补肾活络中药对雄激素致不孕大鼠卵泡数、子宫内膜面积和内分泌的影响

1、              作者：何倩,王永宏,周小青,唐金强,刘旺华【摘要】  目的 观察补肾活络中药用药前后雄激素致不孕大鼠(asr)卵巢卵泡数、子宫内膜面积和内分泌的变化。方法 建立雄激素致高胰岛素、高雄激素不孕大鼠模型,通过阴道涂片筛选各组大鼠；卵巢、子宫重量采用电子天平称重法,血清促卵泡刺激素(fsh)和促黄体生成素(lh)的测定采用放免法,卵泡数的测定采用免疫组化法。结果 卵巢、子宫重量分析：正常组中药组阳性组模型组；卵泡数、子宫内膜面积免疫组

2、化定量分析：正常组中药组>阳性组>模型组；血清fsh和lh水平：阳性组正常组中药组模型组。结论 中药补肾活络方能增加asr卵巢重量,增加卵巢各级卵泡总数,使卵巢激素的靶器官子宫明显增重,内膜明显增厚,能增强垂体的内分泌功能,促进促性腺激素的合成和释放,提高垂体促性腺激素水平,以促进卵泡的发育和卵巢的排卵。 【关键词】  补肾活络方；雄激素致不孕大鼠；卵泡数；子宫内膜面积；内分泌abstract：objective to observe the effect of bushenhuoluofang on follicular number, endomelrium area

3、 and endocrine of androgen sterilized rats (asr). methods asr model was set up and screened by vaginal smear. the weight of ovary and uterus was weighed by electron balance, the level of fsh and lh was detected by radioimmunoassay, and follicular number by immunohistochemical method. results  w

4、eight of ovary and uterus in normal control group>model rats treated with bushenhuoluofang group>positive control group>model rats group. level of follicular number endomelrium area in normal control group>model rats treated with bushenhuoluofang group>positive control group>model

5、rats group. fsh and lh level in positive control group>normal control group>model rats treated with bushenhuoluofang group>model rats group. conclusion bushenhuoluofang increased the weight of ovary and uterus, follicular number and endomelrium area of asr. by affecting the level of fsh and

6、 lh of the rat, improves its endocrine function and the growth of follicle, bushenhuoluofang achieved the purpose of promoting ovulation. key words：bushenhuoluofang；androgen sterilized rats；follicular number；endomelrium area；endocrine 女性不孕症中排卵障碍是临床常见的原因,主要表现为卵子发育成熟障碍以及卵子的排出障碍,其结果都会导致不孕。中医方药对卵巢促

7、排卵及助孕安胎作用已被大量临床病例所证实,具有确切疗效。本实验观察了补肾活络中药治疗前后雄激素致不孕大鼠(asr)卵泡数、子宫面积和促性腺激素水平的变化,从而为本病的发病和补肾活络中药对其治疗作用的机制提供一定的理论依据。1  实验材料1.1  动物选用9日龄雌性sd大鼠60只,出生后母鼠哺乳至22日龄断奶。断奶后按清洁级标准由专人饲养。随机分为正常组和实验组,正常组为10只,实验组为50只。动物和饲料由湖南中医药大学实验动物中心提供。1.2  药物     补肾活络方由淫羊藿15 g、菟丝子20 g、红花4 g、茺蔚子20 g、蛇床

8、子3 g、牛膝6 g、枸杞子20 g、路路通15 g、覆盆子20 g、大枣12枚组成,湖南中医药大学病理生理实验室制成11煎液,即每毫升含原药材1 g。消毒,灭菌,4 保存备用。中药材购自湖南中医药大学医林药号。克罗米芬,购自中南大学湘雅医学院附属二医院,批号020502。1.3  试剂和仪器 促卵泡生成激素(fsh)放射免疫药盒,购自北京北免东雅生物技术研究所,批号021125。促黄体生成激素(lh)放射免疫药盒,购自北京北免东雅生物技术研究所,批号021125。4%多聚甲醛(pfa)固定液。80-2型离心机,上海云楼医用仪器厂。ag204型电子天平,瑞士产。leicab

9、iomed双目显微镜,德国产。optimas彩色显微图像分析系统,英国产。2  实验方法2.1  分组及造模参照文献1方法并稍作改进制作asr大鼠模型。连续阴道涂片2个性周期(1个性周期5 d)示阴道上皮无性周期变化,提示无排卵大鼠模型制作成功。经涂片观察,50只参与造模大鼠,其中有32只无性周期变化,保留备用,余18只有性周期变化,剔除。正常组10只注射中性茶油大鼠全部具有有规律的性周期变化,保留备用。按随机数目表法将32只asr大鼠分为模型组(10只)、中药组(11只)、阳性组(11只)。从第80天开始,分别如下给药。按临床用药,以60 kg人为标准,按照体表面积剂量换

10、算法计算大鼠给药剂量。模型组给予12 ml/(kg?d)双蒸馏水灌胃；中药组给予补肾活络方11中药煎液12 ml/(kg?d)灌胃；阳性组给予克罗米芬4.5 mg/(kg?d)灌胃。每天灌胃1次,均连续灌胃28 d(4周)后检测指标。各组连续灌胃28 d后皆断头处死取血,离心后置于4 冰箱中保存待测血清中fsh、lh含量；并剖腹取出双侧卵巢、子宫,记录卵巢、子宫重量。留取卵巢、子宫等组织进行石蜡切片,备用。2.2  指标检测ag204型电子天平称重卵巢、子宫,按电子天平使用说明操作。放免法测定血清fsh、lh,按试剂盒操作指南进行。免疫组化法测定卵泡数及子宫内膜面积,按药盒操作指南进

11、行。2.3   统计学方法计量资料方差齐用方差分析和t检验,方差不齐用秩和检验,组间比较用q检验,计数资料用2检验,所有数据均用spss10.0统计软件处理。3  结果3.1  补肾活络方对模型大鼠卵巢、子宫的影响3.1.1  卵巢、子宫的大体观察  模型组卵巢苍白,表面见卵泡,但卵泡数目少且较小,无黄体；子宫较小,色泽欠红润。正常组和中药组以及阳性组模型大鼠卵巢色泽鲜红,卵泡数目明显多于模型组,卵泡明显增大,表面见较多黄体；子宫外观粗大发紫,子宫肌层明显增厚。3.1.2  卵巢、子宫重量及卵泡数、子宫内膜面积比较(见表1、

12、表2)表1  各组大鼠卵巢、子宫重量比较(略)注：与模型组比较,*p<0.01,*p<0.01；与阳性组比较,p<0.05，表2  各组大鼠卵巢卵泡数目及子宫内膜面积比较(略) 3.2  补肾活络方对模型大鼠内分泌的影响(见表3) 表3  各组大鼠血清fsh、lh水平比较(略) 4  讨论高胰岛素高雄激素无排卵综合征是妇科常见疾病,近年来,我们采用补肾中药治疗此病,证实促排卵率高达60%。许多动物实验和临床报道,肾虚不孕症与性腺轴功能失调关系密切,并通过一系列的动物实验研究了补肾中药对肾虚不孕的作用机制。在形态学上,滋肾阴药能使asr卵巢体积增大,囊性卵泡减少,有多个卵泡发育,黄体出现在半数卵巢中,证明滋肾阴药有明显的促卵泡生长和促排卵效果。其作用机理可能是：滋肾阴药能改善外周胰岛素抵抗,降低血胰岛素水平,使它不能对卵巢发挥过度刺激,卵巢睾酮产量下降,中断高胰岛素与高雄激素的不良循环(此能使垂体分泌lh量不足),从而达到促卵泡发育和促排卵的目的。实验研究证实,asr灌服补肾阳中药后,其垂体、卵巢、肾上腺异常形态均逆转至正常,同时伴随性激素分泌功能正常。提示：肾上腺皮质网状带增生及其细胞增殖活跃的消失,可能与肾上腺11、21羟化酶活性增加相关,使睾酮合成减少,同时黄体对下丘脑促性腺释放激素敏感性增加,fsh、lh分