)、高压蒸气灭菌、高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术，熟练、规范地和平板划线法等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。进行无菌操作，成功地培养微生物。无菌技术的操作。无菌技术的操作。二、课题重点和难点：二、课题重点和难点：三、技能目标：三、技能目标：第8页/共40页第八页，共40页。一一 基础知识基础知识:（3）按培养基的）按培养基的功能功能(gngnng)分：分： P12基础培养基基础培养基选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基（1）按培养基的）按培

3、养基的化学成分分：化学成分分：天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基半合成培养基半合成培养基阅读课本阅读课本(kbn)P8第三段第三段分别说出它们的优分别说出它们的优点、缺点。点、缺点。第9页/共40页第九页，共40页。第10页/共40页第十页，共40页。第11页/共40页第十一页，共40页。1 1、煮沸消毒法、煮沸消毒法:100:100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化学药剂消毒法、化学药剂消毒法: :用用75%75%酒精、新洁酒精、新洁尔灭等进行皮肤

4、消毒尔灭等进行皮肤消毒; ;氯气氯气(l q)(l q)消毒水消毒水源源4 4、紫外线消毒、紫外线消毒(1)常用消毒的方法：常用消毒的方法：第12页/共40页第十二页，共40页。1 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌: :2 2、干热、干热(n r)(n r)灭灭菌：菌：160-170 160-170 下下加热加热1-2h1-2h。3 3、高压蒸气灭菌：、高压蒸气灭菌：100kPa100kPa、121 121 下下维持维持15-30min.15-30min.(2)常用常用(chn yn)灭菌的方法：灭菌的方法：第13页/共40页第十三页，共40页。分类分类定义定义方法方法灭菌法灭菌法杀灭一切微生物杀灭一切

5、微生物物理法：热力、辐射、微物理法：热力、辐射、微波、等离子体波、等离子体化学法：醛类、烷化剂化学法：醛类、烷化剂高效消高效消毒法毒法杀灭一切致病微杀灭一切致病微生物生物紫外线、含氯剂、臭氧、紫外线、含氯剂、臭氧、复配剂等复配剂等中效消中效消毒法毒法杀灭除芽孢外的杀灭除芽孢外的致病微生物致病微生物超声波、碘类、醇类、酚超声波、碘类、醇类、酚类类低效消低效消毒法毒法杀灭细菌繁殖体、杀灭细菌繁殖体、亲脂病毒亲脂病毒单链季胺盐、双胍类、中单链季胺盐、双胍类、中草药、金属离子草药、金属离子第14页/共40页第十四页，共40页。第15页/共40页第十五页，共40页。三、实验三、实验(shyn)操作操作

6、1.制备牛肉膏蛋白制备牛肉膏蛋白(dnbi)胨培养基（用于培胨培养基（用于培养细菌）养细菌）第16页/共40页第十六页，共40页。基基pH中性或偏碱性，霉菌培养中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。基呈酸性。第17页/共40页第十七页，共40页。1 1配制配制(pizh)(pizh)：计算、称量、熔化：计算、称量、熔化2 2调节调节pHpH：用：用3%3%的的HCI/NaOHHCI/NaOH调节调节 pH 7 pH 70- 70- 72 23 3分装：分装过程中注意不要使培养基沾分装：分装过程中注意不要使培养基沾 在在 管口或瓶口上，以免沾污棉塞管口或瓶口上，以免沾污棉塞 而引起污染。分装三角烧瓶的

7、量而引起污染。分装三角烧瓶的量 以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。4 4包扎：包扎：操作步骤操作步骤:第18页/共40页第十八页，共40页。 5 5灭菌灭菌: : 将将50ml50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为，在压力为100kPa100kPa、温度为、温度为121121，灭菌，灭菌151530min30min。 将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在在160160170 170 下灭菌下灭

8、菌2h2h。 6 6倒平板倒平板: : 待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，在酒精灯附近左右时，在酒精灯附近倒平板。倒平板。2d2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接后观察平板，无杂菌污染才可用来接种种. . 7 7无菌检查：无菌检查： 将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入3737的温室中培养的温室中培养24244848小时，以检查灭菌是否小时，以检查灭菌是否(sh fu)(sh fu)彻底。彻底。第19页/共40页第十九页，共40页。倒平板倒平板(pngbn):第20页/共40页第二十页，共40页。 1 1、临时保藏、临时保藏(bocng)(bocng)：接种到：接种到固体斜面培养

9、基，固体斜面培养基，菌落长成后置于菌落长成后置于44冰箱保存。冰箱保存。 2 2、长期保存：甘、长期保存：甘油冷冻管藏法油冷冻管藏法第21页/共40页第二十一页，共40页。1.1.培养基灭菌后，需要冷却培养基灭菌后，需要冷却(lngqu)(lngqu)到到50 50 左右时左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手(tn shu)时，就可以进行倒平板了。时，就可以进行倒平板了。2.2.为什么需要使

10、锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。污染培养基。注意注意:第22页/共40页第二十二页，共40页。3.3.平板冷凝平板冷凝(lngnng)(lngnng)后，为什么要将平后，为什么要将平板倒置？板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位皿盖与皿底之间的部位(bwi)(bwi)，这个平板还能用，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？来培养微生物吗？为什么？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固答：平板冷凝后，皿盖上会凝结

11、水珠，凝固(nngg)(nngg)后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。生物。第23页/共40页第二十三页，共40页。第24页/共40页第二十四页，共40页。2 2、纯化、纯化(chn (chn hu)hu)大肠杆菌大肠杆

12、菌: :接种接种(jizhng)(jizhng)方法有：方法有：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法 平板划线法平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作作,将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面. 在数次画线后在数次画线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来可以分离到由一个细胞繁殖而来(r li)的肉眼可的肉眼可见的子细胞群体见的子细胞群体,这就是菌落这就是菌落.第25页/共40页第二十五页，共40页。第26页/共40页第二十六页，共40页。划线划线(hu xin)后后 培养一培养一段时间

13、后段时间后第27页/共40页第二十七页，共40页。第28页/共40页第二十八页，共40页。第29页/共40页第二十九页，共40页。 1. 1.为什么在操作的第一步以及每次划线为什么在操作的第一步以及每次划线(hu xin)(hu xin)之前都之前都要灼烧接种环？在划线要灼烧接种环？在划线(hu xin)(hu xin)操作结束时，仍然需要灼烧接操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种(jizhng)环是为了避免接种(jizhng)环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种(jizhng)环是为了杀死上次划线结束后，接种(jizhng)环上残

14、留的菌种，使下一次划线时，接种(jizhng)环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种(jizhng)环，能及时杀死接种(jizhng)环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。第30页/共40页第三十页，共40页。 2. 2.在灼烧在灼烧(zhu sho)(zhu sho)接种环之后，为什么要等接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？其冷却后再进行划线？答：以免接种答：以免接种(jizhng)(jizhng)环温度太高，杀死环温度太高，杀死菌种。菌种。 3. 3.在作第二次以及其后的划线在作第二次以及其

15、后的划线(hu xin)(hu xin)操作时，为操作时，为什么总是从上一次划线什么总是从上一次划线(hu xin)(hu xin)的末端开始划线的末端开始划线(hu (hu xin)xin)？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。第31页/共40页第三十一页，共40页。四、课题成果四、课题成果(chnggu)评价评价 （

16、一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无菌落后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌的；如果培养基上出现了其他菌落，

17、则说明接种过程中，无菌操作还未达到操作还未达到(d do)(d do)要求，需要分析原因，再次练习。要求，需要分析原因，再次练习。 （三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。习惯。第32页/共40页第三十二页，共40页。本课题知识本课题知

18、识(zh shi)(zh shi)小结小结: :第33页/共40页第三十三页，共40页。【典例解析【典例解析(ji x)(ji x)】 例例1 1关微生物营养物质的叙述中，正确的是关微生物营养物质的叙述中，正确的是: :A.A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B. B.凡碳源都提供凡碳源都提供(tgng)(tgng)能量能量C.C.除水以外的无机物只提供除水以外的无机物只提供(tgng)(tgng)无机盐无机盐 D. D.无机氮源也能提供无机氮源也能提供(tgng)(tgng)能量能量 解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生解析：不同的微生物，所需营养

19、物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于物的具体情况分析。对于A A、B B选项，它的表达选项，它的表达(biod)(biod)是不完整的。是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NH4HCO3NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于，也是能源，如蛋白胨。对于C C选项，除水以外的无机物种类繁多，选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；功能也多样。如二氧化碳，可作

20、为自养型微生物的碳源；NaHCO3NaHCO3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaClNaCl则只能提供无机盐。对则只能提供无机盐。对于于DD选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3NH3可为硝化细可为硝化细菌提供能量和氮源。菌提供能量和氮源。答案：答案：D第34页/共40页第三十四页，共40页。例例2 2下面对发酵工程中灭菌的理解下面对发酵工程中灭菌的理解(lji)(lji)不正不正确的是确的是: :A.A.防止杂菌污染防止杂菌污染 B. B.消灭杂菌消灭杂菌C.C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和

21、发酵设备都必须灭菌 D.D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前答案答案(d n)：B 解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A A说的是灭说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B B是错误的是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。灭杂菌，而是消灭全部微生物。C C是正确的，因为与发

22、酵有关的是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种种(jizhng)(jizhng)的，灭菌必须在接种的，灭菌必须在接种(jizhng)(jizhng)前，如果接种前，如果接种(jizhng)(jizhng)后再灭菌就会把所接菌种也杀死。后再灭菌就会把所接菌种也杀死。第35页/共40页第三十五页，共40页。编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5g