生物化学课程教学大纲

1、生物化学实验课程教学大纲【课程编号】17315312【英文名称】Experiments of Biochemistry【课程学时】24【适用专业】动物科学一、本实验课程的教学目的和要求生物化学实验既是生物化学理论教学的辅助教程，也是一门动物科学专业重要的专业基础实验技术课程，它具有很强的理论性和实用性。在前导课程无机化学、有机化学和分析化学实验的基础上，生物化学实验体现出生物学实验的特点，为后续课程如动物遗传学、动物营养学、动物微生物学、分子生物学、动物免疫学等实验课程的教学打下基础。通过生物化学实验的教学，使学生达到如下要求：1.在实验过程中生物化学的理论知识进一步验证、巩固、扩充和提高。2

2、.学会正确使用有关生化仪器。3.培养学生在进行生物学实验时的实验过程、结果分析、实验设计和动手实验的能力，培养和提高学生的实验操作技能。4.掌握包括蛋白质、核酸、酶、维生素、脂类和代谢各方面实验方法和技能，掌握离心、滴定、比色、层析、电泳等各种生物化学实验技术。5.培养学生学习兴趣、重视实践、探索进取、吃苦耐劳、团结合作的精神。6.培养科研能力和科学素质，使学生具有严格的科学学风和发现、分析、解决问题的初步能力。二、本实验课程与其它课程的关系本实验课程上承无机化学实验、分析化学实验和有机化学实验，下续动物遗传学实验、动物营养学、动物微生物学、分子生物学实验等课程，因此生物化学实验的学习是学生进

3、行其他生物学实验的前奏，是今后开展动物科学方面实验和研究的基础。三、实验课程理论教学内容安排（共安排4学时）第一部分 生物学实验与化学实验的主要区别（0.5学时）【目的】通过各个具体实验内容的讲授和操作，使学生熟悉生物学实验与化学实验的主要区别。【要求】1、了解实验的生物学性质和化学性质。2、理解空白（对照）的含义。3、掌握生物学实验与化学实验的主要区别。【教学内容】通过肝糖原的提取与鉴定、维生素的测定等实验掌握生物学实验与化学实验的主要区别。第一节 空白（对照）实验的含义第二节 空白（对照）实验的设定【教学重点】空白实验的意义。【教学难点】设计空白实验。第二部分 比色测定的方法与原理（2.5

4、学时）【目的】通过对各种物质的比色测定，熟悉比色测定的方法与原理。【要求】1、了解分光光度计的使用。2、理解实验结果的处理。3、掌握比色测定的方法与原理。【教学内容】通过血糖、血清蛋白质、血清总脂、血清胆固醇等的测定，掌握比色测定的方法与原理。第一节 关键溶液的分析与配制；第二节 比色过程的分析；第三节 结果处理方法的选择；【教学重点】实验结果的处理。【教学难点】实验结果的数据分析。第三部分 电泳的方法与原理（1.0学时）【目的】通过电泳实验的理论讲授，熟悉电泳的原理、电泳的结果分析和过程中的关键步骤。【要求】1、了解电泳的原理。2、理解实验结果的分析。3、掌握电泳过程中的关键步骤。【教学内容

5、】通过醋酸纤维素薄膜电泳、琼脂凝胶电泳分离血清蛋白质，掌握电泳的方法与原理。第一节 电泳材料的前期处理；第二节 电泳过程中的关键步骤；第三节 电泳结果的分析；【教学重点】电泳的操作过程。【教学难点】电泳过程中的关键步骤。四、实验内容安排1、实验项目的类型及性质序号实验名称学时类型性质验证综合设计演示必做自选1肝糖原的提取与鉴定32维生素C含量测定及其分析63肝组织的生酮作用44比色法测血糖45血清胆固醇含量的测定46酶活性的测定67血清总蛋白的测定48血清总脂的测定69电泳分离血清蛋白410DNA的提取及含量测定611核酸浓度的测定312亲和层析分离乳酸脱氢酶8实验学时数合计585206019

6、39实验项目数合计1211010572、实验项目说明实验一、肝糖原的提取与鉴定【目的要求】通过对肝糖原的提取，验证肝糖原的提取方法和重要的鉴定特点。了解糖原的提取方法和分离措施,了解空白实验的意义，掌握糖原的性质。【内容】肝糖原是糖在动物体内的重要贮存形式，在代谢过程中是体内糖的重要来源之一。其合成与分解对血糖的调节起重要作用。糖原是高分子化合物，分子量约400万，微溶解于水，无还原性，与碘作用生产红色物质。糖原的水解产物为葡萄糖，在碱性条件下可将Cu2+还原为红色的CuO。【方法】乙醇提取法。实验二、维生素C含量测定及其分析【目的要求】要求学生在已掌握生物化学基础知识、基本理论和基本实验技能

7、的基础上，在教师指导下，根据实验室条件，完成选题、实验设计、实验准备、实验实施和实验论文撰写等全过程。培养学生动手能力、分析解决问题的能力和创新思维。通过对维生素C的提取和定量，掌握维生素C的提取方法，熟悉定量分析时空白（对照）实验的意义以及对照实验的设计方法。【内容】维生素C广泛存在于植物中，其存在形式有还原型维生素C（抗坏血酸）和氧化型维生素C（脱氢抗坏血酸），新鲜的样品中以还原型维生素C含量最高。维生素C很不稳定，对碱、热、光、氧、金属离子等敏感，很容易遭到破坏。在中性和微酸性条件下稳定，因此实验中常用草酸、三氯乙酸、醋酸等来提取样品中的维生素C。【方法】组织粉碎提取、研钵提取，碘指示，

8、2,6-二氯酚靛酚实验三、肝组织的生酮作用【目的要求】通过对酮体的测定和检定，熟悉酮体的性质和代谢过程，掌握酮体的产生和检定方法。【内容】脂肪酸在肝组织中，经过-氧化生成乙酰-CoA，乙酰-CoA可缩合成酮体（乙酰乙酸、-羟丁酸和丙酮，除丙酮外，酮体可以作为组织器官特别是大脑的高效率能量供给者。酮体中的乙酰乙酸可以与检酮粉生成紫红色物质，来检测肝匀浆生成酶系产生的酮体，同时肌肉组织中没有酮体生成酶系，不产生酮体。【方法】酮体检测法。实验四、比色法测血糖【目的要求】学生通过血糖的测定，掌握血糖的提取和测定方法，了解原材料的处理过程，掌握分光光度计的使用方法及其注意事项。【内容】血液中葡萄糖含量的

9、稳定，对动物是非常重要的，这表现在学糖的恒定。血糖含量的变化，是动物重要的病理指标。血糖测定的方法很多，本实验采用福林法测定，由于有其他还原性物质的影响，得到的结果比实际的稍高，但可以剔除这些影响，推测正确的结果。【方法】蒽酮法、福林（Follin）酚法实验五、血清胆固醇含量的测定【目的要求】通过胆固醇的测定，熟悉胆固醇的性质，掌握胆固醇的提取和测定方法，进一步熟悉分光光度计的使用和数据的处理。【内容】胆固醇是环戊烷多氢菲的衍生物，它不仅参与血浆脂蛋白的形成，而且是细胞的必须结构成分，它可以参与神经纤维绝缘性结构的形成，也合成胆汁酸盐、皮质激素和性激素，是血液中的重要物质。胆固醇在血液中可以游

10、离存在，也可以与载脂蛋白形成胆固醇脂，这两种形式的胆固醇统称为总胆固醇。在实践中，甲状腺机能减低症、严重糖尿病、动脉粥样硬化、黄色瘤病、糖原累积症、肥大性关节炎和脂血症等都引起胆固醇增多。【方法】邻苯二甲醛法、香草醛法、硫磷铁法等。实验六、酶活性的测定【目的要求】通过对酶活性的测定，了解酶活性的测定原理，掌握脂肪酶、酯酶活性的测定方法，理解酶活力和比活性含义的意义。【内容】酶与底物反应后，对底物或产物的测定来定量酶的活性。如脂肪酶水解脂肪，产生的脂肪酸可用标准的碱溶液进行滴定而测定脂肪酶的活力。酯酶可将乙酰-2,6-二氯酚靛酚水解为2,6-二氯酚靛酚，测定2,6-二氯酚靛酚的含量即可测出酯酶的

11、活力。【方法】比色法、层析法；实验七、血清总蛋白的测定【目的要求】本实验采用考马斯亮蓝法测定血清中的蛋白质含量。通过实验，了解蛋白质的性质，熟悉蛋白质的测定方法、比色原理。【内容】蛋白质是一切生物体内的重要组成部分，是二十余种氨基酸以肽键相互连接而成的复杂高分子化合物，在水溶液中形成亲水胶体。血浆中主要含清蛋白、球蛋白和纤维蛋白，血清中则主要是清蛋白和球蛋白。【方法】凯氏微量定氮法、酚试剂（格林勃Greenberg法）、双缩脲法、紫外吸收法、考马斯亮蓝法等。实验八、血清总脂的测定【目的要求】通过总脂的测定，熟悉血清脂类的组成和性质，掌握处理血清样品的基本技能和测定血清总脂的方法。【内容】脂类化

12、合物是人类、动物和植物组织的基本组成成分和氧化供能物质之一，它包括真脂和类脂两大类。【方法】分光光度法实验九、电泳分离血清蛋白【目的要求】通过电泳操作，了解采用各种支持物电泳分离血清蛋白质的原理和方法，掌握电泳的基本技能和关键操作步骤。【内容】电泳技术是重要的生物学技术，它将分离混合物和定量测定结合起来。电泳的方法很多，有显微电泳、区带电泳和自由界面电泳，其中的区带电泳的应用很广泛。区带电泳按支持物的不同又有滤纸及其他纤维薄膜（玻璃纤维、聚氯乙烯纤维、醋酸纤维素）、粉末电泳（纤维素粉、淀粉、玻璃粉等）、凝胶电泳（琼脂、聚丙烯酰胺凝胶、硅胶、淀粉凝胶等）和线丝电泳（尼龙线、人造丝等）。从对象看，

13、电泳分离血清蛋白质、同工酶（乳酸脱氢酶）、核酸的水解产物等。【方法】醋酸纤维素薄、凝胶电泳。实验十、DNA的提取与定量测定【目的要求】了解DNA的性质与提取特点，掌握DNA的提取（盐沉淀提取）方法以及测定DNA含量的原理和方法。【内容】可选择猪脾脏、猪心、肝脏等。1、制备组织匀浆；2、除去蛋白质提取DNA；3、用紫外吸收法、定磷法或化学法测定DNA的含量和纯度。4、Folin-酚试剂法测定蛋白质含量。【方法】猪脾脏、猪心、肝脏等原料中提取DNA并进行定量测定。实验十一、核酸浓度的测定【目的要求】通过测定核酸浓度，掌握核酸的紫外吸收特性和测定核酸浓度的原理和方法。【内容】钼酸铵与核酸中的磷酸生成

14、磷钼酸，当有还原剂（如抗坏血酸存在时，磷钼酸被还原为蓝色的钼蓝，在660nm处有最大的光吸收而测定出核酸的含量。另外，核酸在260nm的紫外处有最大的光吸收，因此可用紫外比色法测定核酸的含量。【方法】定磷法、紫外分光光度比色法；实验十二、亲和层析分离乳酸脱氢酶【目的要求】通过乳酸脱氢酶的分离，掌握分离猪骨骼肌中乳酸脱氢酶的方法，熟悉亲合层析的原理。【内容】通过亲和层析剂的制作、亲和吸附与洗脱，了解亲和层析的操作方法。在层析前后对乳酸脱氢酶活性、总蛋白质的测定，来理解亲和层析的特点。【方法】亲和层析法。五、选用教材及主要参考书1、教材动物生物化学实验指导，周顺伍，北京农业大学，中国农业出版社，20002、参考书生物化学实验原理和方法，李建武等，北京大学出版社，2002生物化学实验教程，刘箭，科学出版社，2004基础生物化学实验指导，余冰宾，清华大学出版社，2004生化化学实验方法和技术，陈毓荃，科学出版社，2005现代生化技术第二版，郭勇，科学出版社，2005生物化学实验技术俞建瑛等，化学工业出版社，2005基础生物化学实验指导，吕淑霞，中国农业大学出版社，2003基础生物化学实验(第2版)，王秀奇等，高等教育