试验十血糖的测定教学文案

1、实验十血糖的测定精品资料实验十血糖的测定血液中的葡萄糖称血糖。正常人血糖浓度较恒定，维持在3. 9mmoJ/L6. 1mmoJ/L之间。血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件 之一，有着双重实际意义：其一，维持稳定的能源供给，满足机体在各种生理 状态下对能量的需求。其二，保证机体不因进食致血糖浓度过高，导致糖的丢 失。因此，血糖的测定是临床生化检验实验室的常规检测项目。血糖测定按其 发展过程及反应原理的不同，大致分三类：氧化还原法，缩合法（主要有邻甲苯胺法），酶法（主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法）。下边介绍两种方 法供选择。一、葡萄糖氧化酶法【目的】1. 了解葡萄糖氧化酶法测定血

2、糖的原理，能进行血糖测定的操作。2. 掌握血糖测定的临床意义。【原理】葡萄糖氧化酶（glucose oxidase ，GOD）能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过 氧化氢。后者在过氧化物酶（peroxidase ，POD作用下，分解为水和氧的同时 将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，即Trinder反应。其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在505nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。反应式如下：葡萄糖 + O2 + 2H2O °°匕 葡萄糖酸 + 2H2O22H2O2 + 4-氨基安替比林+酚 PO1 红色醌类化合物【器材】试管、吸管

3、、试管架、恒温水浴箱、分光光度计【试剂】1. O.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.0）称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于800ml蒸馏水 中，用1mol/L氢氧化钠（或1mol/L盐酸）调节pH至7.0，然后用蒸馏水稀 释至1L。2. 酶试剂称取过氧化物酶1200U,葡萄糖氧化酶1200U, 4-氨基安替比林10mg叠 氮钠100mg溶于上述磷酸盐缓冲液 80ml中，用1mol/L NaOH调pH至7.0 , 加磷酸缓冲液至100ml。置冰箱保存，4C可稳定3个月。3. 酚溶液称取重蒸馏酚100mg溶于100ml蒸馏水中（酚在空气中易氧化成红色，可 先配成500g/L

4、的溶液，贮存于棕色瓶中，用时稀释），用棕色瓶贮存。4. 酶酚混合试剂取上述酶试剂与酚溶液等量混合，4C可以存放一个月。5. 12mmol/L苯甲酸溶液溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水至1L。6 葡萄糖标准贮存液（100mmol/L）称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml 中，并移入100ml容量瓶内，再以12mmol/L苯甲酸溶液加至100ml。7.葡萄糖标准应用液（5mmol/L）吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml于100ml容量瓶中，加12mmol/L苯甲酸 溶液至刻度。【操作】取3支试管,编号，按下表操作。表3-

5、12血糖测定操作步骤加入物(ml)空白管标准管测定管血清葡萄糖标准液一0.020.02蒸馏水0.02一一酶酚混合液3.03.03.0混匀，置37 C水浴中保温15分钟，在波长505nm处比色，以空白管 调零，读取标准管及测定管吸光度。【计算】测定管吸光度血糖（mmol/L）=标准管吸光度血清葡萄糖(mmol/L)=标准管吸光度测定管吸光度【注意事项】1 测定结果如超过20mmoXL，应将标本用生理盐水稀释后再测定，结 果乘以稀释倍数。2 若酶酚混合试剂呈红色，应弃之重配。因标本和标准用量少，其加量 是否准确对测定结果影响较大，故其加量必须准确。3. GOD-PO法的第一步反应特异性高，而由 P

6、OD催化的第二步指示反应是非特异性的，易受标本中尿酸、维生素 C谷胱甘肽、胆红素等还原物的干 扰，这些物质与色素原竞争H202，使测定结果偏低。4. Trinder反应由Trinder于1969年提出。后经许多学者改进，采用2, 4-二氯酚、2-羟-3，5-二氯苯磺酸等代替苯酚，由于这些化合物氧化生成 的色素的摩尔吸光系数均高于苯酚，使反应灵敏度得以提高。【正常参考范围】3.9 6.1mmol/L【临床意义】1. 生理性高血糖 可见于摄入高糖饮食或注射葡萄糖后，或精神紧张、 交感神经兴奋，肾上腺分泌增加时。2. 病理性高血糖糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。对抗胰岛素

7、的激素分泌过多：如甲状腺功能亢进、肾上腺皮质功能及髓 质功能亢进、腺垂体功能亢进、胰岛 a-细胞瘤等。颅内压增高：颅内压增高（如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等）刺激血糖 中枢，出现咼血糖。脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。3. 生理性低血糖 饥饿或剧烈运动、注射胰岛素或口服降血糖药过量。4. 病理性低血糖胰岛素分泌过多：由胰岛 B细胞增生或胰岛B细胞瘤等引起。对抗胰岛素的激素分泌不足：如腺垂体功能减退、肾上腺皮质功能减退 和甲状腺功能减退等。严重肝病患者：肝贮存糖原及糖异生功能低下，不能有效调节血糖。【结果及分析】【思考题】1. 血糖有哪些来源和去路，机体是如何调节血糖浓度

8、恒定的?2. 酶试剂为什么要用磷酸缓冲液配制，用蒸馏水是否可以，为什么?二、邻甲苯胺法【目的】了解测定血糖的原理和方法，要求在实验中培养学生严谨的作风和准确地 进行实际操作的能力。【原理】葡萄糖在热的醋酸溶液中与邻甲苯胺缩合生成葡萄糖邻甲苯胺，后者脱水 生成雪夫（Schiff ）碱，再经结构重排，生成有色化合物。颜色的深浅与葡萄 糖含量成正比。其反应式如下：葡萄糖+ 邻甲苯葡萄糖邻甲苯胺葡萄糖邻甲苯也O*雪夫碱【器材】试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计【试剂】1 邻甲苯胺试剂于940ml冰醋酸中加入硫脲1.5g,邻甲苯胺60ml,混合，直至硫脲完全溶 解,置棕色试剂瓶中，室温保存。新配

9、试剂应放置24小时后（待老化）使用。 此试剂腐蚀性强，避免接触皮肤，应用自动吸管加液。2. 12mmol/L苯甲酸溶液于900ml蒸馏水中加入苯甲酸1.4g,加热助溶,冷却后置于1L容量瓶中, 加蒸馏水至刻度。3. 葡萄糖标准储存液（100mmol/L）仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除 谢谢5精品资料称取无水葡萄糖（预先置80C烤箱干燥至恒重，移置干燥器内保存）1.802g,溶解于80ml苯甲酸溶液中，移置100ml容量瓶中，再加苯甲酸溶液至刻 度。4 葡萄糖标准应用液（5mmol/L）取葡萄糖标准储备液5ml，置于100ml容量瓶中，加苯甲酸溶液至刻度。【操作】1取16X150mni式管3支按下表进行操作：表3-13 血糖测定操作步骤试剂（ml）测定管标准管空白管血清或血浆葡萄糖标准应用液0.10.1蒸馏水0.1邻甲苯胺试剂3.03.03.02 将上述各管混匀放入沸水浴中加热 12分钟，取出用自来水冷却5分 钟。注意在煮沸时水浴中的水面必须高于试管内的液面。否则则温度不均而影 响比色。3用波长630nm分光光度计进行比色，空白管调零点，读取测定管与标 准管吸光度。4 计算测定管吸光度血糖（