验证体会(四川sj)[1]

1、马仕洪马仕洪Tel: 010 - 6709 5509中国药品生物制品检定所中国药品生物制品检定所2021-12-17中国药品生物制品检定所2验证实验的几点体会验证实验的几点体会 无菌检查法验证实验要点无菌检查法验证实验要点 微生物限度检查法验证实验要点 验证实验实例2021-12-17中国药品生物制品检定所3无菌检查法验证实验要点无菌检查法验证实验要点 样品样品 菌种和实验用菌液菌种和实验用菌液 标准化操作标准化操作 实验器材实验器材2021-12-17中国药品生物制品检定所4无菌检查样品无菌检查样品无菌检查样品无菌检查样品取样量取样量（量）（量）样品特性样品特性（质）（质）抗菌活性抗菌活性剂

2、型剂型检验数量检验数量检验量检验量侧重验证实验侧重验证实验侧重无菌检查侧重无菌检查敏感菌选择敏感菌选择去除抗菌活去除抗菌活性方法选择性方法选择前处理方法前处理方法2021-12-17中国药品生物制品检定所5无菌检查样品无菌检查样品 主要是取样量的问题主要是取样量的问题 中国药典中国药典20052005年版对无菌检查的年版对无菌检查的“检验数量检验数量”和和“检验量检验量”作了明确的作了明确的解释和规定。解释和规定。2021-12-17中国药品生物制品检定所6表表2 2中上市抽验样品（液体制剂）的最少检验量中上市抽验样品（液体制剂）的最少检验量供试品装量供试品装量V V(ml)(ml)每支样品接

3、入每管培每支样品接入每管培养基的最少样品量养基的最少样品量最少检验数量最少检验数量( (瓶或支瓶或支) ) 1 1 1V5 1V5 5 V20 5 V20 20 V50 20 V50 50 V100 50 V100 50 V100( 50 V500 V500全量全量半量半量2ml2ml5ml5ml10ml10ml半量半量半量半量500ml500ml2020* *101010101010101010106 66 6* * 每种培养基各接种每种培养基各接种1010支供试品支供试品2021-12-17中国药品生物制品检定所7 表表3 3中上市抽验样品（固体制剂）的最少检验量中上市抽验样品（固体制剂）

4、的最少检验量 供试品装量M/支、瓶或个每支样品接入每管培养基的最小样品量最少检验数量（瓶或支） M50mg 50mgM300mg 300mgM5g/袋9g以1H3PO4溶液溶解，转移至400ml 0.1%蛋白胨溶液，振摇，平均分配至三个滤筒，滤过盐酸加替沙星原料5g/袋9g转移至400ml 0.1%蛋白胨溶液，振摇，平均分配至三个滤筒，滤过注射用加替沙星0.4g/瓶12瓶转移至400ml 0.1%蛋白胨溶液，振摇，平均分配至三个滤筒，滤过注射用加替沙星0.2g/瓶15瓶转移至400ml 0.1%蛋白胨溶液，振摇，平均分配至三个滤筒，滤过加替沙星氯化钠注射液100ml/袋9袋平均分配至三个滤筒，

5、滤过加替沙星氯化钠注射液20ml/支8支平均分配至三个滤筒，滤过2021-12-17中国药品生物制品检定所74加替沙星无菌检查法验证实验加替沙星无菌检查法验证实验加替沙星原料溶解液的选择与验证加替沙星原料溶解液的选择与验证 由于加替沙星原料不易溶于水，无菌检查前应先进行溶解。0.1mol/L盐酸是溶解加替沙星的良好溶剂，但盐酸是挥发性酸，灭菌时容易腐蚀不锈钢材质的高压锅，所以选用1H3PO4溶液。 取500ml 1H3PO4 滤过三个滤筒，每筒加入100ml硫乙醇酸盐流体培养基，分别加入1ml金葡球菌、枯草杆菌和铜绿假单胞菌菌液，35培养逐日观察，24小时生长正常。2021-12-17中国药品

6、生物制品检定所75加替沙星无菌检查法验证实验加替沙星无菌检查法验证实验冲洗方法和条件冲洗方法和条件 采用0.1蛋白胨溶液冲洗样品滤筒，每个滤筒50ml/次，每次冲洗充分振摇，抽干，加入100ml规定培养基，通过分别接种1ml阳性菌菌液验证冲洗的效果。 2021-12-17中国药品生物制品检定所76冲洗方法和条件冲洗方法和条件图图 分别冲洗分别冲洗800800、12001200、16001600mlml体积的体积的348348号样品接种生孢梭菌与空白和阴性号样品接种生孢梭菌与空白和阴性实验相同条件培养后的生长情况比较实验相同条件培养后的生长情况比较图图 与上图同时进行的与上图同时进行的4 4组阳

7、性对照实验接种生孢梭菌的生长情况组阳性对照实验接种生孢梭菌的生长情况2021-12-17中国药品生物制品检定所77加替沙星无菌检查法验证实验加替沙星无菌检查法验证实验中和剂的选择中和剂的选择据文献报道，金属离子的络合作用，可以降低加替沙星的活性。选择FeCl3和MnSO4进行筛选实验。2021-12-17中国药品生物制品检定所78加替沙星无菌检查法验证实验加替沙星无菌检查法验证实验中和剂的选择中和剂的选择分别配制0.1mol/L的FeCl3和MnSO4溶液。0.1mol/L的FeCl3溶液在湿热灭菌时即浑浊，故采用薄膜过滤除菌；而0.1mol/L的MnSO4溶液湿热灭菌后澄清透明。培养基加1m

8、l金葡球菌再加5ml 0.1mol/L MnSO4溶液生长良好；相同条件加5ml 0.1mol/L的FeCl3溶液5日内仍无菌生长。显示FeCl3溶液对细菌生长有抑制作用，故选择MnSO4溶液作为中和剂进一步验证。2021-12-17中国药品生物制品检定所79加替沙星无菌检查法验证实验加替沙星无菌检查法验证实验中和剂的加入时机中和剂的加入时机用0.1mol/L MnSO4溶液或者0.01mol/L MnSO4溶液冲洗样品滤筒以及把MnSO4溶液与样品溶液混合过滤均造成液流不畅，所以，选择以5ml 0.1mol/L MnSO4溶液直接添加到培养基中作为中和剂添加方法。2021-12-17中国药品

9、生物制品检定所80加替沙星无菌检查法验证实验加替沙星无菌检查法验证实验中和剂验证中和剂验证 取240号样品，冲洗100和300ml后加入100ml培养基，在培养基中加入5ml 0.1mol/L MnSO4溶液，再加入1ml阳性菌菌液。实验结果见下表2021-12-17中国药品生物制品检定所81阳性阳性菌菌冲洗体积冲洗体积1 1d d2 2d d2 2d d4 4d d5 5d d生孢生孢梭菌梭菌阳性对照阳性对照100100mlml300300mlml大肠大肠埃希埃希菌菌阳性对照阳性对照100100mlml300300mlml2021-12-17中国药品生物制品检定所82几个微生物限度检查法的验

10、证几个微生物限度检查法的验证序号序号检品名称检品名称供试液制备供试液制备细菌计数细菌计数霉菌计数霉菌计数控制菌检查控制菌检查1氨酚氢可酮口服液取原液10ml稀释成1：10供试液常规法常规法常规法2醋酸可的松滴眼液取原液作为供试液簿膜过滤法,冲洗300ml簿膜过滤法,冲洗300ml簿膜过滤法,冲洗300ml3复方地塞米松乳膏取10g加十四烷酸异丙酯20ml分散均匀，加稀释剂100ml充分振摇，静止至分层，取下层水层部分作为供试液 簿膜过滤法,冲洗800ml簿膜过滤法,冲洗800ml簿膜过滤法,冲洗800ml4复方丹参片取10g，加100ml稀释液，电动匀浆2000r/ min、2分钟簿膜过滤法,冲洗400ml常规法簿膜过滤法,冲洗400ml5清开灵片取10g，加100ml稀释液，电动匀浆2000r/ min、2分钟簿膜过滤法,冲洗400ml常规法常规法6银杏叶片取10g，加100ml稀释液，电动匀浆2000r/ min、2分钟簿膜过滤法,冲洗300ml常规法胆盐乳糖增菌液采用500 ml稀释培养；乳糖发酵采用40ml稀释培养7消糖灵胶囊取10g，加100ml稀释液，电动匀浆2000r/ min、2分钟培养基稀释法0.5ml/皿常规法常规法2021-12-17中国药品生物制品检