植物体内磷主要以有机磷如核酸资料9

1、植物体内磷主要以有机磷如核酸、磷脂、植素等的形态存在于植物组织中，有机磷须经干灰化或湿灰化分解转变为无机正磷酸盐。溶液中磷一般用比色法测定。湿灰化应用不同比例的 HNO3、H2SO4、HClO4 的方法较为普遍， 湿灰化法 的消煮温度不会超过混合酸的沸点，灰分元素不会形成难溶的硅酸盐，而 且当用H2SQ或HCIC4消煮时，可使SiO2充分脱水且使其吸附作用降至最低 限度，不致造成灰分元素测定产生显著的负误差。但是由于试剂用量大， 会带来污染的危险，试剂空白值大。当然加有HNO3 的湿灰化法， 则不能在消煮液中同时测定氮。在干灰化法中，所用的温度有所不同，一般建议灰化温度不超过 500C, 而时

2、间为28h，近年来，改进的干灰法中，添加一些“助灰化剂”，在灰化时通Q,添加KHSO等，帮助灰化；干灰化添加试剂量少，污染的可 能性比湿灰化小，而且简便易行。对于植物全磷的测定用HSO- H2Q消煮法，同时测定氮、磷和钾较为方便。总之，方法的选择应根据测定元素的 各类、具体条件来决定。溶液中磷的测定，最常用的钼蓝比色法和钒钼黄 比色法，可根据样品中磷的含量选用测定方法，当磷的含量高时，选用钒 钼黄法为佳，反之则可用钼蓝法。13.2.2.1植株中磷的测定（H2SQ- H2Q2消煮，钒钼黄比色法）13.2.2.1.1 方法原理植物样品经HSQ H 2Q2消煮分解制备待测液（同1321.1.4）。待

3、测液中正磷酸能与偏磷酸盐和钼酸盐在酸性条件下作用形成黄色 的杂聚化合物钒钼酸盐，其组成沿不能十分肯定，有人认为是 RQV2O 22MoOnfQ溶液的黄色很稳定，其深浅与磷含量成正比， 可用比色法测定磷的含量。比色时可根据溶液中磷的浓度选择比色波长 400490nm磷的浓度高时选择较长的波长，较低时选用较短的波长。钒 钼 黄 法 要 求 比 色 液 中 酸 的 浓 度 （ 即 终 浓 度 ） 很 宽 ， 极 限 是 0.041.6mol L （H）;酸度太高时显色不完全或不显色， 太低时则可能生 成沉淀或其它物质的颜色。钒酸盐的终浓度范围是8.0 X 10-52.2 X 10-3-1-3-3mo

4、l，通常用后一种浓度。 钼酸盐的终浓度范围是 1.6 X 10 5.7 X 10molL-1。在正常的室温变化范围内对黄色强度无影响。黄色发生很快， 在最初15min内会降低约1.3%，以后至少2h内很稳定，在24h内也无显 著变化。本法操作简便快速，准确度和重复性较好，相对误差约为13%；灵敏度较钼蓝法低，适测范围广，约为120 mg-L-1 ;对酸的浓度要求不严格， 容易控制，在HNO、HCI、HSO、HCIC4等介质中都可适用；干扰离子少， 特别是Fe3+的允许量远高于钼蓝法，因此该法广泛用于植物和有机肥料样 品中磷的测定。13.2.2.1.2 主要仪器：消煮管 （瓶）；控温消煮炉；分光

5、光度计。13.2.2.1.3 试剂1. 钒钼酸铵试剂：称（NH4）6MoQ 4fO12.5g溶于200mL水中。另将 偏钒酸铵（NH4VO） 0.625g溶于沸水150mL中，冷却后，加入浓HNO125mL 再冷却至室温。将钼酸铵溶液缓慢地注入钒酸铵溶液中，随时搅拌，用水 稀释至 500mL。-12. 6mol L NaOH溶液：称 NaOH 24g溶于水，稀释至100mL3. 2,6-二硝基酚指示剂：2,6-二硝基酚0.25g溶于100mL水中。其 变色范围是 pH2.4 （ 无色）4.0（ 黄色） 。变色点是 pH3.1。4. 50 口 g mL1 P标准溶液：准确称取经105C烘干的KH

6、PO0.2195g , 溶于水，移入1000mL容量瓶，加水至约400mL,加浓硫酸5mL,用水定容。 装入塑料瓶中低温保存备用。5. 其它试剂同 13.2.1.1.3。13.2.2.1.4 操作步骤吸取1321.1.4 消煮好经过滤的待测液 2025mL（含P 0.251.0mg）， 置于50mL容量瓶中，加2,6-二硝基酚指示剂2滴，用6mol L-1 NaOH 溶液中和至刚呈黄色，加入钒钼酸铵试剂10.00mL，用水定容。放置15min 后用波长450nm在分光光度计上比色，以空白液调节仪器零点。-1标准曲线制作：分别吸取 50卩g mL P标准溶液0，1.0，2.5， 7.5，10.0

7、，15.0于50mL容量瓶中，同上述操作步骤显色和测定，该标准 系列 P 的浓度分别为 0, 1.0,2.5，5.0,7.5 ,10.0 ,15.0 卩 g mL1 。13.2.2.1.5 结果计算全 P (%) = P V X分取倍数x 10-4 / m式中：p 从标准曲线查得显色液P的质量浓度-1(u g mL );V显色液体积(mL); 分取倍数消煮液定容体积 (mL) /吸取消煮液体积 (mL)；m干样品质量(g)。1322.2 植株中磷的测定(H2SO-H2Q消煮，钼锑抗比色法)13.2.2.2.1 方法原理植物样品经 "SQ-H2Q分解(原理同13.2.1.1.1)。溶液

8、中的磷用钼锑 抗比色法测定。13.2.2.2.2 主要仪器：同 13.2.2.1.2；13.2.2.2.3 试剂1. 浓 H2SO4；-12. 300g LH2C2 ;第 5 页3. 50 g mL1标准溶液：同 13.2.2.1.3(4);4. 其它试剂同5.2.2.3。13.2.2.2.4 操作步骤吸取13.2.1.1.4消煮好经过滤的待测液 25mL含P 525卩g)置于50mL容量瓶中，按照5.2.2.4 ，2调节溶液酸度和显色步骤进行比色测定。标准曲线制作：同5.2.2.4 ，3。13.2.2.2.5 结果计算：参照 13.2.2.1.513.2.2.2.6 注释：参照 5.2.2.

9、6HCIQ HSO 法5.2.2.1 方法原理 用高氯酸分解样品，因为它既是一种强酸，又是 一种强氧化剂，能氧化有机质，分解矿物质，而且高氯酸的脱水作用很强， 有助于胶状硅的脱水，并能与Fe3+络合，在磷的比色测定中抑制了硅和铁的干扰。硫酸的存在提高消化液的温度，同时防止消化过程中溶液蒸干， 以利消化作用的顺利进行。本法用于一般土壤样品分解率达9798%但对红壤性土壤样品分解率只有95%左右。溶液中磷的测定采用钼锑抗比色法(其原理见5.2.1.2)。5.2.2.2主要仪器 721型分光光度计；LNK-872型红外消化炉。5.2.2.3试剂(1)浓硫酸(H2SO，p 1.84g cm-3 ，分析

10、纯)；70 72%高氯酸(HCIO4, p3 1.60g cm-，分析纯)2，6-二硝基酚或2, 4-二硝基酚指示剂溶液：溶解二硝基酚0.25g于100mL水中。此指示剂的变色点约为pH3,酸性时无色，碱性时呈黄色。(4) 4mol L-1氢氧化钠溶液：溶解 NaOH 16g于100mL水 中。(5) 2molL-1(1/2 H 2SO)溶液，吸取浓硫酸 6mL,缓缓加入80mL水中，边加边搅动，冷却后加水至100mL(6) 钼锑抗试剂： A.5g.L-1酒石酸氧锑钾溶液：取酒石酸氧锑钾K(SbO)C4HO0.5g，溶解于100mL水中。B.钼酸铵一硫酸溶液：称取钼 酸铵(NH)6MoQ4 4

11、H2O10g,溶于450mL水中，缓慢地加入153mL浓HSO， 边加边搅。再将上述 A溶液加入到B溶液中，最后加水至1L。充分摇匀， 贮于棕色瓶中，此为钼锑混合液。临用前(当天)，称取左旋抗坏血酸 ©HQ，化学纯)1.5g，溶于100mL 钼锑混合液中，混匀，此即钼锑抗试剂。有效期 24小时，如藏于冰箱中则有效期较长。此试剂中 HSQ为5.5mol L-1（H+），钼酸铵为10g L-1，酒 后酸氧锑钾为0.5g L-1，抗坏血酸为15g L-1。（7）磷标准溶液：准确称取在105 C烘箱中烘干的KHPQ（分析纯）0.2195g，溶解在400mL水中，加浓 HSQSmL（加HSQ防

12、长霉菌，可使1 溶液长期保存），转入1L容量瓶中，加水至刻度。此溶液为50卩g mL P标准溶液。吸取上述磷标准溶液25mL，稀释至250mL，即为5卩g mLP标准溶液（此溶液不宜久存）。5.224 操作步骤（1 ）待测液的制备：准确称取通过100目筛子的风干土样 0.50 XX 1.0 XXXg （任°，置于50mL幵氏瓶（或100mL消化管）中，以少 量水湿润后，加浓 H2SO8mL摇匀后，再加 70 72%HClO10滴，摇匀， 瓶口上加一个小漏斗，置于电炉上加热消煮（至溶液幵始转白后继续消煮）20min。全部消煮时间约为 4060min。在样品分解的同时做一个空白 试验，即

13、所用试剂同上，但不加土样，同样消煮得空白消煮液。将冷却后的消煮液倒入100mL容量瓶中（容量瓶中事先盛水3040mL）， 用水冲洗幵氏瓶（用水应根据少量多次的原则），轻轻摇动容量瓶，待完全 冷却后，加水定容。静置过夜，次日小心地吸取上层澄清液进行磷的测定； 或者用干的定量滤纸过滤，将滤液接收在100mL干燥的三角瓶中待测定。(2) 测定：吸取澄清液或滤液 5mL(对含P, 0.56g kg-1以下的样 品可吸取10mL),以含磷(P)在2030 g为最好注入50mL容量瓶中， 用水冲稀至30mL，加二硝基酚指示剂 2滴，滴加4mol L-1 NaOH溶液直至1溶液变为黄色，再加2mol L (

14、1/2 fSO) 1滴，使溶液的黄色刚刚褪去(这 里不用NHOH调节酸度，因消煮液酸浓度较大，需要较多碱去中和，而NHOH 浓度如超过10g -L-1就会使钼蓝色迅速消退)。然后加钼锑抗试剂5mL，再 加水定容50mL，摇匀。30min后，用880nm或700nm波长进行比色(注2)， 以空白液的透光率为100(或吸光度为0)，读出测定液的透光度或吸收值。1(3) 标准曲线：准确吸取5口 g mL-，P标准溶液0、1、2、4、6、8、10mL分别放入50mL容量瓶中，加水至约 30mL，再加空白试验定容后的 消煮液5mL，调节溶液pH为3,然后加钼锑抗试剂 5mL，最后用水定容至 50mL 30min后进行比色。各瓶比色液磷的浓度分别为 0、0.1、0.2、0.4、-10.6、0.8、1.0 口 g mL P。5.2.2.5 结果计算从标准曲线上查得待测液的磷含量后，可按下式进行计算：土壤全磷(P)量(g kg-1) = pX V/mx V2/V1X 10-3式中：p 待测液中磷的质量浓度，口 g mL 1;V 样品制备溶液的 mL数；第9页m 烘干土质量 (g) ；Vi吸取滤液mL数；V 2 显色的溶液体积 (mL) ；10 -3将ug数换算成每kg 土壤中含磷的g数的乘数5.