LCMS原理及图谱分析GCMS原理及图谱分析分析制备方法-米莉莉

1、色谱分析课程色谱分析课程 Analysis Dept. 分析部提供色谱分析和分离纯化服务分析部提供色谱分析和分离纯化服务 色谱分析色谱分析项目包括以下项目包括以下: LC-MS HPLC GC-MS Chiral HPLC 分离纯化分离纯化项目包括以下项目包括以下: PREP-HPLC Chiral PREP-HPLC LC-MS 一一.送样注意事项送样注意事项 1. 均匀取样均匀取样: 将样品混合好再取样。将样品混合好再取样。 2. 送样量：送样量： 固体约为固体约为1mg 、液体约为、液体约为10ul。 3. 要求样品必须要求样品必须澄清透明澄清透明，以免损坏色谱柱；，以免损坏色谱柱； 若

2、样品混浊若样品混浊,请用滤头过滤后再测样请用滤头过滤后再测样. 4. 请使用甲醇、乙腈、水、请使用甲醇、乙腈、水、THF、DMSO、 DMF等极性溶剂溶解样品，尽量避免使用正等极性溶剂溶解样品，尽量避免使用正 己烷等非极性、弱极性溶剂溶样己烷等非极性、弱极性溶剂溶样. 5. 设样时请自己记住样品报告的设样时请自己记住样品报告的Datafile,以便快以便快 速查找报告速查找报告. 6 . 正在进样时不能往样品盘放样品正在进样时不能往样品盘放样品. 二二.仪器的配置仪器的配置LC/MS (Agilent 1100 LC , VL MS; Shimadzu Shimadzu 2010 A2010

3、A ) ESLD (SEDEX 75; PL1000 ) ESLD HPLC DAD MSD 样品先经过色谱柱的分离后进行DAD测试，再分流两路进入ELSD和MS检测器测试。. 检测器的说明检测器的说明n 二极管阵列检测器二极管阵列检测器(Diode-Array Detector,DAD)分析整个波长范围(190nm- 800nm)有吸收的组分,提供三维信息(T-A) ,确定最大吸收波长. 其中在我们的报告提取波长为214nm的色谱图. 蒸发光散射检测器蒸发光散射检测器(Evaporation light-scatter Detector ,ELSD)是一种质量型检测器，对所有固体物质均有几乎

4、相等的响应，与待测物的光学性质或电化学性质无关,故对于没有光学吸收特征的物质可获得检测. 液质联用液质联用 (liquid Chromatagraphy-Mass Spectrometry) 可提供 色谱,光谱,质谱等多种信息, 其中在我们的报告中打印有 总离子色谱图(Total ion current chromatogram,TIC), 提取离子色谱图 (extract ion chromatogram,EIC) , 质谱棒状图(Mass spectrum) 总离子色谱图总离子色谱图TIC -分析时间内所有扫描获得的离子 流强度对时间作图所得的色谱图. 提取离子色谱图提取离子色谱图EIC根

5、据监测化合物分子量提取其产生的离子 流强度对时间作图所得的色谱图. 质谱棒状图质谱棒状图-不同质量的离子质荷比与其相对的离子强度所形成的谱图三三. 色谱条件色谱条件:酸性条件: 0.05%-0.01% TFA in ACN and H2O; gradient 10% to 90%; 酸法酸法 1-L-P 常规酸法正离子 1-L-P-S 短柱酸法正离子 1-L-P- CN CN基柱酸法正离子 碱性条件: ACN/10mM NH4HCO3 in H2O; gradient 10% to 90%; 碱法碱法 2-L-P 碱法正离子 2-L-N 碱法负子 4.图谱分析图谱分析 分析报告的格式与解释 图

6、1：ADC ELSD： 蒸发光散射检测器检测的色谱图。 图2：DAD 214nm 紫外波长为214nm的色谱图. 对于较纯的样品，色谱峰在1000mAu范围内表明样品浓度较适宜, 若色谱峰过高，表明样品浓度较高，所检测出的杂质百分含量校高。 图3：MSD TIC 总离子色谱图 图4：EIC提取离子色谱图;正离子模式（pos,positive +H，+Na ） 或负离子模式（neg ，negative -H）。 图5：质谱棒状图。 积分结果表：分别表示ELSD、DAD 214nm色谱峰的面积百分比, 其中MSBase项提供的数据因软件问题有所出入，该项数据不作参考。三三. . 图谱的特殊说明图谱

7、的特殊说明1.无机盐在ELSD上有信号,而MS,UV无信号. min012345678mAu1000150020002500 ADC1 B, ELSD (06164268.D) 3.127 4.075min012345678mAU025050075010001250 DAD1 B, Sig=214,4 Ref=360,80 (06164268.D) 4.003 5.410 5.602min012345678050000100000150000200000 MSD1 TIC, MS File (06164268.D) API-ES, Pos, Scan, Frag: 80 4.1772.样品的分

8、子量小,易挥发,ELSD出现无信号min02468mAU415420425 ADC1 A, ADC1 CHANNEL A (10224206.D) 0.362min02468mAU0200400600 DAD1 B, Sig=214,4 Ref=360,80 (10224206.D) 4.254 5.937min024680100000200000300000 MSD1 TIC, MS File (10224206.D) API-ES, Pos, Scan, Frag: 80 4.367min024680100000200000 MSD1 152, EIC=151:153 (10224206.

9、D) API-ES, Pos, Scan, Frag: 80 4.3823.不易电离的化合物，MS 出现无信号,需外送做EI；极性弱，易挥发样品,需外送做GC-MSmin012345678mAU5001000150020002500300035004000 ADC1 A, ADC1 CHANNEL A (08054103.D) 5.192 5.562min012345678mAU0100200300400500600700 DAD1 B, Sig=214,4 Ref=360,80 (08054103.D) 5.058 5.428min012345678200004000060000800001

10、00000120000140000 MSD1 TIC, MS File (08054103.D) API-ES, Neg, Scan, Frag: 80NSFNHSO2CH34.溶剂（DMSO、THF、ETAC等）在UV214 有信号，而在MS、ELSD上 无信号。 min0123456mAu400420440460480500 ADC1 A, ADC1 (10194268.D) 3.503min0123456mAU0500100015002000 DAD1 B, Sig=214,4 Ref=360,80 (10194268.D)DMSO 2.665 3.358 4.077min0123456

11、020000400006000080000100000 MSD1 TIC, MS File (10194268.D) API-ES, Pos, Scan, Frag: 80 3.358 3.491 3.892min0123456mAu50075010001250150017502000 ADC1 A, ELSD (B0902294.D) 4.868min0123456mAU0250500750100012501500 DAD1 A, Sig=214,4 Ref=360,80 (B0902294.D) 3.944 4.706 5.359min012345601000002000003000004

12、00000500000 MSD1 TIC, MS File (B0902294.D) API-ES, Pos, Scan, Frag: 80 4.796nm220240260280300320340360380mAU020040060080010001200*DAD1, 0.896 (1418 mAU, - ) Ref=0.003 & 5.316 of B0902294.D四四. 关于分子量的解释和注意事项关于分子量的解释和注意事项 在画分子结构的过程中，我们发现含Cl、Br、S等有同位素且丰度较高的化合物使用CHEMDRAW 和ISISDRAW计算出的分子量有出入，后者计算出的分子量

13、往往是错误的，所以统一规定大家都用CHEMDRAW 计算分子量。 以C6H6NCl为例举例说明几个概念 准确分子量（Exact mass)：是用较轻同位素35Cl计算出的分子量 平均分子量：是用同位素35Cl和37Cl自然丰度加权平均算出的分子量我们质谱棒状图最前面的线的质荷比就是准确分子量用CHEMDRAW计算分子量如下NClClChemical Formula: C6H5Cl2NExact Mass: 160.98Molecular Weight: 162.02m/z: 160.98 (100.0%), 162.98 (63.9%), 164.97 (10.2%), 161.98 (6.9

14、%), 163.98 (4.2%)Elemental Analysis: C, 44.48; H, 3.11; Cl, 43.76; N, 8.65用ISISDRAW计算分子量如下NClClMolecular Weight =162.02Exact Mass =161Molecular Formula =C6H5Cl2NMolecular Composition =C 44.48% H 3.11% Cl 43.76% N 8.65%五五. Easy-Access使用说明使用说明Easy-Access 界面一 按Submit键提交样品界面三 输入样品相关信息后 Load samples界面四 按

15、照提示放好样品按OK确认后回到界面一查看数据编号 PREP-HPLC一一. PREP-HPLC反相体系反相体系 通常为水-有机相(甲醇、乙腈);为获得良好的色谱分离效果，有时会加入后处理可除去的酸、碱、盐。二二. 分离纯化体系的选择应与化合物的性质相关。分离纯化体系的选择应与化合物的性质相关。 1.正相分离手段应作为首选纯化的办法 2.在正相系统不能分离及其极性在中等或较大的化合物才适合用反相反相PREP-HPLC体系体系. 3. 在甲醇、乙腈、DMF、DMSO或THF中有良好的溶解性样品适合用反相反相PREP-HPLC体系体系.三三. 送样要求送样要求: 1.样品中不应含有强酸及强碱以及其它

16、对色谱柱产生损害的物质 2.样品中不应含有较大量的无机盐，防止堵塞柱子及流路。 3.目标化合物含量应尽可能大于20%，样品颜色深含量低的可先过柱（薄板）后再送制备。 4. 送样时请附上制备前的分析图谱， 5. 样品溶解性差、稳定性差的要对制备人员说清楚。 Chiral HPLC送样要求送样要求 送样量： 固体约为1mg 、液体约为10ul。请注明所用溶剂及样品浓度。 送手性分析的样品，HPLC纯度必须在90%以上。GC-MS送样要求送样要求 .GC-MS适合于做挥发性及热稳定的样品，送样时请注意样品的性质（无机盐不能做）。 送样人员送样时应附有送样单并在分析人员提供的样品登记单上登记。 均匀取样。 .送样量： 固体约为0.